丁颜 于俊梅 亚新华 淄博市中心医院消毒供应中心 （山东 淄博 255000）

内容提要：目的：为探讨消毒供应中心职业护士安全防护问题，验证医用多酶清洗剂的残留物是否会对人体造成伤害，对目前正在使用的医用多酶清洗剂的毒理性进行了探究和验证。方法：参照2002版《消毒技术规范》中对消毒产品毒理性的检测方法进行检测。结果：急性经口试验确定医用多酶清洗剂的LD50>5000mg/kg；急性吸入毒性试验确定LC50>1000mg/m3；皮肤刺激实验计算出皮肤刺激指数<0.5；皮肤变态反应试验求得致敏率为0；微核试验结果显示2500mg/kg组（1/2 LD50）和1000mg/kg组（1/5 LD50）的微核出现率分别为2.6‰和1.3‰，阴性对照组的微核出现率为0.6‰，阳性对照组的微核出现率为25.8‰。结论：急性经口试验确定医用多酶清洗剂属实际无毒级；急性吸入毒性试验确定清洗剂为实际无毒级；结果判定医用多酶清洗剂不引起皮肤变态反应；急性眼刺激试验判定眼刺激反应分级标准为无刺激性；微核试验结果属阴性，表明该医用多酶清洗剂无明显致突变作用。哺乳动物红细胞染色体畸变试验结果属于阴性，表明该医用多酶清洗剂对染色体无致突变作用。因此，目前在用的医用多酶清洗剂对人体无害，对护士职业安全没有影响。

医用多酶清洗剂由生物酶、表面活性剂、缓蚀剂以及有机溶剂等成分组成，能够高效去除医疗器械表面常见的血渍、体液、脂肪等污染物。《医用清洗剂卫生标准》中对于医用多酶清洗剂的原料要求应为无毒或低毒物质。医用多酶清洗剂的原则要求与人体有较好的相容性，对人体无毒、无刺激[1-7]。为预测其残留物是否会对人体组织有危害，按照2002版《消毒技术规范》对医用多酶清洗剂的毒理性进行了试验。

1.材料与方法

1.1 急性经口毒性试验

1.1.1 材料。中性多酶清洗剂2.5L（山东新华医疗器械股份有限公司，生产日期为2017.11.01，有效期为2年），健康小鼠60只，体重18～22g，随机分组，每组30只，雌雄各半，5‰浓度的清洗剂溶液。

1.1.2 方法。采用动物灌胃试验，最大容量小鼠不超过0.4mL/20g体重。染毒后14d内观察结果并计算LD50（半数致死量）。因预判清洗剂属于实际无毒级，所以同时采用一次性最大限度试验，可判定LD50>5000mg/kg体重[8]。

1.2 急性吸入毒性试验

1.2.1 材料。健康小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g；染毒柜，雾化器。

1.2.2 方法。采用动式染毒法，将实验小鼠放入染毒柜中，采用雾化器将5‰的清洗剂溶液雾化，一次性吸入染毒2h。采用相应公式计算染毒浓度。

1.3 皮肤刺激试验

1.3.1 材料。健康的家兔4只，清洗剂原液，无刺激的塑料膜，无刺激胶带。

1.3.2 方法。按照标准试验方法，分别于去除受试物后1、24和48h，分别观察皮肤局部反应，根据表1，得各时间的皮肤刺激反应积分值（刺激指数）。取其中最高皮肤刺激指数，按表2评定该受试物对动物皮肤刺激强度的分级。次日按照同样的操作进行，连续涂抹14d。每次涂抹前按照表1的评分标准进行评分统计。

表1.皮肤刺激反应评分标准

表2.皮肤刺激强度分级

1.4 皮肤变态反应试验

1.4.1 材料。皮肤完好的健康白色豚鼠30只，雌雄各半，体重180～240g，并将豚鼠随机分为试验组、阴性对照组和阳性对照组，每组豚鼠10只。

1.4.2 方法。将试验组豚鼠予以激发和诱导处理。

于试验前18h将豚鼠背部4cm×4cm范围内剪毛。取清洗剂原液0.2mL滴到3cm×3cm两层纱布上，并将其敷贴在左侧的去毛区。用塑料膜将敷贴区覆盖，再以无刺激医用胶布固定，持续6h。第7天和14天以同样的方法重复一次。

在14d后，按上述方式，6h后将敷贴的受试物洗去。24和48h后观察皮肤反应，按皮肤变态反应评分标准的评分标准评分。

化根据皮肤变态反应评分标准的评分标准，求得致敏率，按致敏强度分级标准评定致敏强度。

1.5 急性眼刺激试验

1.5.1 材料。健康家兔3只，试验前要检查受试动物的双眼是否异常，异常者不得试用于试验；5‰的清洗剂溶液。

1.5.2 方法。将5‰的清洗剂溶液作为受试物，用移液枪准确吸取0.05mL滴入家兔眼结膜囊内，另一侧眼生理盐水作为对照，30s后用生理盐水冲洗双眼。1、2、3、7、14和21d后观察结果。如果第7天或第14天，眼睛刺激反应评分降至0，即可终止试验。参照消毒技术规范对家兔在每个时段角膜、虹膜和结膜充血、水肿四方面的平均评分，再按照眼刺激反应标准判定受试物的眼刺激强度。

