张红强 王 欣 王佳慧 张佳美

（1. 山西振东制药股份有限公司，山西长治，047100；2. 山西振东健康生物科技股份有限公司，山西长治，047100）

三氯异氰脲酸作为新一代消毒剂，因其消毒能力强、作用时间长、安全性能好等优点，在水质处理，医疗卫生，工、农、渔业等行业被广泛应用。将三氯异氰脲酸制备成泡腾片，不仅解决了三氯异氰脲酸不易储存的问题，而且携带更方便、用量更准确[1]。2020年由于新型冠状肺炎的暴发，消费者的消毒意识有了明显提升，对消毒产品的需求明显增多，因此三氯异氰脲酸消毒剂的市场不再仅局限于国外，国内市场前景日渐明朗。

通过粉末压片工艺制备的三氯异氰脲酸泡腾片，有效氯含量为质量分数30.0%，可在5 min中完全溶解，符合《中国药典》规定[2]。本文主要评价其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌效果，以及不同作用时间对物体表面的消毒效果。

1 实验试剂

1.1 样品溶液配制

取自制消毒片，分别配制成浓度为200、250、500 mg/L的消毒液。

1.2 菌种

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌均由中国食品药品检定研究院提供。

1.3 标准培养基

改良马丁琼脂培养基，营养琼脂培养基均由北京三药科技开发公司提供。

1.4 中和剂

硫代硫酸钠、吐温80均由天津市永大化学试剂有限公司提供。

2 方法

2.1 实验用菌悬液的制备

用接种环挑取各实验菌，用磷酸缓冲溶液(PBS)洗下制成108cfu/mL菌悬液，按10倍梯度稀释至106cfu/mL。

2.2 中和剂鉴定实验

按照《消毒技术规范》[3]2.1.1.5中和剂鉴定实验方法，设计6组实验。按菌悬液定量杀菌方法进行中和剂鉴定实验。实验重复3次。

2.3 悬液定量杀菌实验

（1）取无菌试管，加入0.5 mL 106cfu/mL菌悬液，再加入0.5 mL有机干扰物，混匀置于(20±1)℃水浴5 min，加入4.0 mL消毒液，迅速混匀后计时。至作用时间，吸取0.5 mL上述实验菌与消毒剂混合液加于4.5 mL中和剂中，作用10 min后，分别吸取0.5 mL放入2个平皿中，作活菌计数。再分别按10倍梯度稀释，分别吸取0.5 mL放入2个平皿中，作活菌计数。

（2）阳性对照：取无菌试管，加入0.5 mL 106cfu/mL菌悬液，再加入0.5 mL有机干扰物，混匀置于(20±1)℃水浴5 min，用移液枪吸取标准硬水4.0 mL注入其中，混匀，按10的倍数稀释，从102、10 cfu/mL的试管中各吸取0.5 mL放入2个平皿中，作活菌计数。

（3）倒入15 mL冷却至45℃左右的培养基，手动摇匀，待凝固后，将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌试样放入37℃培养箱中，48 h后观察实验结果；将白色念珠菌试样放入28℃培养箱中，72 h后观察实验结果。

2.4 物体表面现场消毒实验

（1）随机取物体表面，用规格板标定2块面积各为25 cm2的区域，一个供消毒前采样，一个供消毒后采样。

（2）消毒前，将无菌棉拭于5 mL稀释液管中沾湿，对1区块涂抹采样，横竖往返各8次。采样后（采样区为30个不同区域），以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液管内，震荡20 s，作为阳性对照样本。

（3）将消毒液喷洒于物体表面，作用5 min后，将无菌棉拭于含5 mL中和剂试管中沾湿，对消毒区域采样，将采样后的棉拭剪入原中和剂管中，作为消毒组样本。

（4）实验结束后，将同批次稀释液、中和剂各1 mL接种于培养基，作为阴性对照组。

⑤将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取1 mL，以琼脂倾注法接种平皿，每个样品接种2个平皿，置于37℃恒温培养箱中培养48 h，观察最终结果。

3 结果与分析

3.1 中和剂鉴定实验

不同菌种、不同消毒剂含量对应的中和剂结果如表1，表2，表3。实验结果表明，不同浓度的消毒剂、不同菌种所对应的中和剂不同，所筛选的中和剂可有效中和消毒液对实验菌的残留作用，且中和产物对实验菌的生长无明显的影响。

3.2 杀菌实验

实验结果（见表4）表明，自制消毒片有效氯含量为200 mg/L和250 mg/L时，仅作用2 min，对大肠杆菌平均杀灭对数值＞5，对白色念珠菌作用10 min时平均杀灭对数值＞5；有效氯含量为500 mg/L时，仅作用2 min就对白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果，平均杀灭对数值＞5。从实验结果可以看出该消毒片对3种菌的效果为：大肠杆菌＞金黄色葡萄球菌＞白色念珠菌，且随着时间和浓度的增加，三氯异氰脲酸的杀菌性能更强。

表1 消毒剂浓度为200 mg/L时不同菌种中和剂鉴定结果

表2 消毒剂浓度为250 mg/L时不同菌种中和剂鉴定结果

表3 消毒剂浓度为500mg/L时不同菌种中和剂鉴定结果

表4 杀菌实验结果

3.3 物体表面现场消毒实验结果

对30个区域消毒前后菌落数比较，结果显示用500 mg/L的消毒剂喷洒物体表面，作用5 min后，对自然菌的杀灭对数值＞1.0。

4 结论

本文所研究的消毒泡腾杀菌实验结果表明有效氯含量为500 mg/L时，仅作用2 min就对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌有较强的杀灭作用。物体表面实验结果表明，有效氯含量为500 mg/L的消毒剂对自然菌也有较好的杀灭作用。目前市场上三氯异氰尿酸消毒片种类繁多，但我国对其可使用浓度以及安全性没有明确的标准，随着人们消毒意识的不断提高，三氯异氰尿酸的市场要求亟需得到规范[4]。