吴小勤,，黄宏宝，吴雪铭，苏群英，王兴枝子，龙勤琴，黄小英，龙喜带

【摘要】 目的 探讨G蛋白信号传导调节蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）表达与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）预后的关系。

方法 收集HCC肿瘤组织样本100例，通过免疫组织化学检测RGS6在肿瘤组织中的表达情况，采用Kaplan-Meier生存法和Cox回归模型分析RGS6表达对HCC预后的影响。

结果 肿瘤组织中RGS6表达减少与更高肿瘤分级、微血管侵犯、肿瘤生长、Ki67高分值等病理特征密切相关（P<0.05）;Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示肿瘤组织中RGS6表达减少的患者具有更低的生存率（P=0.027），多因素Cox回归分析均显示具有RGS6表达减少的患者死亡风险增加，具体风险值（HR）为157.747（95%CI=5.769～4313.674，P=0.003）。

结论 RGS6表达是一个影响HCC预后的独立指标，RGS6表达影响HCC预后的可能机制与其影响肿瘤分化、生长、血管浸润等相关。

【关键词】 肝细胞癌;RGS6表达;肿瘤预后

中图分类号：R735.7 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.02.008

Effects of RGS6 expression on the prognosis of hepatocellular carcinoma

[HJ2][HJ]

WU Xiaoqin1a，2， HUANG Hongbao1b， WU Xueming1a，2， SU Qunying1a，2， WANG Xingzhizi1a，2，

LONG Qinqin1a，2， HUANG Xiaoying1a，2， LONG Xidai1a，2

（1a.Clinical Pathological Diagnosis & Research Center，1b. Reproductive Medicine Center， 1. Affiliated Hospital of

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China; 2.Key Laboratory of Molecular

Pathology[Hepatobiliary Diseases] of Guangxi， Baise 533000， Guangxi， China）

[HJ2][HJ]

【Abstract】 Objective To explore association between the expression of regulator of G protein signaling 6 （RGS6） and the prognosis of hepatocellular carcinoma （HCC）.

Methods A total of 100 tumor tissue samples with HCC were collected and the RGS6 expression in these tumor tissues was tested by immunohistochemistry method.The effects of RGS6 expression on HCC prognosis were analyzed by Kaplan-Meier survival method and Cox regression model.

Results The decrease of RGS6 expression in tumor tissues was associated with pathological features such as higher tumor grade，microvascular invasion， tumor growth and higher Ki67 score， etc （P<0.05）. Results from Kaplan-Meier survival method showed that patients with decreasing RGS6 expression in tumor tissues had a lower survival rate （P=0.027）， multivariable Cox regression analysis exhibited that decreasing RGS6 expression increased the death risk of patients， and specific risk value was 157.747（5.769-4313.674， P=0.003）.

Conclusion RGS6 expression is an independent index affecting the prognosis of HCC， and the possible mechanism of which is related to its influence on tumor differentiation， growth and vascular infiltration， etc.

【Key words】 HCC; RGS6 expression; tumor prognosis

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）是消化系统中常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球排名第6位，死亡率位于第4[1]，该肿瘤发病机制复杂，早期诊断困难，无有效的治疗手段。目前，临床上依然以手术治疗为主和化疗为辅，但预后不佳[2]。因此，寻找有效的预后预测标志物仍是当前研究领域有待解决的重要课题。而G蛋白信号传导调节蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）是G蛋白信号传导通路负性调节因子家族的重要成员，具有促进GTP酶活性并加速GTP水解而调节G蛋白信号通路的重要作用[3～4]。近年来，有研究表明RGS6在膀胱癌、胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌等多种肿瘤及中枢神经系统、心血管系统疾病中出现不同程度的表达异常，提示可能参与肿瘤及某些疾病的发生与发展[5～10]。但是，RGS6表达是否影响HCC的预后并不清楚。本研究采用免疫组化检测RGS6在HCC中的表达情况，并根据免疫组化结果探讨RGS6表达与HCC患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集在右江民族医学院附属医院住院进行手术治疗并符合下列入选标准的HCC患者：术前未进行放疗与化疗、病理组织活检确诊为HCC、具有完整的临床病理资料与生存随访资料、具有足够用于免疫组织化学检测的石蜡包埋组织样本。在2016年1月至2021年6月期间，收集到符合入选标准的HCC患者共100例。所有研究对象均接受了生存随访，随访截止日期为2021年6月30日。当前研究获得了病例收集医院的伦理审批同意。

