王雪

摘要：用液相色谱法检测食品中的食品添加剂，需要进行检测前的准备工作，如流动相过滤脱气处理、高效液相色谱柱压力检测和排气泡处理、色谱柱和样品处理等，样品的分析过程应严格规定，有些设备检测后应妥善处理。

关键词：液相色谱法检测;食品添加剂;准确性

一、引言

食用添加剂可以增强食品的防腐能力，从而提高食品的质量和口感。因此，在许多食品加工过程中，通常会添加一种或几种食品添加剂，如脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠和乙酰磺胺。根据实际需要，上述食用添加剂还可发挥增稠、增甜、防腐、乳化、染色、护色、膨化、增香、漂白、消泡、防结块等多种功能。然而，一些非法生产商为了牟取更多利润，不惜非法添加食品添加剂，严重危害食品安全甚至人类健康。因此，人们必须正确检测食物中的食用添加剂。虽然一般使用液相色谱法进行测试，但是，在实际测试中，可能会由于某些因素而影响最后的测试结果。因此，应当采取更有效的措施，通过增加液相色谱法测定食品中食物添加剂的准确性，从而确定食品安全[1]。

二、液相色谱法原理

液相色谱法是一种以液体为流动相的色谱分析方法。色谱法产生于1906年。当时俄罗斯著名的植物学家zwitt在获得植物色素后，用石油醚分散不同的颜色，在色谱柱上显示出不同颜色的色带，不同的植物色素有不同的色带。色谱法也应运而生。液相色谱的分离机理主要基于混合物中各组分的固定相和流动相之间的亲和力差异。根据固定相的类型和状态差异，液相色谱法分为液-液相色谱法、液-固色谱法和键合相色谱法。近年来，人们在液相柱色谱体系中加入了高压的液体流动系统，使流动相在高压下迅速地流动，以改善分离效率，从而产生了高效液相色谱法。随着食品行业的发展，食品添加剂的品种也日益丰富，但由于食用添加剂成本低，副作用明显，所以目前食用添加剂的滥用现状仍然十分严峻，对食用添加剂进行长期监测已势在必行。液相色谱法就是最常见的食用添加剂监测的方法之一。

二、做好检验前的准备工作

（一）流动相过滤脱气处理

为了用液相色谱法检测食品中的添加剂，首先要进行流动相过滤和脱气处理。一般来说，在样品溶剂和流动相溶液中，直径大于0.45μM的微粒。但是，由于试验中使用的色谱柱内腔非常小，填料也非常小，样品溶液中产生的细颗粒可能会阻碍色谱柱。因此，在试验前后，应对所有样品溶液进行充分过滤，以去除杂质颗粒。流动相的脱气过程也是非常关键的，它可以防止系统中出现泡沫或溢出，避免对泵的正常运行产生负面影响，确保HPLC检测器具有良好的极限灵敏度和稳定性，使测试更加成功。对于低沸点溶液，在处理空气萃取法和沸腾法时，还必须注意溶液挥发引起的成分变化。样品通常通过超声波脱气处理，这可以减少对溶液成分的影响。一般情况下，超声波脱气过程可在20～30分钟内完成。在处理过程中，应注意防止溶剂瓶接触超声波罐的底部和侧壁，导致溶剂瓶破裂和损坏。另外，注意合理调整容器内的液位，不要超过水位太多[2]。

（二）HPLC柱压测试和排气泡试验处理

对HPLC柱压检查，可以确定其工作状况正常。但一旦柱压产生异常情况，则导致测量结果不正确。但通常，在HPLC发生柱压过高的情形较为多见。因此，应该先把保护柱拆下并观测柱压。如果柱压降则可以确定保护柱存在故障;而如果柱压未降，则需要重新进行检查。从HPLC中取出色谱柱，然后观察柱压。一旦柱压没有下降，判断可能是管道堵塞造成的，彻底清洗后继续检测。当色谱柱的入口和出口反向连接时，用超过色谱柱体积十倍的流体冲洗色谱柱，然后观察色谱柱压力。如果柱压力没有降低，继续后续检测。更换色谱柱入口筛板，观察柱压。如果此时柱压降低，则表明其受到样品溶液中杂质颗粒的影响，导致入口筛板堵塞。如果色谱柱压力仍在下降，则必须联系制造商进行维护。HPLC进样装置与保护柱之间可设置在线过滤器，有效避免柱压过高。此外，必须准确去除输液管中的气泡，以提高测量精度。在分析过程中，如果建筑管线中出现气泡，会影响柱压的稳定性。如果图集建筑基线的稳定性不够，可能会形成假峰，影响最终检验结论的正确性。

