彭 健，王永萍，刘 欣

（贵州中医药大学 基础医学院，贵州 贵阳 550002）

烧烫伤是指人们在生活或工作中被沸水、油烫伤，或者是被火、电、化学药物等灼烧，引起皮肤起泡或深层组织感染、溃烂、形成疤痕，甚至伤及内脏的一种复杂的外科疾病[1]。西医常采用抗生素和手术治疗烧烫伤，虽有一定的疗效，但患者常常出现创面收敛缓慢、耐药菌产生以及机体免疫功能降低等不良反应。由于烧烫伤破坏了皮肤的防御功能，并且大量的坏死组织和细胞在创面生成，容易滋生细菌，造成感染[2-3]。因此，缩短烫伤创面的愈合时间，对于烧烫伤病人的恢复具有重要意义。中医认为烧烫伤属于“火毒、热毒”，常因火毒热气内攻，致皮肉溃烂，加重病情[4]。油桐花（Tung flower）又称桐子花，具有清热、解毒、化瘀、收敛生肌等作用[5]，已有古人用其治疗烧烫伤，常能获得疗效。本实验拟通过观察油桐花水提物对烫伤大鼠创面愈合率及体重的影响，证明其对烫伤创面的促愈作用，为油桐花水提物在临床的推广应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 从长沙天勤生物公司购SPF级Wistar雄性大鼠60只，体质量为（150 ± 15） g。动物许可证：SCXK（湘）2019-0013；实验动物合格证编号：NO.1107262011001163。

1.1.2 药品与试剂 硫化钠（批号：20191210，中国医药集团有限公司）；湿润烧伤膏（批号：13923911455，汕头市美宝制药有限公司）；苏木素染液（批号：C200301，珠海贝索生物技术有限公司）；伊红染液（批号：C200403，珠海贝索生物技术有限公司）。

1.1.3 主要仪器 QE-300型中药粉粹机（浙江屹立工贸有限公司）；YLS-5Q型烫伤仪（山东益延科技有限公司）；KD-BM型包埋机（浙江金华科迪仪器设备有限公司）；YD-335型石蜡切片机（浙江金华科迪仪器设备有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 药材处理 油桐花是大戟科植物油桐Vernicia fordii(Hemsl.) Airy Shaw的花[6]。油桐树在四川南部丘陵地带有广泛分布，油桐花盛开于三月底至四月，新鲜油桐花采自四川省峨眉山市黄湾镇，花和蒂一并采摘，并由贵州中医药大学孙庆文教授鉴定。日光下晒干，用粉碎机将其粉碎，装入密封塑料袋，备用。前期课题组研究证明油桐花活性部位为其水提物。

1.2.2 油桐花水提物制备 精密称取油桐花粉末30 g，装入盛有300 mL蒸馏水的圆底烧瓶，浸泡30 min，恒温水浴锅加热回流2 h，纱布过滤3次，并将纱布中残留的液体压出，即得油桐花水提物浓度0.1 g/mL（低剂量）。按上述方法制得油桐花滤液后倒入蒸发皿中，电炉加热浓缩，制得浓度0.6、0.3 g/mL油桐花水提物，即高剂量、中剂量[6]。

1.2.3 动物造模及给药 参考课题组前期经验[6-7]，大鼠随机分组：正常组（n= 10）、造模组（n=50），适应喂养7 d。20%硫化钠脱背毛，24 h后，造模大鼠腹腔注射10%水合氯醛，充分麻醉后标记烫伤位置，为两耳连线中点后5 cm。YLS-5Q控温烫伤仪设置温度120 ℃，实际温度约90 ℃，3#烫头（约2.5 cm2）紧贴皮肤烫伤18 s。烫伤前设置空调温度为26 ℃，防止大鼠体温过低而死亡。烫伤3 d后，随机选模型大鼠1只剪取烫伤全层皮肤，放入4%多聚甲醛溶液固定，做HE染色与正常组对比，证明造模是否成功。造模成功后再分为模型组、阳性组（湿润烧伤膏组）、油桐花水提物高、中、低剂量组，每组10只，用记号笔标记。分别用棉签蘸取油桐花水提取物高、中、低剂量溶液对创面进行均匀涂抹，每次1 mL，1次/d。阳性组用棉签蘸取湿润烧伤膏均匀涂抹，厚度不超过1 mm，连续21 d，1次/d。正常组和模型组不给药。

1.2.4 取材 用药21 d后剪取正常组皮肤及各烫伤组烫伤全层皮肤组织，放入4%多聚甲醛固定，备用。

1.2.5 指标检测 给药前、给药后每周用相机拍摄各组患处并测量面积和称体重。药物干预21 d后，油桐花水提物对烫伤大鼠创面愈合的影响可用创面大体图片、面积及损伤皮肤HE染色来观察，并进行分析。

1.2.6 统计学方法 用SPSS 25.0软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差±s）表示，多组间比较采用方差分析。以P< 0.05为差异具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 烫伤大鼠模型建立验证

