王 洁，廖 芬，田俊良

(六盘水生态环境监测中心 贵州 六盘水 553000)

1 引言

粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5 ℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气[1]。六盘水生态环境监测中心一直采用多管发酵法进行水质中粪大肠菌群的测定，此方法精度高，但操做时间长，步骤较为繁琐，需验证实验[2]，如果发酵管中存在其他种类的产气菌，会致使检测结果偏离[3]。本次实验是对多管发酵法与纸片快速法进行实验比对，对相同的实验样品分别用此两种方法进行检测和结果评价，比较两种方法的有效性和可比性。

2 实验概况

2.1 材料与方法

多管发酵法：乳糖蛋白培养基、EC肉汤培养基。

纸片快速法：BD105 I水质(粪)大肠菌群快速检验纸片、BD105Ⅱ水质(粪)大肠菌群快速检验纸片。

2.2 仪器和设备

隔水式电热恒温培养箱(检定温度37 ℃)、电热恒温培养箱(检定温度44.5 ℃)[4]、立式压力蒸汽灭菌器

2.3 实验步骤

2.3.1 多管发酵法

(1)水样接种。严格按照国标要求，将水样充分混匀后根据试样浓度确定接种量。每个样品用3个不同的水样量接种，同一水样量接种5管。

(2)初发酵实验。将水样分别接种到盛有乳糖蛋白培养液的发酵管中，在37 ℃±0.5 ℃下培养24 h，产酸和产气的发酵管表明实验阳性。如在试管内产气不明显，则轻拍试管，有小气泡升起为阳性。

(3)复发酵实验。轻微震荡初发酵实验阳性结果的发酵管，用3 mm接种环将培养物转接到EC培养液中。在44.5 ℃±0.5 ℃温度下培养24 h。培养后立即进行结果判定[5]。

2.3.2 纸片快速法

每个样品按3个10倍递减的不同接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片。根据水样污染程度确定接种量，尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性、5个接种量最小的纸片为阴性，避免出现所有3个不同接种量共15张纸片全部为阳性或全部为阴性。接种后的试样在44.5 ℃±0.5 ℃温度下培养24 h后观察，进行结果判读[6]。

2.3.3 对照实验

(1)空白对照。每一批次样品均做一空白对照实验，用无菌水做全程序空白测定，两种实验方法培养后均不得有任何颜色反应，否则该次样品测定结果无效[7,8]。

(2)阳性及阴性对照。粪大肠菌群测定的阳性菌株为大肠埃希氏菌，阴性菌株为产气肠杆菌。上述标准菌株均制成浓度为300～3000个/mL的菌悬液，分别取相应水量的菌悬液接种，阳性与阴性菌株各5份，与测试样品一起培养。大肠埃希氏菌应全部呈现阳性反应，产气肠杆菌应全部呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定[9]。

3 结果与分析

两种方法比对实验测定结果见表1。

粪大肠菌群检测结果与平行双样测定结果对照试样中的最可能数和95%置信限值进行比对结果判定，若同一试样检测结果均在两种检测方法的95%置信限值内，则比对成功，判定比对结果合格。实验结果判定详见表2，平行双样结果判定详见表3。

由空白及阴阳对照实验可知:阴性对照结果全阴性，证明实验环境、培养基、操作过程未受到污染，排除假阳性干扰；阳性对照结果全阳性，证明培养基、培养条件、检测方法合适，能有效培养出目标菌群；空白对照全部未检出，排除实验用水的干扰。对照实验结果表明此次比对测试结果可信，具有参考价值[10]。

由数据可知，多管发酵法多个样品存在测值略高于纸片快速法的情况，究其原因可能是测试样品中存在其他种类的产气菌，多管发酵法以产气判定阳性，所以部分测试样品值略高于纸片快速法。

表1 实验测定结果统计

表2 粪大肠菌群实验结果判定

表3 粪大肠菌群平行双样实验结果判定

4 结论

在两种测试实验中均设置阳性菌株对照和阴性菌株对照，每一批次样品均做一空白样品对照，对实验全过程进行质量控制。通过在细菌室对12个受不同污染程度的水样进行方法比对实验，结果表明：由轻度至重污染的水样比对结果均合格，粪大肠菌群的测定由此两种方法测定均适用。相比多管发酵法纸片快速法测定省去培养基配置与灭菌、接种复发酵环节，操作简便，且培养时限比多管发酵法缩短24 h，更加方便快捷安全，更适用于水质中粪大肠菌群的快速测定。