陈海兰 刘心建

（山西焦煤运城盐化集团有限责任公司，山西运城，044000）

2020年12月，我国多地陆续报道冷链物品外包装新型冠状病毒（COVID-19）核酸检测阳性，通过冷链物品引发的新型冠状病毒肺炎疫情时有发生。为解决全国疫情防控之急需，研究低温消毒剂并确保低温消毒效果成了各消毒剂生产企业的头等大事之一。

十二烷基二甲基苄基氯化铵（1227），别名苯扎氯氨、洁而灭等，是一种广谱、高效的阳离子杀菌剂，广泛应用于医疗、纺织印染和水处理行业[1]。目前，有关1227的杀菌性能研究大都在常温条件下进行[2-3]，事实上低温状态下消毒剂的消毒效果通常具有很大的不确定性[4]。为了解1227在低温条件下的杀菌效果，笔者在-18℃条件下进行了实验观察，以期为从事低温消毒剂开发的业内同仁提供参考。

1 实验部分

1.1 材料和仪器

1227（50%，工业品），金黄色葡萄球菌（ATCC6538，第5代）和大肠杆菌（8099，第4代），牛血清白蛋白，胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）稀释液，中和剂为D/E中和肉汤，营养琼脂培养基，平纹棉布片（10 mm×10 mm）。

生物安全柜、培养箱、恒温器、电冰箱以及其他微生物实验必备器材等。

1.2 实验方法

（1）将1227用乙二醇和乙醇稀释成浓度0.5%的溶液，然后放入-18℃冰箱中备用。

（2）将实验菌株24 h营养琼脂培养物，用TPS洗下菌苔，制成菌悬液。用3.0%牛血清白蛋白稀释，使菌液的浓度约为5×108cfu/mL。取10 μL均匀涂抹于灭菌棉布片上，（36±1）℃恒温培养箱中干燥后，放入-18℃冰箱中备用。

（3）采用载体浸泡定量杀菌实验[5]。在无菌平皿中加入5.0 mL溶液（1），加入菌片（2）并使之浸没于液体中。在-18℃条件下作用至设定时间（15、30、45 min）后，取出菌片移入含5.0 mL中和剂的试管中。中和作用10 min，混匀，取1.0 mL接种平皿，培养。同时以稀释液代替1227溶液，做阳性对照实验。结果以杀灭对数值表示，实验重复3次，取其算术平均值。

2 结果与讨论

2.1 中和剂鉴定

以金黄色葡萄球菌（ATCC6538）为实验菌，对D/E中和肉汤的中和作用进行鉴定。实验分为4组，第1组为中和剂+菌片，第2组为1227溶液+中和剂+菌片，第3组为稀释液+菌片，第4组为稀释液+中和剂+培养基。经3次重复实验，结果见表1。

表1 中和剂鉴定实验结果

从表1可以看出，3次重复实验，每次实验的第1组、第2组和第3组的实验菌生长量均相似，且组间菌落数误差率不超过15%；第4组均无菌生长。依据参考文献[5]中和剂鉴定实验评价规定，D/E中和肉汤对1227实验溶液具有良好的中和作用，中和剂选择合格。

2.2 杀菌能力

经3次重复实验，在-18℃条件下，质量浓度为0.5%的1227对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用15 min，杀灭对数值均大于3.0，达到了《消毒技术规范》（2002版）的消毒合格水平[6]，结果见表2。

表2 1227对微生物的杀灭效果

3 结论

中和剂载体定量鉴定，-18℃条件下，D/E中和肉汤可有效中和质量浓度为0.5%的1227对金黄色葡萄球菌的残留作用，且自身及其中和产物对培养基无不良影响，对实验菌种的生长基本无影响。D/E中和肉汤可做1227实验溶液对金黄色葡萄球菌载体浸泡定量杀菌实验的中和剂。

载体浸泡定量杀菌实验中，-18℃条件下，质量浓度为0.5%的1227对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用15 min，杀灭对数值均大于3.0，达到了《消毒技术规范》（2002版）的消毒合格水平，表现出了较高的杀菌效率，可以用于低温消毒剂，在-18℃条件下使用。