吕兴祥

摘要目的：建立超高效液相色谱-质谱连用法测定卡泊三醇原料药中催化剂四丁基氟化铵残留量的方法。方法：色谱柱为Waters HILIC （2.1mm×100mm，1.7μm），流动相：乙腈-0.01mol·L-1甲酸铵（PH3.0）80：20，流速0.3mL·min-1，通过UPLC-MS电喷雾离子源正离子模式进行检测。结果：本法线性范围为0.0042～0.0419μg·mL-1（r=0.9992）;检出测限为0.1ng·mL-1，定量限为0.2ng·ml-1;回收率为90.9%。结论：本方法操作简便，结果准确，可以用于原料药卡泊三醇中催化剂四丁基氟化铵的含量测定。

关键词：催化剂 四丁基氟化铵 UPLCMS

卡泊三醇，分子式C27H40O3，是维生素D的衍生物，能够与细胞表面VD3受体结合调控细胞内DNA和角蛋白合成，抑制皮肤细胞的过度增生和诱导分化，从而纠正银屑病皮肤细胞的增生及分化异常。同时能够调节细胞炎性因子的释放，起到抗炎作用。卡泊三醇是目前治疗局限性银屑病最有效的非糖皮质激素外用药之一，对于头皮等特殊部位的银屑病治疗效果更佳。在卡泊三醇的合成过程中，二甲基叔丁基硅醚（TBDMS）作为必要的羟基保护剂，在合成的最后都会利用四丁基氟化铵（TBAF）脱去TBDMS而得到卡泊三醇。

随着药品安全意识的不断提高，国家不断加强药品的监管力度，对于杂质的监控也跟家严格。在有机合成中TBAF常被用为硅醚保护基团的去保护试剂，也经常被用为相转移催化剂以及温和的有机碱，其对机体有一定的毒性和刺激性，需要特别控制。由于TBAF在成品中残留量较少，本文建立了利用UPLCMS法来监测，方法操着简单，选择性好，灵敏度高。

1.仪器与试剂

仪器：Waters UPLC-IClass-SQD2（waters公司），XP6百万分之一天平（梅特勒公司），Milli-Q Integral 超纯水系统（美国密理博公司）

试剂：超纯水（自制），甲醇、乙腈、甲酸、甲酸铵均为色谱级（美国默克公司），四丁基氟化铵对照品（Sigma-Aldrich），卡泊三醇原料药客户提供。

2.测定条件

2.1色谱质谱条件：

2.2溶液配制

2.2.1 空白溶剂：乙腈

2.2.2 对照品储备液：取四丁基氟化铵标准品适量，以空白溶剂配制成2μg·mL-1的溶液，作为标准品储备液。

2.2.3 标准曲线溶液配制：精密量取一定量的标准品储备液，加乙腈配制成每1ml含四丁基氟化铵4，10，16，20，40ng的对照品工作液。

2.2.4 供试品溶液配制：精密称取20mg供试品至10mL容量瓶中，以溶剂溶解并稀释至刻度摇匀并定容，即得2mg·mL-1的供试品溶液。

3.结果与分析

3.1 专属性

取空白溶剂、供试品溶液、供试品加标溶液，按“2.1”项下方法采集数据，考察方法专属性。试验结果表明，空白溶剂、供试品对于检测都没有干扰。结果见图一。

3.2检测限和定量限

取四丁基氟化铵储备液逐步稀释，进行测定，检测限为0.1ng·mL-1（以3倍信噪比计），定量限为0.2ng·mL-1（以10倍信噪比计）

3.3 线性

取“2.2.3”项下标准曲线溶液，按“2.1”项下方法进行测定，以四丁基氟化铵的质谱响应为Y轴，浓度为X轴做标准曲线，方程为y=8445.733.1175X-582.5889，r=0.9992，线性范围4～40ng·mL-1。线性拟合曲线见图1。

3.4 准确度

取卡泊三醇供试品适量，置于10mL容量瓶中，分别精密加入2.2.2 项下四丁基氟化铵对照品储备液50µL、100µL、150µL，各水平平行配制三份。精密量取1µL注入液相质谱仪，按“2”项下方法进行测定，带入标准曲线进行计算。平均回收率90.9%，RSD 2.7%，方法回收率良好，此方法可准确测定卡泊三醇中四丁基氟化铵的残留量。

3.5 精密度

取精密移取2.2.3项下浓度为2ng·mL-1的对照品溶液溶液1µL，注入串联四级杆液质联用仪，连续测定六次，记录数据并进行统计。保留时间RSD为0.39%，峰面积RSD为2.57%精密度良好，结果见表三。

4 样品测定

取卡泊三醇20mg至10ml容量瓶中，以空白溶剂溶解并定容，作为供试品溶液，平行配制两份。取供试品溶液1µl，分别注入串联四级杆液质联用仪，记录色谱图。三批卡泊三醇供试品中四丁基氟化铵均低于检出限，低于0.001%的质量标准，符合质检要求。结果见表4。

参考文献

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[3]四丁基氟化铵的合成及其應用研究进展[J].李琳，魏鹏飞，唐甜，杨丰科.合成化学.2018，26（04）.

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