陈龙 王佳陪 王敏 买莉 张萍

【摘 要】目的：分析宫颈HPVE6/E7mRNA检查在宫颈癌筛查中与宫颈HPV-DNA检查在宫颈癌筛查中的区别。方法：采集1084例宫颈HPVE6/E7mRNA标本，检测HPVE6/E7mRNA，同时检测HPV-DNA；以病理活组织病理检查为标准，对宫颈HPVE6/E7mRNA及宫颈HPV-DNA进行，敏感性、特异性及KAPPA值等进行对比，并对结果进行统计学分析。结果：以病理活组织病理检查为标准，839例二个分组中，HPVE6/ E7mRNA与HPV-DNA结果差别均无统计学意义，HPVE6/E7mRNA对于查出宫颈高级别以上病变优于HPV-DNA，而在筛出宫颈低级别以上病变略差于HPV-DNA。结论：宫颈癌筛查中检测HPVE6/E7mRNA对于宫颈癌筛查具有一定的临床意义，是HPV-DNA检查的补充。

【关键词】宫颈癌筛查；HPVE6/E7mRNA；HPV-DNA

研究发现，人乳头瘤病毒（humanpapillomaviruse，HPV）是引起宫颈癌和宫颈癌前病变的罪魁祸首。因此，对于HPV的检测是对宫颈病变筛查的常见手段。HPV病毒的基因片段包括L区和E区，其中E6/E7是致癌基因，HPV通过产生E6/E7蛋白抑制细胞P53和Rb通路促使细胞无规则生长，导致病变发生。而从基因DNA到能实施作用的蛋白质，必然经过mRNA的介入。因此，采用HPVE6/E7mR NA检测是否存在致病性更合理，从而提示病毒活动度及致癌风险。本研究旨在分析高危人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA检测在宫颈癌筛查中的意义及与HPV-DNA检查中的区别。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2016年10月至2020年6月在银川市妇幼保健院宫颈细胞学刮取标本共1084例，进行HPVE6/E7mRNA检查，并行HPVDNA检查，其中839例行活组织病理学检查。整体选取患者年龄18岁～77岁，平均年龄（39.13±22.39）岁。

1.2 分组

第一分组：对于活检高级别及癌症分为阳性组，活检低级別及炎症分为阴性组。第二分组：对于活检为低级别、高级别及癌症为阳性组，活检为炎症分为阴性组。

2 方法

2.1 mRNA检测

将宫颈刮取标本，以3000转/分，离心5分钟，去上清液，用2毫蒸馏水清洗后再离心，去上清液，加入裂解剂，65℃水浴30分钟，得到裂解液。将裂解液加入2.5mol/LNaOH，55℃水浴30分钟，加入终止反应液终止反应，放95℃加热5分钟。2）RNA检测：从前述已制备好的标本裂解液中取出实验所需量，根据10：1（标本量：2.5mol/LNaOH）的比例加入2.5mol/LNaOH，55℃水浴30分钟，加入终止反应液，95℃的温箱水浴中加热5分钟，并信号放大及加入荧光染色，再放入冷光仪分析得出结果。

2.2 DNA检测

1.使用宫颈脱落细胞采集器采集的样本提取800ul～1000ul，按顺序加入到离心管中，并在离心管盖上标明编号。2.把离心管放入高速离心机，13000转/分钟 ，离心三分钟。3.吸掉上清，加入500ul细胞保存液，振荡重悬细胞直至细胞完全散开，上高速离心机离心三分钟。4.吸掉上清，加入细胞裂解液50ul，充分振荡重悬细胞，煮沸10分钟（此过程上清尽量吸干净）。5.将煮沸的样本上高速离心机13000转/10分钟，保留上清备用。6.从试剂盒中取出PCR混合液，室温下避光解冻，解冻后将DNA聚合酶（0.5ul）分别加入到每管试剂中，振荡混匀，离心8000转/10s。7.将配好的扩增试剂充分混匀，8000转/分钟10s，然后取18ul分别加入到所对应的八连管中盖好盖。8.在对应的PCR反应管中分别加入处理好的标本。9.放入荧光PCR检测仪内。按设置好的程序运行，并记录结果。

2.3 统计学方法

所有数据进行检验。不同病理级别E6E7mRNA及HPVDNA检出率差别采用配对2χ检验。并计算诊断敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值等由SAS9.0软件编程计算。检验水准α=0.05。

3 结果

3.1 HPVE6/E7mRNA阳性率为56.73%，HPV DNA阳性率为42.31%。

3.2 在第一组中HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA的阳性对比，见表1。

3.3 在第二组中HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA的阳性对比，见表2。

3.4 在第一分组中HPVE6/E7mRNA灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值、KAPPA值、约登指数及诊断符合率分别为92.58%，56.72%，95.32%，44.54%，0.37，0.49，66.51%，而HPV-DNA灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值、KAPPA值、约登指数及诊断符合率分别为57.21%，63.28%，79.75%，36.90%，0.17，0.20，61.62%。

3.5 在第二分组中中HPVE6/E7mRNA灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值、KAPPA值、约登指数及诊断符合率分别为64.45%，58.51%，45.45%，75.42%，0.21，0.23，62.46%，而HPV-DNA灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值、KAPPA值、约登指数及诊断符合率分别为52.60%，78.01%，45.45%，82.54%，0.26，0.31，61.14%。

4 讨论

4.1 在不同组中HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA结果的差异均无统计学意义。

4.2 第一分组中HPVE6/E7mRNA与HPV-DNA结果对比发现HPVE6/ E7mRNA从灵敏度、阴性预测值、KAPPA值及约登指数均高于HPV- DNA，而特异性及阳性预测值两者差别不大，第一分组是将小于等于低级别病变与高于且等于高级别病变分开，所以对于宫颈高级别病变的检出HPVE6/E7mRNA检查要优于HPV-DNA检查。

4.3 第二分组中HPVE6/E7mRNA与HPV-DNA结果对比中发现。HPV-DNA从特异性、阳性预测值、KAPPA值及约登指数均高于HPVE6/ E7mRNA，而灵敏度HPVE6/E7mRNA高于HPV-DNA，阴性性预测值两者差别不大，第二分组是将炎症与高于且等于低级别病变分开，所以对于宫颈病变的检出检查HPV-DNA要优于HPVE6/E7mRNA检查。

综上所述，HPVE6/E7mRNA及HPV-DNA做为宫颈病变的筛查方法，在检出宫颈高级别及以上病变中HPVE6/E7mRNA更具优势，而HPVDNA在检出宫颈病变中更具优势。因此，HPVE6/E7mRNA检查是HPVDNA很好的一个补充。

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