钟前硕 张小敏 莫伟

关键词：多重PCR靶向二代测序;脑肿瘤术后;颅内感染;阳性率

【中图分类号】R651.1 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）08--01

颅内感染是脑肿瘤术后的常见并发症，其临床症状并不典型，通过传统细菌培养所需的检测周期长，待确诊时多已错过最佳治疗时期。随着分子诊断技术的不断提升，多重聚合酶链式反应（PCR）靶向二代测序以其快速、便捷、检测范围广等优势被大量应用于重症感染等疾病的早期诊疗和用药指导中[1-2]。基于此，本院选取60例脑肿瘤术后颅内感染患者进行研究，分析多重PCR靶向二代测序检测脑肿瘤术后颅内感染病人的阳性率，为脑肿瘤术后了颅内感染的早期诊断及用药指导提供更多数据参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年1月至2021年12月于本院行脑肿瘤手术治疗后颅内感染患者60例作为研究对象。纳入标准：①病原学检测结果符合颅内感染的诊断标准[3]，且均为细菌感染;②均因脑肿瘤行颅脑手术治疗;③患者及家属知情且同意参与研究。排除标准：①其他因素所致的颅内感染;②合并其他全身感染性疾病;③近期服用抗菌类药物;④合并免疫功能障碍。其中男性37例，女性23例;平均年龄（49.32±5.77）岁。

1.2 检测方法

所有患者均行多重PCR靶向二代测序及常规细菌培养。常规细菌培养：应用无菌技术取患者脑脊液3ml进行细菌涂片染色、病原菌培养及鉴定。多重PCR靶向二代测序：取患者脑脊液3ml，提取核酸并应用QIAseq ultralow Input Library Kit构建文库，应用IlluminaMiniSeq/NextSeq测序平台进行测序。

1.3 观察指标

①不同检测方式检测时间：比较多重PCR靶向二代测序及常规细菌培养的检测时间。②多重PCR靶向二代测序检测阳性率及对病原体检测的准确性：以细菌培养的结果为金标准，分析多重PCR靶向二代测序检测阳性率及对病原体检测的准确性。真阳性：检出致病菌，且与临床症状和细菌培养结果相符;可疑阳性：检出致病菌且与临床症状相符，但与细菌培养结果不符;假阳性：检出致病菌，但与临床症状和细菌培养结果不符;假阴性：未检出致病菌，但细菌培养阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS21.0软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方式检测时间比较

多重PCR靶向二代测序平均检测时间为（5.74±0.79）d，短于常规细菌培养的（1.65±0.54）d（t=33.107，P<0.05）。

2.2 多重PCR靶向二代测序检测阳性率及对病原体检测的准确性

所有患者中，多重PCR靶向二代测序检测的感染阳性率为98.33%（59/60），其中金黄色葡萄球菌14例（23.33%），粪肠球菌例12例（20.00%），大肠埃希菌5例（8.33%），绿脓假单胞菌4例（6.67%），肺炎克雷伯杆菌8例（13.33%），鲍曼不动杆菌16例（26.67%）。以细菌培养结果及临床症状为参照，多重PCR靶向二代测序对病原体检测的真阳性率为88.33%，可疑阳性率为10.00%，假阴性率为1.67%，见表1。

3 讨论

随着医疗技术的不断发展，多数颅脑肿瘤患者经手术治疗后可极大程度延长患者生存期，改善相关症状以提升其生活质量。但因癌肿患者自身抵抗力低下，且后续放化疗及免疫抑制剂的应用会进一步降低机体免疫功能，导致术后颅内感染的发病率显著提升。颅内感染可导致患者颅内压升高，严重者可并发脑疝，需尽早控制以降低致残、致死率，但其疾病表现多缺乏特异性，且常规细菌培养所需的检测时间较长，待临床确诊后多已错过最佳治疗时期。

多重PCR靶向二代测序是近年来分子诊断技术的重点研究方向，主要通过提取临床样本核酸进行多重PCR建库后进行高通量测序，再通过与病源数据库比对和生信分析一次性完成对多种病原体的检测，在急危重症感染的分析诊断中均有一定的应用价值。此次研究中，多重PCR靶向二代测序对颅脑肿瘤术后颅内感染的检测阳性率高达98.33%，对病原菌类型检测的准确性也较高，且检测所用时间明显短于常规细菌培养，说明多重PCR靶向二代测序对颅脑肿瘤术后颅内感染患者的检测阳性率高，且能极大程度的缩短检测时间。传统细菌培养的流程较为复杂，完成菌群培养鉴别至少需要3～5d，且其检测结果易受到用药因素的影响，而多重PCR靶向二代测序直接通过对核酸的提取进行建库、测序和分析，省去冗长的细菌培养过程，且多重PCR靶向二代测序可在同一反应管内对多种病原菌进行同时检测，极大程度的缩短了检测时间，对脑肿瘤术后颅内感染的的早期诊断有较高的应用价值[4-6]。但目前多重PCR靶向二代测序技术无法评估病原菌的耐药情况，因而对抗菌药物的应用仍需结合细菌培养结果进行选择。

综上所述，多重PCR靶向二代测序对颅脑肿瘤术后颅内感染检测的阳性率较高，且检测时间较传统细菌培养更短，对术后颅内感染的早期诊断有较高的参考意义。

参考文献：

[1]周睿姣， 廖品文. 二代测序在颅内感染患者中的临床应用分析[J]. 世界最新医学信息文摘， 2021， 21（70）： 35-37.

[2]陆瀚澜， 隋明星， 赵闻雨， 等. 高通量二代基因测序技术在器官移植术后肺部感染病原诊断的应用观察[J]. 中华器官移植杂志， 2020， 41（7）： 388-392.

[3]中国医师协会神经外科医师分会神经重症专家委员会， 北京医学会神经外科学分会神经外科危重症学组. 神经外科中枢神经系统感染诊治中国专家共识（2021版）[J]. 中华神经外科杂志， 2021， 37（1）： 2-15.

[4]刘雅婷， 宋飞雪， 李鑫，等. 宏基因组二代测序在恶性肿瘤患者伴发颅内感染的临床应用及分析[J]. 兰州大学学报：医学版， 2021， 47（5）： 49-54.

[5]张梦瑶， 任建发， 陈亚南， 等. 脑脊液宏基因组二代测序技术及其在中枢神经系统感染性疾病诊断中的应用进展[J]. 山东医药， 2020， 60（27）： 86-90.

湛江市科技计划项目，项目名称：多重PCR靶向二代测序对脑肿瘤术后颅内感染病人的阳性率

项目编号：210520094540467