武国超 辽阳市卫生健康服务中心（血液采供所）检验科 （辽宁 辽阳 111000）

内容提要：目的：探究不同振荡方式和进板时间对全自动酶免检测抗-HCV的作用。方法：选取于本站体检合格的30例自愿献血者，均予以全自动酶免检测抗-HCV，检测结果均为弱反应性。振荡方式1为1号反应加班加样后马上振荡混匀，使进孵育箱时间延迟；方式2为2号反应板延迟振荡，振荡后马上进到孵育箱；方式3为3号反应板不振荡，将进入孵育箱时间延迟。采用全自动酶免分析仪自动完成，各个标本检测三次，选取平均值。结果：振荡方式1与方式3在同一延迟进板时间的值分别为最小、最大，除了振荡延迟0min振荡、延迟15min进板之间差异不显著以外，剩余和振荡方式1同一延迟进板时间之间有明显差异（P<0.05）；且随着延迟进板时间其检测结果逐步提高。结论：全自动酶免分析仪加样后，反应板需马上振荡混匀，振荡混匀与进入孵育箱时间尽可能不要延迟，防止出现假阳性。

丙型肝炎主要是因为丙肝肝炎病毒（HCV）导致的，主要是借助输血、肾移植以及性传播等引发的[1]。我国丙型肝炎病毒抗体检查炎性者占1%～3.2%，大约有四千万左右患者感染[2]。因此，需对血液中丙型肝炎病毒抗体检测的影响因素进行深入分析，常规的检测方法为全自动酶联免疫吸附实验，但此实验的影响因素多种多样，本研究只对振荡方式与进板时间予以分析。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选取于本站2018年3月～2019年5月体检合格的30例自愿献血者，均予以全自动酶免检测抗-HCV，检测结果均为弱反应性，血液低温保存。采用的标准物质通过批检，试剂盒均在有效期内。

仪器设备：①全自动样品分析仪（型号为STAR，来自瑞士）；②全自动酶免分析仪（型号为FAME，来自瑞士）；③微量振荡器（型号为XK96，生产企业为姜堰市新康医疗器械有限公司）。

1.2 方法

室温与湿度分别保持在（22±2）°C、（38±4）%，试剂平衡时间0.5～1h，标本于37°C水浴箱内解冻混匀。2号、3号、4号反应板采用STAR全自动样品分配仪加样，加样1次/15min，在1、15、30、45min依次取样。4号反应板加样结束后，将全自动样品分配仪暂停，于全自动样品分配仪板架上取下，在微量振荡器上予以振荡混匀，将已经加样板条扣除，根据次序固定在空间1号反应板架上，静置，4号反应板放置原位，通过延迟时间不断加样，反复进行上述操作。2号反应板加样完成后静置，进板前充分振荡混匀；3号反应板一直静置，不振荡。加样完成后，马上用手将1号、2号反应板移走到全自动酶免分析仪进板架上，进到全自动酶免分析仪孵育箱内，全部标本的阴阳性比较以及质控均由全自动酶免分析仪自行完成，按照试剂盒说明书开展操作，加样选择一次性加样针，各个标本检测三次，选取平均值。

1.3 统计学分析

选择SAS9.2软件分析数据，借助重复测量对的两因素协方差进行研究，P<0.05为有统计学意义。

2.结果

振荡方式1与方式3在同一延迟进板时间的值分别为最小、最大，除了振荡延迟0min振荡、延迟15min进板之间差异不显著以外，剩余和振荡方式1同一延迟进板时间之间有明显差异（P<0.05）；且随着延迟进板时间其检测结果逐步提高。振荡方式与延迟进板时间之间有相互影响的关系，不振荡45min延迟进板的值最大，振荡没有延迟进板作为标准操作，也就是方式1、方式2的0min延迟进板，检测值最小。振荡方式各时间点与没有延迟进板时间对，只有方式1延迟进板时间15min对检测结果没有影响，见表1。

表1.不同振荡方式和进板延迟时间对检测结果的影响(n=15,±s)

表1.不同振荡方式和进板延迟时间对检测结果的影响(n=15,±s)

注：与方式1、方式2相比，aP<0.05；与方式1对比，bP<0.05

振荡方式 0min 15min 30min 45min方式 1 1.58±0.98 1.65±1.00 1.78±1.03a 2.00±1.20a方式2 1.47±0.85 1.75±1.03a 2.18±1.20ab 2.37±1.24ab方式3 2.04±0.85ab 2.40±1.07ab 2.55±1.00ab 2.85±1.04ab

3.讨论

全自动酶联免疫分析仪可使主观因素带来的不利影响明显减少，还可以使操作人员的工作强度明显降低，使检测时间有效缩短。但酶联免疫法有多种因素，本研究经酶联免疫法检测弱反应性抗-HCV，对振荡方式和延迟进板时间两个因素的影响予以分析，结果显示，振荡方式随进板时间的延迟，检测数值会越来越大，产生一定假阳性，引发献血者流失或血液报废[3]。酶联免疫法检测抗-HCV的血浆与稀释液比为1:10，予以稀释操作，因为血浆的加样量比较小，稀释倍数较大，重力及加样枪分配能力等问题直接影响抗原抗体反应。加样针液探测后，下潜2mm，不进行振荡会引发稀释液内血浆含量不均分布，导致反应板底周围抗体浓度显著提高，使血浆内的特异抗体和包被抗原结合能力明显加快。将稀释液中抗-HCV的含量借助振荡混匀，使低部周围抗体浓度明显降低，使抗原抗体反应充分减弱[4]。振荡延迟会使多数抗-HCV有机会结合包被固相上相应抗原，使检测结果比振荡结果高，小于不振荡结果。孵育对结果也有直接影响，孵育时间缩短，不能检测出弱阳性，孵育时间增加，使包被固相上相应抗原结合的抗体显著增多，影响检测结果。全自动样品分析仪加样1次/15min，进板时间延迟0min、15min、30min、45min，也就是反应板使室温孵育时间增加。全自动样品分析仪、全自动酶免分析仪属于两个独立系统，反应板静置在全自动样品分析仪板架上进行加样，将反应板手移动到全自动酶免分析仪进板架上，反应板进到孵育箱等操作，会出现一定的振荡及时间延误。没有延迟振荡进板属于标准操作，结果显示，加样结束后反应板立即振荡，进到全自动酶免分析仪的时间保持在15min内，和标准操作相比对检测结果没有较大影响[5]。

总之，全自动酶免分析仪加样处理后，反应板应及时予以振荡混匀，振荡混匀与进入孵育箱时间尽量不要延迟，提高检测准确率。