尹 皑

(眉山职业技术学院 ， 四川 眉山 620000)

加味乌梅散水提物是由2015版兽药典中乌梅散加减而来，主要由乌梅、黄连、姜黄、诃子、党参、白术和茯苓组成，并通过煎煮后喷雾干燥而成。加味乌梅散方中乌梅具有敛肺、涩肠、生津、安蛔之功效，黄连清热燥湿、泻火解毒，共为君药，具有解热、抗炎、抗菌等药理作用；以苦寒之姜黄、诃子为臣，破血行气，通经止痛，涩肠止泻；党参、白术、茯苓健脾益气、利水渗湿为佐[1]。全方配伍，共奏清热解毒、涩肠止泻、健脾益气之功。为了探讨加味乌梅散更多的药理作用，本试验通过传统的试验方法研究乌梅散水提物的解热、镇痛和抗炎作用，以期为加味乌梅散的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级KM小鼠150只，体重(20±2)g，雌雄各半；SD大鼠60只，体重(160±10) g，雌雄各半，均购自成都达硕实验动物有限公司，许可证号:SCXK(川) 2014—028。专人饲养管理，自由饮食。常规饲养7 d后，根据需要选择健康小鼠、大鼠开展试验。

1.2 试验药物 加味乌梅散水提物，由实验室自制：将中药乌梅150 g、党参150 g、黄连100 g、姜黄100 g、诃子120 g、白术80 g、茯苓80 g粉碎后过10目筛，提取3 次，第1 次加20 倍量水浸泡1 h 后煎煮2 h，第2 次加15倍量水煎煮1.5 h，第3次加10倍量水煎煮1 h，纱布、药棉过滤后合并滤液，在80 ℃下真空减压浓缩至相对密度为1.2 g/mL，得到提取浓缩液。浓缩液4 000 g离心30 min，过滤，滤液喷雾干燥即得(每1 g相当于原生药材10 g)；拜阿司匹灵肠溶片，购自拜耳医药保健有限公司(规格:100 mg/片)。

1.3 主要仪器与试剂 电子天平(型号为JA1003N)，购自上海菁华仪器有限公司；数字温度计(型号为MC-6830L)，购自日本欧姆龙公司；智能热板仪(型号为ZH-YLS-6BS)，购自安徽正华生物仪器设备有限公司；酶标仪(型号为Multiskan FC)，购自赛默飞世尔仪器有限公司；台式离心机(型号为JIDI-4D-WS)，购自广州吉迪仪器有限公司。二甲苯、醋酸、伊文思蓝等生化试剂，均购自成都科飞试剂公司；安琪高活性干酵母，购自安琪酵母股份有限公司。

1.4 试验方法

1.4.1 加味乌梅散水提物对干酵母致大鼠发热影响试验 选择健康SD 大鼠(雌雄各半)60 只，随机分为6个组，每组10 只。分别为对照组、模型组、阿司匹林组及加味乌梅散水提物低、中、高剂量组，同时记录基础温度。对照组与模型组分别按照纯化水1 mL/(100 g·bw)灌胃，阿司匹林组按照100 mg/(kg·bw)灌胃，加味乌梅散水提物低、中、高剂量组按照20、40 mg/(kg·bw)和80 mg/(kg·bw)的剂量灌胃，各组灌胃总容量都按照1 mL/(100 g·bw)进行，1 次/d，连续给药7 d。第7天灌胃结束后，禁食12 h，每只SD大鼠背部按7 mL/(kg·bw)皮下注射20% 酵母混悬液，并测定其注射后1、2、3 h和4 h的肛温，记录体温变化。

1.4.2 加味乌梅散水提物对热板致小鼠疼痛试验 将健康雌性小鼠放入温度设置为(55.0±0.5)℃的智能热板仪内，观察小鼠出现舔后肢或扭头为痛作为指标，记录痛阈值，间隔10 min再测定1次，在5～30 s 出现疼痛反应的小鼠为疼痛试验合格小鼠。选取合格小鼠50只，随机分成对照组、阿司匹林组、加味乌梅散水提物低、中、高剂量组。其中，对照组按0.1 mL/(10 g·bw)灌纯化水；阿司匹林组按100 mg/(kg·bw)灌胃给药阿司匹林，加味乌梅散水提物低、中、高剂量组以大鼠与小鼠等量换算后按照30、 60 mg/(kg·bw)和120 mg/(kg·bw)的剂量灌胃，各组灌胃容量都按照0.1 mL/(10 g·bw)进行，1 次/d，连续给药7 d。测定末次给药后60 min 时的痛阈值(以60 s进行计算)。按照公式(1)计算痛阈提高百分率。

