周金蓉 姚丽霞 苏远

非小细胞肺癌在肺癌整体发病率中占85%，癌细胞扩散速度较慢，但患者早期发病缺乏典型性症状，大多患者确诊时已是晚期，已错过肿瘤最佳治疗时期，导致患者生存期缩短[1]。尽管近年来临床和实验肿瘤学取得了一定进展，但非小细胞肺癌的5年生存率仍处于较低水平[2]。因此，探讨非小细胞肺癌的分子机制，寻找与非小细胞肺癌病情进展程度有关的生物学分子标志物，对改善患者预后具有重要临床意义。微小RNA(microRNA，miRNA)是小的内源非编码RNA，广泛存在于生物体中，可与靶基因mRNA的3’UTR结合实现对靶基因的转录与调控，参与细胞分化、凋亡等生理过程，与肿瘤、炎性反应等病理过程有关[3,4]。相关研究发现，微小RNA-580-3p(microRNA-580-3p，miR-580-3p)可增强转录激活因子3的表达，在黑色素瘤中激活酪氨酸蛋白激酶2/转录激活因子3信号通路，进而促进黑色素瘤病情发展[5]。由此推测，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p表达可能与非小细胞肺癌的病情进展有关。基于此，本研究分析非小细胞肺癌组织中miR-580-3p表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年5～12月于武汉市东西湖区人民医院就诊的非小细胞肺癌患者50例，其中男31例，女19例；年龄45～79岁，平均年龄(61.27±5.36)岁；体重指数(BMI)17.37～26.84 kg/m2，平均(22.17±1.43)kg/m2；病理类型：腺癌32例，鳞癌16例，腺鳞癌2例。患者已阅读理解并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①临床病理组织学确诊为非小细胞肺癌；②TNM分期为Ⅰ～Ⅲ期；③认知功能正常，可配合完成研究。

1.2.2 排除标准：①合并肝癌、胃癌、食管癌等其他恶性肿瘤疾病；②既往接受过抗肿瘤治疗；③伴自身免疫系统疾病；④严重心肝功能不全；⑤合并支气管哮喘、肺结核等其他肺部疾病；⑥既往有精神病史；⑦肿瘤已发生远处转移。

1.3 方法

1.3.2 miR-580-3p检测方法：分别采非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁组织，利用TRIZOL试剂(上海联迈生物工程有限公司)提取组织样本中的 RNA，严格参照逆转录试剂盒(美国Fermentas公司)说明书，依据20 μl的反应体系进行逆转录，合成cDNA，试剂盒。利用实时荧光定量PCR仪(杭州安杰思生物科技有限公司，型号：AGS9600)进行实验，将miR-580-3p、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge

nase，GAPDH)cDNA 实时荧光定量PCR反应体系设置为10 μl ，反应条件设置为：95℃时预变性30 s，95℃时变性5 s，60℃时退火30s，40个循环，重复进行实验3次。将GADPH作为内参基因，并应用2-△△Ct法计算miR-580-3p 的相对表达量。见表1。

表1 引物序列信息

1.3.3 资料收集：性别(男、女)、年龄(<60岁、≥60岁)、体重指数(<28 kg/m2、≥28 kg/m2)、吸烟史(有、无，吸烟指数≥400，吸烟指数=每天吸烟支数×吸烟年数)、肿瘤直径(≤3 cm、>3 cm)、病理类型(腺癌、鳞癌、腺鳞癌)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、淋巴结转移(有、无)。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌组织与癌旁组织中miR-580-3p的表达比较 50例非小细胞肺癌患者中，腺癌32例，鳞癌16例，腺鳞癌2例。腺癌、鳞癌、腺鳞癌癌组织中miR-580-3p相对表达量均高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 非小细胞肺癌组织与癌旁组织中miR-580-3p的表达比较

2.2 非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与不同患者临床资料的关系 TNM分期为Ⅲ期的非小细胞肺癌患者miR-580-3p表达水平依次低于TNM分期为Ⅱ、Ⅰ期的患者，差异有统计学意义(P<0.05)；性别、年龄、BMI、吸烟史、肿瘤直径、病理类型、淋巴结转移等与非小细胞肺癌组织中miR-580-3p表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与不同患者临床资料的关系

2.3 非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与TNM分期的相关性分析 Kendall’s tau-b相关性分析发现，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与TNM分期呈正相关(r=0.362，P=0.001)。

