文│赵明 梁建波 何宇乾 张严琦 尹斐斐 李彦（山东省青岛市动物疫病预防控制中心）

禽白血病是由禽白血病病毒（Avirus leukosis virus， ALV）引起的禽的淋巴细胞白血病、成红细胞白血病、髓性细胞白血病等多种肿瘤性疫病。宿主范围广，不同品种和品系的禽对病毒的感染差别较大。主要流行A、B、C、D、J、K和E亚群禽白血病，且外源性病毒较内源性病毒传染性和致病性强。目前我国很多地方品种鸡均有不同程度的单独或混合感染A、B、J、K亚群禽白血病。

沙门氏菌既可引起人食源性疾病，也可对养禽业造成严重的威胁。鸡白痢既可以水平传播也可以垂直传播，不同日龄的鸡均可感染，雏鸡发病率和死亡率较高，感染后可引起严重的败血症。成年鸡常呈隐性感染，没有明显临床症状，慢性或隐性带菌鸡长期排毒。

目前，禽白血病和鸡白痢是种禽场主要的净化疫病，部分种鸡场存在禽白血病和鸡白痢混合感染情况，而且两种病具有协同致病作用，同时开展两种疫病的净化对提升鸡场生产性能以及健康水平具有重要意义。本研究对青岛市部分种禽场抽样进行了禽白血病P27抗原和鸡白痢抗体检测，以了解青岛市部分种禽场禽白血病和鸡白痢感染和流行情况，为种禽场禽白血病和鸡白痢净化提供数据支持。

一、材料和方法

1.材料。

（1）血清样品。来源于山东省青岛市5个父母代白羽肉鸡场，1个原种鸡场。每个鸡场采集种鸡血清样品200份，共计1200份，血清样品用于鸡白痢抗体的检测。每只鸡血清独立放于无菌EP管中，冷藏保存，运输至实验室。

（2） 蛋液样品。来源于4个父母代种鸡场，每个种鸡场采集蛋液样品200份，共计800份。各吸取种蛋蛋液3～5毫升于无菌EP管中冷藏，运输至实验室。

（3）泄殖腔棉拭子样品。来源于1个父母代种鸡场，采集泄殖腔棉拭子200份。每只鸡的泄殖腔棉拭子独立保存于无菌EP管中，避免污染，冷藏运送至实验室。蛋液和泄殖腔棉拭子用于禽白血病P27抗原ELISA的检测。

2.试剂和仪器。

禽白血病抗原（P27）检测试剂盒购于BioChick，鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原、（弱）阳性血清、（强）阳性血清购于北京中海生物科技有限公司，SPF鸡阴性血清购于青岛立见诊断技术发展中心。酶标仪NanoQuant购置Tecan公司。

3.方法。

（1）禽白血病抗原（P27）检测方法。蛋液在使用前进行两次冻融处理，试验步骤参照说明书进行。

蛋清样品禽白血病抗原（P27）S/P≥0.2，判定为阳性，S/P＜0.2认为阴性；棉拭子样品禽白血病抗原（P27）S/P≥0.3，判定为阳性，S/P＜0.3认为阴性。

（2）鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验方法，采用平板凝集试验检测种鸡血清中鸡白痢、鸡伤寒抗体，具体操作和结果判定参照说明书进行。

二、结果

1.禽白血病抗原（P27）检测结果。抽检的5个种鸡场中，场群阳性率为20%，个体阳性率为0.3%；共有1个鸡场检出阳性，该场禽白血病P27抗原ELISA检测阳性率为1.5%（表1）。

表1 种鸡场禽白血病抗原（P27）检测结果

2.鸡白痢多价染色平板凝集试验结果。抽检的6个种鸡场中，场群阳性率为16.67%，个体阳性率为0.17%；共有1个鸡场检出阳性，该场阳性率为1%（表2）。

表2 鸡白痢多价染色平板凝集试验结果检测结果

三、结论与讨论

我国于1999年，首次在肉鸡中分离到ALV-J病毒，2002年首次在蛋鸡中发现J亚群禽白血病。当今不同品系的白羽肉用型和蛋用型种鸡基本净化了不同亚群的外源禽白血病。目前禽白血病主要影响我国地方品种场和黄羽肉鸡场。2012年，在地方品种鸡中分离鉴定出新的亚群ALV-K。

通过对4个父母代白羽肉鸡场和1个白羽肉鸡蛋用型鸡场抽样进行禽白血病抗原（P27）ELISA检测，个体阳性率为0.3%，场群阳性率为20%。P27抗原为群特异性抗原，在不同亚群之间无明显区别，检测出阳性无法区分是内源性和外源性病毒感染。疫病净化主要针对外源性病毒，内源性禽白血病病毒虽然危害不大但会干扰P27抗原检测的结果。检测到的3份阳性样品，未做进一步进行亚群的鉴定，因此不能确定属于内源性和外源性ALV的感染。可增加每个世代检测的样本类型和数量，采取不同的方法检测，最大程度检测出阳性鸡进行淘汰，加快净化速度。

目前对于鸡白痢无疫苗用于防治，药物治疗易产生耐药性，净化是该病最主要的防控手段。本研究通过鸡白痢平板多价染色平板凝集抗体检测，抽检到的样品兼顾了白羽肉鸡肉用型和蛋用型鸡场、地方品种场以及原种鸡场，个体阳性率为0.17%。结果显示，抽检到的场鸡白痢感染率较低。鸡白痢平板多价染色平板凝集抗体检测作为传统鸡白痢检测方法，操作门槛和灵敏度偏低，该抗原含有09抗原，易与其他D群沙门氏菌发生反应，且阳性率还与个体感染的时间以及体内抗体水平有关。建议使用分离鉴定、ELISA、免疫磁珠等多种方法进行鉴别诊断，防止漏检，造成同群的污染。

开展种鸡场疫病净化，选择净化工作开展较好的公司引进种源，进行隔离检疫监测，降低引种引入风险的发生；加强饲养管理，孵化阶段注意禽白血病等疫病的横向感染问题；尽量在每个世代增加检测数量和次数，坚持检测淘汰；避免使用被免疫抑制性病毒污染的疫苗免疫，增加疫病净化的难度。疫病的净化是一个长期和复杂的过程，养殖场要根据实际制定适合本场的疫病净化方案，坚持检测淘汰，以加快净化进程。