痛阈提高百分率/%=(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值×100%

(1)

1.4.3 加味乌梅散水提物对醋酸致小鼠扭体影响试验 试验取健康雄性KM小鼠50只，随机分为5个组:对照组、阿司匹林组、加味乌梅散水提物低、中、高剂量组，并按1.4.2方法给药。末次给药30 min 后，各组小鼠均按0.1 mL/(10 g·bw) 腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液。观察醋酸溶液注射后20 min 内的扭体反应次数。比较各组的扭体次数，按照公式(2)计算镇痛百分率。

镇痛百分率/%=(对照组平均扭体次数-试验组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100%

(2)

1.4.4 加味乌梅散水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀影响试验 取健康KM小鼠50 只，雌雄各半，分组及给药同1.4.2。于末次给药30 min 后，用二甲苯以0.03 mL/只剂量均匀涂抹小鼠右耳两面致炎。30 min 后处死小鼠，并用打孔器(直径8 mm)对左右耳取样，电子天平称重，按照公式(3)以两耳的重量差表示肿胀度，并按照公式(4)计算肿胀抑制率。

肿胀度=右耳耳片质量-左耳耳片质量

(3)

肿胀抑制率/%=[(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度]×100%

(4)

1.5 统计分析 用SPSS 21.0统计学软件进行显著检验，采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行组间显著性比较，数据以“平均数±标准差”表示，P<0.05 为差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1 加味乌梅散水提物对干酵母致大鼠发热的影响 由表1可知，大鼠皮下注射酵母后，除对照组外，各组平均体温至少升高1 ℃，符合试验要求。各组基础体温和给药前的体温无显著差异(P>0.05)。给药1 h后，模型组的体温比对照组显著提高6.78%(P<0.05)；阿司匹林组的体温比模型组显著降低3.34%(P<0.05)。加味乌梅散水提物低、中、高剂量各组的体温比对照组分别显著提高7.02%、6.45%、6.50%(P<0.05)；与阿司匹林组比较显著提高4.02%、3.46%、3.52%(P<0.05)。给药2 h时，模型组与对照组比较，大鼠体温显著提高5.59%(P<0.05)；阿司匹林组与模型组比较显著降低3.35%(P<0.05)；加味乌梅散水提物低、中、高剂量各组与对照组比较，大鼠体温显著提高5.67%、4.91%、3.32%(P<0.05)；低、中剂量组与阿司匹林组比较显著提高3.54%、2.80%(P<0.05)。给药3 h后，模型组与对照组比较，大鼠体温显著提高5.68%(P<0.05)；阿司匹林组与模型组比较显著降低3.60%(P<0.05)。加味乌梅散水提物仅低剂量组比对照组、阿司匹林组显著提高5.60%、3.66%(P<0.05)；高剂量组比模型组显著降低2.70%(P<0.05)。给药4 h后，模型组仍然显著高于对照组3.80%(P<0.05)；阿司匹林组、加味乌梅散水提物中、高剂量组分别与模型组比较显著降低3.43%、1.74%、2.18%(P<0.05)。

表1 加味乌梅散水提物对干酵母致大鼠发热的影响Table 1 Effect of modified plum powder of water extracts on fever in rats (℃)

2.2 加味乌梅散水提物对热板致小鼠疼痛的影响 由表2可知，各组基础痛阈值差异不显著(P>0.05)。阿司匹林组、加味乌梅散水提物中、高剂量组给药后痛阈值分别比对照组显著提高39.02%、23.41%、24.39%(P<0.05)。各组痛阈提高百分率比较，阿司匹林组显著高于对照组407.77%(P<0.05)、低剂量组263.51%(P<0.05)、中剂量组55.54%(P<0.05)、高剂量组26.88%(P<0.05)；高剂量组显著高于对照组300.19%(P<0.05)、低剂量组186.49%(P<0.05)；中剂量组显著高于对照组226.45%(P<0.05)、低剂量组133.71%(P<0.05)。

