高效液相色谱法同时测定食品中5种添加剂

唐 奕

（邵阳市食品药品检验所，湖南邵阳 422000）

摘 要：采用高效液相色谱法同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸等5种添加剂。样品经前处理，使用C18柱，以甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液（7∶93）为流动相，在波长230 nm，流速

1 mL/min，柱温40 ℃的条件下测定。经多次试验，该方法线性关系好，相关系数均在0.999 9以上，平均回收率为82.6%～104.4%，相对标准偏差为1.3%～4.6%。该方法简单、快速、回收率高及精密度好，适用于食品中5种添加剂的同时检测。

关键词：高效液相色谱法;同时测定;食品添加剂

Simultaneous Determination of Five Additives in Food by High Performance Liquid Chromatography

TANG Yi

（Shaoyang Food and Drug Inspection Institute， Shaoyang 422000， China）

Abstract： Five additives including acesulfame potassium， benzoic acid， sorbic acid， sodium saccharin and dehydroacetic acid in food were simultaneously determined by high performance liquid chromatography. The sample was pretreated， using a C18 column， methanol∶0.02 mol/L ammonium acetate solution （7∶93） as the mobile phase， and the wavelength was 230 nm， the flow rate was 1 mL/min， and the column temperature was 40 ℃. After many experiments， the method has a good linear relationship， the correlation coefficient is above 0.999 9， the average recovery rate is 82.6%～104.4%， and the relative standard deviation is 1.3%～4.6%. The method is simple， fast， high in recovery rate and good in precision， and is suitable for the simultaneous detection of five kinds of additives in food.

Keywords： high performance liquid chromatography; simultaneous determination; food additives

食品企业在产品中添加甜味剂（安赛蜜、糖精钠）和防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸），以改善食品的口感、延长保质期[1]。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）对适用范围和限量要求都作出了明确规定[2]。目前这5种食品添加剂使用多个方法标准进行检测，同时测定的报道甚少，造成检验效率低，实验成本高[3]。本试验在GB 5009.28—2016[4]、GB 5009.121—2016[5]、GB/T 5009.140—2003[6]的基础上，优化试验条件，同时测定以上5种食品添加剂，以科学高效保障食品质量安全。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器、配自动进样器）;mini UV超纯水机。

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸，国家标准物质，1 000 μg/mL，北京海岸鸿蒙标准物质技术有限公司;甲醇，色谱纯;乙酸铵、亚铁氰化钾、乙酸锌、硫酸锌和氢氧化钠，分析纯。

试验样品为碳酸饮料、含乳饮料、辣椒酱，市售。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）;流动相：甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液（7∶93）;流速：1 mL/min;检测波长：230 nm;柱温：40 ℃;进样量：10 μL。

1.2.2 标准溶液配制

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准中间溶液（250 μg/mL）：分别准确吸取12.5 mL安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸标准储备溶液（均为1 000 μg/mL）于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准系列工作溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准中间溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL于10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成质量浓度分别为25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL和125 μg/mL的混合標准系列工作溶液。

1.2.3 流动相比例

试验选用甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液作为流动相，分别采用5∶95、7∶93、10∶90这3种不同的比例进行混合标准溶液的测定。

1.2.4 样品预处理

称取约2 g碳酸饮料于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，超声20 min，加水定容至刻度，过0.22 μm滤膜，待测[3]。

称取约2 g含乳饮料、辣椒酱于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，超声20 min，冷却至室温，加沉淀剂以沉淀蛋白质，混匀，加水定容至刻度，于8 000 r/min离心，取适量上清液过0.22 μm滤膜，待测。本次试验选用两种沉淀剂进行比较测定：沉淀剂1为亚铁氰化钾溶液（106 g/L）+乙酸锌溶液（220 g/L）各2 mL;沉淀剂2为硫酸锌（120 g/L）+氢氧化钠（20g/L）各2 mL。

2 结果与分析

2.1 流动相比例的确定

流动相比例的变化直接影响分离效果、出峰时间和顺序，结果显示甲醇∶乙酸铵溶液比例为5∶95时30 min全部分离，分离效果好，具体情况见图1;比例为7∶93时25 min全部分离，分离效果好，具体情况见图2;比例为10∶90时20 min全部分离，分离效果欠佳，出峰顺序略有改变，糖精钠在山梨酸前面出峰，两个峰略有重叠，当样品基质复杂时，容易出现杂质与目标物质分离不开，影响测定结果，具体情况见图3。综合考虑，本试验选择甲醇与乙酸铵的比例7∶93进行检测。

2.2 混合标准曲线的线性关系

按1.2.1条件进行混合标准系列工作溶液的测定，以保留时间和峰面积对浓度分别进行线性回归，5种添加剂在25～125 μg/mL范围内呈现良好的线性关系，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸相关系数分别为0.999 9、1.000 0、1.000 0、0.999 9和0.999 9。

2.3 加标回收率的测定结果

按本方法进行样品制备，分别在试样中加入5.0 mL安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸（50 μg/mL）混合标液（理论加标量为0.25 mg），根据样品类别分别预处理后按1.2.1条件进行测定，做2个平行样。其中，含乳饮料和辣椒酱采用2种沉淀剂进行前处理，然后测定。同时做样品空白。

表1～表3结果显示，5种添加剂的平均回收率为82.6%～104.4%，相对标准偏差为1.3%～4.6%。表2、表3结果显示，2种沉淀劑回收率、精密度均达到理想效果。

3 结论

本文建立了同时测定食品中5种添加剂的高效液相色谱法，该方法简单快速，分离效果好，回收率高，精密度好，提高了检测效率，降低了检验成本。选用的2种沉淀剂（亚铁氰化钾溶液+乙酸锌溶液、硫酸锌+氢氧化钠）回收效果好，均适用于样品中蛋白质的沉淀处理。

参考文献

[1]袁文新.超高效液相色谱法测定烘焙类食品中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸[J].卫生研究，2015，44（4）：681-683.

[2]国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.

[3]杨红梅，刘艳琴，殷晓燕.高效液相色谱法同时测定食品中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸[J].食品科技，2007（10）：213-214.

[4]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定：GB 5009.28—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[5]国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定：GB 5009.121—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[6]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.饮料中乙酰磺胺酸钾的测定：GB/T 5009.140—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.

作者简介：唐奕（1968—），女，湖南邵阳人，本科，工程师。研究方向：食品检验与质量管理。