1.6 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

1.6.1 材料。健康小鼠50只，体重25～30g，雌雄各半；5‰的清洗剂溶液；阳性对照物（环磷酰胺）、小牛血清、姬姆萨染液。

1.6.2 方法。受试物设1/2 LD50、1/5 LD50、1/20 LD50 3个剂量组，每剂量组10只小鼠，雌雄各半。另设阴性（溶剂水）和阳性对照组，并设LD50为5000mg/kg体重。按标准流程处理，干燥后镜下计数1000个嗜多染红细胞及其微核数。阳性组用环磷酰胺（40mg/kg体重），阴性对照组用受试物溶剂水，阴性对照组和阳性对照组采用同样处理程序。

1.7 哺乳动物骨髓红细胞染色体畸变试验

1.7.1 材料。健康小鼠60只，体重25～30g，雌雄各半；阳性对照物（环磷酰胺）、0.04%秋水仙素、氯化钾溶液（0.075mol/L）、甲醇/冰醋酸（3:1，V/V）固定液、姬姆萨染液、磷酸盐缓冲液（PBS，1/15mol/L，pH7.4）。

1.7.2 方法。将小鼠随机分为5组，设置3个受试物剂量组，为1/2 LD50、1/5 LD50、1/20 LD50，每个剂量组12只小鼠，雌雄各半。以2500mg/kg作为高剂量组，另设阴性对照（蒸馏水）和阳性对照组。阳性对照组采用环磷酰胺（40mg/kg体重），阴性（蒸馏水）对照组采用受试物溶剂。按标准流程进行试验，阳性与阴性（蒸馏水）对照组的操作程序同试验组。只是阳性组选用环磷酰胺（40mg/kg体重）作为受试物的替代物。阴性（蒸馏水）对照组用受试物溶剂作为受试物的替代物。

2.结果

2.1 急性经口毒性试验

根据概率单位-对数图解法计算出LD50>5000mg/kg，与一次性最大限度试验的结果一致。可判定受试物5‰的医用多酶清洗剂溶液属实际无毒级。

2.2 急性吸入毒性试验

经动态染毒法测定，各染毒浓度剂量组在14d内经过观察，小鼠均无异常状况和死亡情况。用20只健康小鼠一次性吸入染毒浓度>10000mg/m3，14d内无死亡情况，可判定LC50>10000mg/m3，最终判定受试物5‰的医用多酶清洗剂溶液属实际无毒级。

2.3 皮肤刺激试验

按照表1，表2试验结果最终判定受试动物的皮肤刺激指数<0.5，刺激强度级别属于无刺激性。

2.4 皮肤变态反应试验

按照表3，将各组豚鼠的反应评分除以各组的动物数20，求得致敏率，试验组和阴性对照组的所有豚鼠均无红斑和水肿现象，反应评分均为0，最终求得致敏率为0，可以判定清洗剂原液的致敏强度为不引起皮肤变态反应。

2.5 急性眼刺激试验

经急性眼刺激试验确定3只家兔的眼刺激性反应的评分为：角膜混浊=0；虹膜充血=0；结膜充血=1；结膜水肿=1，3只家兔的平均恢复时间为5d，综合评定5‰的医用多酶清洗剂溶液眼刺激反应强度为无刺激性。

2.6 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

1/2 LD50组微核出现率比阴性对照组显著增高，经统计学处理，差异有极显著意义（P<0.01）；1/5 LD50相对于阴性对照组微核出现率也有增高，经统计处理，差异有显著意义（P<0.05）；1/20 LD50与阴性对照组相比，无显著差别；各组清洗剂剂量组跟阳性对照组相比均有极显著意义（P<0.01）。试验结果为阴性。证明清洗剂没有明显的致突变作用。具体数据见表3。

表3.各组嗜多染红细胞微核出现率(n=10,‰)

2.7 哺乳动物红细胞染色体畸变试验

1/2 LD50组染色体畸变率比阴性对照组无显著增高，畸变率为2%，具有统计学意义；1/5 LD50和1/20 LD50相对于阴性对照组染色体畸变率均为1%，比阴性对照组无显著增高，各组清洗剂剂量组跟阳性对照组相比均有极显著意义（P<0.01）。试验结果为阴性。证明清洗剂对染色体没有明显的致突变作用。具体数据见表4。

表4.各组骨髓红细胞染色体畸变率(n=12,%)

3.小结

医用多酶清洗剂不属于医疗器械，也不属于消毒产品，所以不需要进行卫生安全评价，也缺少相应的规范和管理，造成医用多酶清洗剂产品种类繁多，且质量参差不齐。而医疗器械会直接或间接的接触人体破损的皮肤、黏膜甚至会进入无菌的组织和器官，所以对医用多酶清洗剂进行毒理性的研究，确定医用多酶清洗剂的安全无毒无刺激性是非常有现实意义的[9-13]。

参照《消毒技术规范》对于消毒剂的毒理性测试方法，确定医用多酶清洗剂在毒理性上进行上述试验。医用多酶清洗剂除通过医疗器械接触患者之外，还会在消毒供应中心的去污区直接或间接的接触到护理人员，接触方式如误食、挥发性吸入、皮肤接触、误入眼睛等，所以检测项的各项试验是在细胞水平上评价清洗剂的遗传毒性。急性经口和急性吸入试验确定医用多酶清洗剂的实际使用液属于实际无毒级，皮肤刺激试验确定其对皮肤的刺激强度为无刺激性，皮肤变态反应试验判定清洗剂原液不引起皮肤变态反应。上述试验证明清洗剂对人体无明显致突变性，对护士职业安全和健康没有影响。