1.2 免疫组织化学检测

RGS6在HCC肿瘤组织中的表达水平通过免疫组织化学方法进行检测分析，其中RGS6抗体购自北京博奥森生物技术有限公司（产品编号：bs-19862R），二抗由迈新生物科技有限公司提供。免疫组织化学检测为标准化检测流程，具体包括检测石蜡组织的脱蜡、水化、抗原修复、抗体孵育、显色分析等过程，为保准实验，每次实验均设立阴性对照与阳性对照，并采用双盲法进行分析。根据染色程度和强度评价RGS6蛋白质的表达量，其中染色强度分为0～3分：无染色为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分;染色程度分为0～3分：阳性细胞数占总检细胞百分比的0～10%、11%～40%、41%～70%和71%～100%分别为0分、1分、2分和3分，以染色强度与程度的乘积作为RGS6表达量。为便于分析，我们以所有样本的RGS6平均表达量5分作为高低表达分组的依据，即≥5分为高表达组，<5分为低表达组。

1.3 统计学方法

所有统计分析通过R软件（version 4.0.3）来完成。计量资料不服从正态分布，采用“中位数（P25，P75）”表示，组间比较采用秩和检验，计数资料采用频数（n）和百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，RGS6表达对HCC预后的影响通过Kaplan-Meier生存法和Cox生存回归模型来分析。检验水准：α=0.05，双侧检验。

2 结 果

2.1 RGS6表达与HCC病理特征的关系

我们首先分析了HCC肿瘤组织中RGS6表达与HCC临床病理特征的关系，结果显示：与具有高RGS6表达的患者相比，低RGS6表达者肿瘤分化程度更低，微血管浸润概率更高（表1），反映腫瘤生长速度的Ki67分值和肿瘤直径也更大（图1和表1）。

2.2 RGS6表达对HCC生存曲线的影响

Kaplan-Meier生存曲线结果显示（图2），与高RGS6表达者相比，低RGS6表达者具有更低的总体生存率，差异有统计学意义（P=0.027）。

2.3 RGS6表达对HCC死亡风险的影响

为了明确RGS6表达是否是一个独立的HCC预后指标，我们完成了多因素Cox生存回归分析，将所有变量纳入分析模型中。结果显示：以高RGS6表达者为参照，具有低RGS6表达的HCC患者所面临的死亡风险增加约157倍（校正HR为157.747，95%可信区间为5.769～4313.674，P值为0.003）。

3 讨 论

RGS6作为一种G蛋白信号通路的负性调控因子，在胚胎发育和细胞分化过程中起重要作用，它的表达失调涉及肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤的演进，在肿瘤的发生与发展进程中起到类似肿瘤抑制基因的作用[11～12]。例如，在结直肠癌中，有研究者观察到RGS6上调具有抗肿瘤作用，在膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌中也有类似发现。并且还有研究发现RGS6参与心血管系统疾病的发生发展[13～18]，因此，我们猜想，RGS6在HCC的发生发展中是否也起到同样或是相似的抑癌作用，我们试图通过实验验证并阐明这一想法。在我们的研究结果中发现HCC肿瘤组织中RGS6的升高与HCC患者的良好预后相关，这种RGS6影响HCC预后不受其他临床病理特征的影响，这说明RGS6是一个影响HCC的独立预后标志物，并且RGS6是HCC的保护因素，在HCC的发生发展中起到限制肿瘤生长的作用。而RGS6调节肿瘤预后的机制却很复杂，可能涉及如下几个方面：① RGS6在肿瘤形成的免疫微环境中通过调节趋化因子、细胞转化及诱导细胞死亡等方式发挥抗肿瘤作用[19～26]。② RGS6能负性调节细胞增殖。我们当前的研究也发现肿瘤组织中RGS6表达与Ki67、肿瘤大小等肿瘤增殖标志相关，表达水平增加可以抑制肿瘤增殖。③ RGS6表达水平高低与HCC肿瘤细胞的分化程度相关，高RGS6表达者具有更高的肿瘤分化，后者与好的肿瘤预后相关。因而，RGS6有望成为HCC预后的新指标和免疫治疗新靶点[27～28]。

总之，我们的研究发现RGS6有统计学意义地影响HCC预后，是一个独立的预后标志物，这种影响也许与RGS6表达调节肿瘤分化与增殖密切相关。值得注意的是我们的研究是基于一个相对较小的样本所获得的结论，它的推广需要通过更大样本和功能性试验加以确认。

参 考 文 献

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（收稿日期：2021-08-26 修回日期：2021-09-12）

（編辑：梁明佩）