◎ 陆俊波，吴珍珍，姚 军，余水红，冯 莉

（1.安庆市食品药品检验中心，安徽 安庆 246000；2.安庆医药高等专科学校，安徽 安庆 246052）

随着人们生活水平的提高和对自身健康的日益关注，桶装水凭借其饮用方便、水质洁净等优势，开始逐步走入家庭，受到广大消费者的青睐。但是近年来桶装水中铜绿假单胞菌污染问题逐渐严峻，关于铜绿假单胞菌污染桶装水的报道日渐增多，铜绿假单胞菌污染引起的食物中毒频频发生，成为公共卫生的重大隐患[1]。铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），又称绿脓杆菌，在自然界中分布较广，空气、水、土壤以及健康人的皮肤组织、呼吸道和肠道都存在，是医源性感染疾病中常见的一类条件致病菌，也是引起食源性和水源性疾病的病原之一[2]。本课题拟通过实验室模拟找到最佳的消毒工艺，为桶装水企业选择安全高效和经济适用的杀菌工艺提供理论依据，帮助桶装饮用水企业解决铜绿假单胞菌大范围超标问题。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

微酸性次氯酸电解水，由本地某公司生产；高纯二氧化氯气，盐城康宝消毒剂有限公司生产；臭氧，由安庆太湖某瓶装水企业生产线臭氧可控发生设备OW-20TB生产；铜绿假单胞菌，编号：ATCC15442）；桶装水管道及回收桶，由桶装水企业提供；铜绿假单胞菌基础培养基（CN琼脂）、营养琼脂、绿脓菌素测定用培养基、金氏B培养基、乙酰胺液体培养基、氧化酶试纸及钠氏试剂等，由北京路桥技术有限责任公司生产。

1.2 仪器与设备

苏州苏洁-2FD型超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）、BHC-1300IIA2生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）、SPX-150B-Z生化培养箱（上海博讯实业有限公司）、GR60AD高压灭菌锅（致微仪器有限公司）、HTY-306A六连过滤系统（浙江泰林生物技术有限公司）、赛默飞ICS-11OO离子色谱仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）及7890A气相质谱联用仪（安捷伦科技有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 检测方法

按照《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》中铜绿假单胞菌检测方法对样品进行检测；根据《生活饮用水标准检验方法 消毒副产物指标》测定三氯甲烷、四氯化碳及溴酸盐含量。

1.3.2 消毒效果实验设计

在实验室内对管道及回收桶进行涂抹预先经过复活培养的铜绿假单胞菌，再把微酸性次氯酸电解水和高纯二氧化氯配制成一系列的浓度梯度后，对管道及回收桶进行罐装，分别作用5min、10 min、20 min、30 min、60 min和24 h后倒出消毒水并对管道用无菌棉棒擦拭表面残留消毒水并检测铜绿假单胞菌含量。取样后对管路及回收桶进行冲洗并测定每次冲洗后的副产物三氯甲烷、四氯化碳残留量。臭氧的消毒效果在企业的生产车间完成，通过调节臭氧发生仪器的参数改变臭氧投放量，并对产品进行铜绿假单胞菌及副产物溴酸盐跟踪监测。

2 结果与分析

2.1 微酸性次氯酸电解水的消毒效果

对选用的微酸性次氯酸电解水（有效次氯酸含量50 ppm），进行梯度稀释后作用于管道及回收桶。由表1知，浓度为50 ppm的次氯酸电解水在被稀释2 200倍 以下均有杀菌作用，对试验所有稀释浓度均做了三氯甲烷及四氯化碳跟踪测定，结果均符合国家标准 GB 5749—2006要求（三氯甲烷限量值：0.06 mg·L-1； 四氯化碳限量值：0.002 mg·L-1）。

2.2 高纯二氧化氯的消毒效果

建立有效二氧化氯0.04～0.40 mg·L-1的浓度范围，分别作用于样品后测定消毒效果及副产物。由表2知，有效二氧化氯浓度低于0.12 mg·L-1作用时间少于5 min后铜绿假单胞菌检出阳性。之后对该6个浓度梯度分别测定了三氯甲烷及四氯化碳，结果均符合国家标准要求。

2.3 臭氧的消毒效果

建立有效臭氧0.13～0.65 mg·L-1的浓度范围，分别作用于样品后测定消毒效果及副产物。由表3知，在5月、7月、8月、9月和10月有效臭氧浓度低于0.15 mg·L-1时铜绿假单胞菌出现检出阳性。之后对该6个浓度梯度分别测定了溴酸盐含量，结果在浓度梯度（0.13～0.50 mg·L-1）范围内溴酸盐含量均符合要求 （GB 5749—2006规定溴酸盐限量值：0.01 mg·L-1）。 当臭氧浓度达到0.65 mg·L-1时溴酸盐测定值为 1.4×10-2mg·L-1，略高于国家标准限量值。

表1 微酸性次氯酸电解水的消毒效果及副产物量表

表2 高纯二氧化氯的消毒效果及副产物量表

表3 臭氧的消毒效果及副产物量表

3 结论

通过实验分析得出对于桶装水的消毒要确保次氯酸浓度为50 ppm的电解水稀释倍数要低于2 200倍；二氧化氯中有效氯含量要控制在0.16 mg·L-1以上；臭氧的杀菌浓度要控制在0.15～0.65 mg·L-1。控制好纯浄水的微生物污染是一个系统而精细的工作[3]，除了按照控制措施操作以外，更重要的是进行有效的监督、检查和落实，才能控制好包装饮用水的铜绿假单胞菌污染。