表2 加味乌梅散水提物对热板致小鼠疼痛的影响Table 2 Effect of modified plum powder of water extracts on pain induced by heat stimulation in mice

2.3 加味乌梅散水提物对醋酸致小鼠扭体的影响 由表3可知，阿司匹林组、加味乌梅散水提物低、中、高剂量组扭体次数分别显著低于对照组(P<0.05)。阿司匹林组扭体次数显著低于加味乌梅散水提物不同剂量组(P<0.05)。加味乌梅散水提物中、高剂量组分别显著低于低剂量组(P<0.05)。同时，阿司匹林的抑制率最高达到71.26%；加味乌梅散水提物中、高剂量组抑制率比较接近，都远远高于低剂量组。

表3 加味乌梅散水提物对醋酸致小鼠扭体的影响Table 3 Effect of modified plum powder of water extracts on acetic acid-induced writhing in mice

2.4 加味乌梅散水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 由表4可知，各组肿胀度比较，阿司匹林组、加味乌梅散水提物低、中、高剂量组分别显著低于对照组(P<0.05)。阿司匹林组显著低于加味乌梅散水提物各剂量组(P<0.05)。加味乌梅散水提物中、高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05)。阿司匹林组肿胀抑制率最高达63.58%；加味乌梅散水提物中、高剂量组肿胀抑制率接近，都比低剂量组高，呈现剂量依赖性。

表4 加味乌梅散水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响Table 4 Effect of flavoured black plum extract on xylene induced ear swelling in mice

3 讨论

3.1 加味乌梅散水提物解热作用 发热在兽医临床上是最常见的一种症状，引起的原因复杂，主要有环境变化、病毒、细菌、毒素侵害等，会导致畜禽生理机能紊乱甚至造成动物死亡。干酵母致大鼠发热模型是一个经典的发热模型，应用非常广泛，是干酵母所含的荚膜多糖和蛋白质引发的剧烈炎症反应导致。加味乌梅散水提物中乌梅及其制剂对多种细菌有体外抑制作用[2]。王燕枝等[3]已经证实，黄连叶、须、根的浸膏、原粉对酵母致大鼠发热模型有较好的解热作用。诃子、姜黄具有抗菌抗炎作用，这可能是加味乌梅散发挥解热作用的重要原因之一[4-5]。陆俊林[6]采用乌梅散加减方治疗猪传染性胃肠炎，发挥其解热作用。本试验结果也证实了加味乌梅散水提物高剂量组在给药2 h发挥解热作用，大鼠体温开始呈降低趋势，3 h后恢复到正常水平。加味乌梅散水提物对酵母引起的机体发热具有一定的解热作用，与其中的组成成分发挥抗菌和抗炎作用有一定关系。

3.2 加味乌梅散水提物镇痛作用 疼痛是组织损伤以后引起的伤害性感觉，也是一种预警机制，防止机体遭受压迫或进一步损伤。热板法、扭体法是经典发快痛试验模型，常用于筛选中枢镇痛药[7]。加味乌梅散水提物中乌梅组方能有效延长痛阈值[8]；黄连及其成分也能发挥镇痛作用[9]；姜黄的成分姜黄素也有较好的镇痛作用[10]；诃子水提物能延长小鼠痛阈值[11]；白术对热板刺激致痛有较明显的抑制作用[12]。本试验结果显示，加味乌梅散水提物中、高剂量组能显著增加痛阈值，还能抑制醋酸引起的疼痛反应，减少小鼠的扭体次数，说明该水提物对物理、化学刺激疼痛有良好的镇痛作用，主要与组方中乌梅、黄连、姜黄等成分有关。

3.3 加味乌梅散水提物抗炎作用 炎症是具有血管系统的生物机体对损伤因子所发生的复杂的防御机制。加味乌梅散中乌梅能抑制二甲苯所致的耳肿胀[13]；川黄连对化学刺激性溃疡有抗炎作用[14]；姜黄、诃子、白术也能抗急性炎症[11，15-16]。本试验观察加味乌梅散水提物对二甲苯导致渗出、肿胀的影响，结果证实，加味乌梅散水提物低、中、高剂量组均对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有显著抑制作用，对急性炎症有效。

综上所述，加味乌梅散水提物具有一定的解热、镇痛、抗炎作用，且呈剂量依赖性。本试验结果将为加味乌梅散水提物的临床用药提供一定的理论依据。