2.4 非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与TNM分期的关系Logistic回归分析 将非小细胞肺癌患者TNM分期作为因变量(1=Ⅰ期，2=Ⅱ期，3=Ⅲ期)，将癌组织中miR-580-3p的表达作为自变量，建立多项Logistic回归模型，以Ⅰ期作为参照，检验非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与非小细胞肺癌患者TNM分期为Ⅱ期、Ⅲ期的关系，结果显示，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p高表达是TNM分期为Ⅱ期、Ⅲ期的危险因子(OR值分别为85.335、515.636，P值分别为0.043、0.001)。见表4。

表4 非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与TNM分期的关系Logistic回归分析

3 讨论

遗传、自身营养状况以及环境等因素均可诱发非小细胞肺癌，可引起患者胸痛、咳血、发热，若不及时治疗，病情不断向严重方向进展，严重影响患者的生存期[6]。手术、放化疗、分子靶向治疗为目前临床治疗非小细胞肺癌的重要治疗手段，已取得较大进展，但部分晚期患者治疗后预后仍旧较差，5年生存率较低[7]。研究指出，非小细胞肺癌患者的预后与肿瘤分期和治疗效果有关，患者治疗方案的选择需依据肿瘤分期[8]。因此，寻找与非小细胞肺癌患者病情发展程度相关的指标，有助于临床制定合理的治疗措施，改善患者预后。

非小细胞肺癌的发展是一个多基因、多阶段的缓慢过程，涉及广泛的分子生物学变化[9]。miRNA是一类由内源基因编码、长度约为22 个核苷酸的非编码单链小RNA分子，在细胞生长、发育、疾病发展过程中起重要的调控作用[10]。miRNA在多种恶性肿瘤组织中异常表达，参与notch、mTOR等多条信号通路的转导，影响肿瘤细胞增殖、转移等生物学行为，且miRNA不易被降解，可作为癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生与发展[11,12]。目前临床在多种恶性肿瘤中发现多种miRNA异常表达情况，如miR-580、miR-580-3p等[13]。研究指出，miR-580在乳腺癌中，能够直接与TWIST1的3’UTR结合，进而抑制肿瘤细胞的迁移[14]。而Li等[15]研究结果显示，miR-580与黑色素瘤的发病机制和发展呈正相关。尽管miR-580的作用已被报道，但目前对miR-580-3p功能的了解十分有限，miR-580-3p为近些年发现的肿瘤相关miRNA之一，参与了多种肿瘤的发生与发展过程。由此推测，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达可能与病情进展有关。本研究中，腺癌、鳞癌、腺鳞癌癌组织中miR-580-3p相对表达量均高于癌旁组织，说明miR-580-3p可能参与了非小细胞肺癌的进展，与Ma等[16]研究结果一致。这可能因为miR-580-3p通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路，增强肿瘤细胞的增殖能力，参与非小细胞肺癌进展[17]。而徐玉红等[18]研究发现卵巢癌组织中miR-580-3p表达低于癌旁组织，这可能与卵巢癌A2780细胞系中ST7-AS1对miR-580-3p的负性把控有关。

Kendall’s tau-b相关性分析显示，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达与TNM分期有关，分析原因在于，miR-580-3p可与靶基因mRNA的3’UTR区域结合，长链非编码RNA催化组蛋白赖氨酸三甲基化，调节组蛋白甲基化酶会导致组蛋白甲基化水平升高，导致靶基因miRNA转录后沉默，进而激活下游第十号染色体同源丢失性磷酸酶基因/白激酶信号通路，促进肿瘤细胞的增殖、转移，促使患者病情不断进展，因而TNM分期较高[19]。因此，检测非小细胞肺癌组织中miR-580-3p的表达有助于评估患者病情程度。

Logistic回归分析发现，非小细胞肺癌组织中miR-580-3p高表达可促进患者病情进展，TNM分期较高。因此，建议临床未来在对非小细胞肺癌患者入院时可尽早测定癌组织中miR-580-3p的相对表达量以反映患者病情进展程度，若miR-580-3p异常高表达，可积极调整治疗方案，以控制患者疾病进展。本研究具有一定的局限性，观察miR-580-3p在非小细胞肺癌组织中的表达时，未设置独立的阴性样本作为对照组进行比较，且本研究获取的组织样本，未对血液样本miR-580-3p表达进行研究，未来还需做进一步探究，既设置独立对照组进行观察，并采集血液样本，观察非小细胞肺癌患者血液中miR-580-3p表达情况。

综上所述，miR-580-3p在非小细胞肺癌组织中呈高表达，其高表达与非小细胞肺癌患者TNM分期有关，有希望成为后期深入研究治疗非小细胞肺癌的新靶点。