（三）色谱柱及样品处理

除上述准备工作外，为了确保测试结果正确，还必须进行其他准备工作，如根据测试实验室的环境温度变化了解电流和调节电压波形，确保流动性过滤头、保护杆、泵垫片、止回阀、比例阀等仪表设备完好。检测前，色谱柱必须充分冲洗，并与色谱柱保持平衡。在冲洗过程中，先用80%纯乙腈和高浓度乙醇溶液在30分钟内冲洗，然后用乙腈和高浓度乙醇冲洗约30分钟，最后通过流动相对色谱柱调整平衡，使其达到基线稳定状态。样品必须严格按照相关规范进行处理。一旦样品处理不合格，可能会产生与待测组分结构相似的杂质组分，或未完全分离，最终检验结论较高，或未完全分离纯化，导致最后检验结论偏低。因此，在样品处理中，必须严格遵循有关规范规定，并合理调节样品处理的温度、时间，包括试剂添加的数量和方法等，而对平行样的处理也应该严格依照相同要求进行[3]。

三、严格规范样品的分析过程

（一）定性分析过程

定性分析法步骤比较简单，是利用对同种试样的加标实现。选取不含待测组分的同种试样，将相应浓度标准试样加入，比较各试样的保存时间，进行定性分析技术测量。如果储存时间相同，则将与样品中待测组分浓度相同的等体积标准溶液放入待测样品中进行定量分析。如果加标样品中待测成分存在交叉峰，则应排除待测成分的可能性。如果假设加标样品中待测成分没有交叉峰，则使用标准HPLC溶液对测组分标样、样品、溶液浓度进行测定，并经过混合计算，如果得出结果显示存在着相同的溶液浓度，则确认其为待测组分，如果结果差异很大，则没有待测组分。

（二）定量分析过程

在特定条件下，可通过添加相同体积的标准样品获得相应的声应力值。绘制响应值与标准样品含量的校正曲线。然后对待测样品进行测试，利用校正曲线找出对应待测组分响应值的标准组分浓度范围。如果在测定过程中，待测组的含量低于或低于检测限，则使用标准方法未完成的浓度，并筛选出结果。如果可以浓缩，则应在浓缩后进行试验。如果可以增加取样容量，则应在扩展后进行试验。如果待测成分的含量高于校准曲线的上限，则应在适当稀释后进行试验。因此，在检测苯甲酸、糖精钠和山梨酸的过程中，苯甲酸的检测可能会出现乙酰磺胺峰，而脱氢乙酸的峰可能会出现在糖精钠的前面。

四、结语

针对食品行业中食用添加剂的测定，相应标准较高，应用高效液相色谱仪分析技术，有较好的定性准确度、分辨率高、灵敏度好，可应用于食品检验领域。为逐步达到较高水平的检验规范，并进一步提高液相色谱法检验食物中食用添加剂的准确度，可从检测前的准备工作、取样与分析步骤、以及检测后的数据处理等方面着手，以获得较为精确的检测结论。

参考文献：

[1]液相色谱法检测食品中食品添加剂分析[J]. 刘少梅. 现代食品. 2021（11）.

[2]百草枯合成中间体MPC检测方法的建立与评价[J]. 周浩，温兰兰，张强，刘典典，王佳. 安徽化工. 2021（01）.

[3]提高液相色谱法检测食品中食品添加剂准确性的措施[J]. 夏星. 現代食品. 2018（02）.