大鼠皮肤烫伤后1 d颜色灰白、肿胀，与正常皮肤分界清楚，之后坏死皮肤逐渐发黑，失水干燥、发硬，表面凹凸不平，坏死皮肤边缘翘起。若造模成功，病理切片可见表皮和真皮大面积坏死、皮下肌纤维变性坏死、炎性细胞浸润、出血等一系列病理改变，见图1。实验过程中对翘起的死皮做清创处理，见创面呈粉红色，边缘有菲薄的新生上皮形成。同时伤口周围正常皮肤收缩，使伤口总面积逐渐缩小，各组创面表现基本类似。以油桐花低剂量组为例，大鼠创面及周围皮肤无红肿，无脓性分泌物溢出。创面由基底部生长的鲜红色肉芽逐渐生长出新生皮肤覆盖创面至完全愈合，符合皮肤创面正常愈合规律。

图1 大鼠造模前后皮肤组织形态学变化（HE，400×）Fig.1 Histomorphological changes of rats skin before and after modeling（HE，400×）

2.2 油桐花水提物对大鼠烫伤创面的影响

烫伤大鼠创面恢复图片，见图2，不同剂量油桐花水提物和湿润烧伤膏对大鼠烫伤创面恢复有明显效果，与模型组比较伤口明显减小。

图2 油桐花水提物对烫伤大鼠创面的影响（大体图片）Fig.2 Effects of aqueous extract of Tung flower on scalded wound in rats (general picture)

2.3 大鼠皮肤组织形态学变化

大鼠皮肤HE染色显示，正常皮肤组织表皮结构完整清晰，角化层明显，复层扁平上皮层较薄，细胞排列整齐紧密；真皮内胶原纤维排列整齐，胞质红染、均匀；皮下脂肪层及肌层结构清晰可见，脂肪细胞及肌纤维排列整齐、致密，体积大小均一，细胞核形态正常。模型组皮肤有大批纤维组织增生及炎性细胞，大批皮下组织变性、坏死。与模型组相比，阳性组和高剂量组皮肤组织损伤区域可见部分胶原纤维交错排列和较多的纤维细胞，少量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，提示皮肤组织损伤修复程度相对最好；低剂量组和中剂量组皮肤组织损伤区域可见较多的纤维细胞，炎性细胞较少，提示皮肤组织损伤修复程度相对较好，见图3。

图3 油桐花水提物对烫伤大鼠皮肤组织病理变化的影响（HE，400×）Fig.3 Effects of aqueous extract of Tung flower on the pathological changes of skin tissue in scalded rats（ HE，400×）

2.4 油桐花水提物对烫伤大鼠体重的影响

大鼠造模后体重增长缓慢。给药14 d后，模型组大鼠体重低于正常组（P< 0.01）；阳性组、油桐花水提物各剂量组体重均高于模型组（P< 0.05）。 给药21 d后，模型组大鼠体重仍低于正常组（P< 0.01）；阳性组、油桐花水提物各剂量组体重均高于模型组（P< 0.01），见表1。

表1 油桐花水提物对大鼠体重的影响（±s，g）Tab .1 Effects of aqueous extract of Tung flower on body weight of rats（±s，g）

表1 油桐花水提物对大鼠体重的影响（±s，g）Tab .1 Effects of aqueous extract of Tung flower on body weight of rats（±s，g）

注：模型组与正常组相比，#P < 0.05，##P< 0.01；其余组与模型组相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

组别 n 给药前 7 d 14 d 21 d正常组 10 208.2 ± 15.9 239.7 ± 12.3 288.6 ± 8.4 329.7 ± 8.4模型组 10 214.7 ± 16.2 242.6 ± 13.1 273.1 ± 10.3##305.8 ± 5.9##阳性组 10 213.4 ± 16.1 240.3 ± 16.8 289.2 ± 9.8** 327.2 ± 10.2**油桐花水提物10 222.6 ± 6.4 252.0 ± 5.4 288.3 ± 4.4** 326.7 ± 3.7**油高桐剂花量水组提物10 221.4 ± 8.5 251.0 ± 9.2 291.6 ± 7.6** 325.7 ± 11.1**油中桐剂花量水组提物10 218.4 ± 14.1 245.3 ± 19.0 284.7 ± 16.4* 321.1 ± 14.1**低剂量组F 1.621 1.561 4.249 18.389 P 0.17 0.194 0.006 0.000

2.5 油桐花水提物对烫伤大鼠伤口面积及愈合率的影响

分别在给药前1 d，给药后7、14、21 d，对伤口创面摄影，并采用描记称重法测定，即烫伤后2 d的创面面积作为烫伤面积，用透明的方格纸铺在烫伤处，描出对应时间的创面面积，按描下的笔迹剪下，以此为模板将质地均匀的硬纸片剪成同样大小，以质量代替面积，创面愈合率（%）=（烫伤面积-各时相点面积）/烫伤面积×100%。

给药7 d后，阳性组和油桐花水提物高、中剂量组比模型组大鼠创面小、愈合率高（P< 0.05、P<0.01）；阳性组比中剂量组创面大、愈合率低（P<0.05）。给药14 d后，阳性组和油桐花水提物各组比模型组大鼠创面明显缩小、愈合率明显升高（P<0.05、P< 0.01）。给药21 d后，阳性组和油桐花水提物各组比模型组创面均明显缩小、愈合率均明显升高（P< 0.01）；中剂量组比阳性组大鼠创面小、愈合率高（P< 0.05），见表2、表3。

表2 油桐花水提物对大鼠伤口面积的影响（±s，cm2）Tab. 2 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound area in rats（±s，cm2）

表2 油桐花水提物对大鼠伤口面积的影响（±s，cm2）Tab. 2 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound area in rats（±s，cm2）

注：与模型组相比，#P < 0.05，##P< 0.01；与阳性组相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

组别 n 7 d 14 d 21 d模型组 10 1.77 ± 0.10* 1.01 ± 0.14* 0.56 ± 0.11**阳性组 10 1.62 ± 0.18# 0.86 ± 0.15# 0.22 ± 0.11##油桐花水提物10 1.49 ± 0.16## 0.81 ± 0.16## 0.27 ± 0.11##高剂量组油桐花水提物10 1.37 ± 0.12##* 0.76 ± 0.06## 0.11 ± 0.05##*油中桐剂花量水组提物10 1.66 ± 0.18 0.89 ± 0.15# 0.34 ± 0.11##低剂量组F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

表3 油桐花水提物对大鼠伤口愈合率的影响（±s，%）Tab. 3 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound healing rate of rats（ ±s，%）

表3 油桐花水提物对大鼠伤口愈合率的影响（±s，%）Tab. 3 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound healing rate of rats（ ±s，%）

注：与模型组相比，#P < 0.05，##P< 0.01；与阳性组相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

组别 n 7 d 14 d 21 d模型组 10 29.24 ± 4.06* 59.76 ± 5.86* 76.56 ± 5.99**阳性组 10 35.20 ± 7.38# 65.44 ± 5.99# 91.04 ± 4.32##油桐花水提物10 40.60 ± 6.19## 67.60 ± 6.59## 89.20 ± 4.49##高剂量组油桐花水提物10 45.36 ± 4.80##* 69.64 ± 2.20## 95.68 ± 2.17##*中剂量组油桐花水提物10 33.80 ± 7.21 64.48 ± 6.36 86.32 ± 4.42##*低剂量组F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

3 讨论

在本研究中，给药21 d后，正常组大鼠体重最重，模型组体重最轻，阳性组、油桐花水提物各组体重与正常组差异不明显；与模型组比较，差异明显，这表明油桐花水提物能快速恢复烫伤大鼠体重。比较各组大鼠创面面积，油桐花水提物中剂量组创面面积最小，模型组创面面积最大，油桐花水提物各组与模型组相比，差异明显；而油桐花水提物各组与阳性组相比，差异不明显，这表明给予油桐花水提物后，能够有效促进烫伤大鼠创面愈合。通过测量比较各组愈合率，中剂量组最高，阳性组次之，模型组最低。油桐花水提物各组与模型组相比，差异明显；而油桐花水提物各组与阳性组相比，差异不明显，这表明油桐花水提物外用后，能够提高烫伤大鼠创面愈合率。

烫伤后大鼠健康状态恶化，疼痛导致体温下降，活动度降低，饮食和饮水量下降导致体重增长缓慢，烫伤部位焦痂形成疤痕，严重者创面缺血坏死、感染、溃烂[8-10]。由此可见，皮肤组织损害是烧烫伤造成的直接后果[11]，创面组织细胞缺血缺氧、感染、坏死导致病情恶化，病程延长[12-13]。油桐花通过抗炎镇痛、清热解毒、收敛生肌的作用机理，可缩短烫伤病程，减少疤痕形成[14]。李金凤等[6]通过研究油桐花水提取物干预烫伤大鼠Bcl-2、Bax表达发现，油桐花水提物可抑制细胞凋亡，改善创面缺氧环境，促进烫伤创面修复。张世凤等[5]采用不同溶剂提取油桐花有效成分的研究发现，水提物效果最优，镇痛作用最持久。

本研究表明油桐花水提物能减轻烫伤大鼠的疼痛，提高食欲，恢复其正常活动，效果与阳性药物相当。油桐花水提物给药后，大鼠体重增加较快，创面愈合较快，各剂量组都有不同程度的效果，尤其以中剂量效果最好，说明油桐花水提物对烫伤具有明显的促愈作用。

4 结论

油桐花水提物可促进烫伤皮肤组织损伤修复，快速恢复烫伤大鼠体重，收敛创口，加快创面愈合速度，缩短疗程。油桐花水提物浓缩后与浸膏相似，可在创面形成保护膜，隔绝氧气、细菌，起到抗炎、消肿止痛、保湿、收敛伤口的作用。油桐树易推广种植，经济实用，且油桐花水提物提取工艺简单，便于临床开发应用，有利于发挥中医药特色作用。但油桐花有小毒，如何将油桐花水提物中的毒性成分去除，以保证高效安全，且水提物不宜长时间存放，如何延长保质期，以及水提物中含有多少单体成分和具体分子作用机制，都是下一步研究的方向和要解决的问题。