陈建锋

佛山市食品药品检验检测中心 广东佛山 528051

维生素C又名抗坏血酸，在食品工业中应用广泛，常常被用作食品添加剂加入到食品中。

1 试剂

试验过程中所使用的试剂有维生素C(标准品)、邻二氮菲、硫酸铁铵、冰乙酸、三水合乙酸钠、氢氧化钠、上述试剂由德国DR、广州化学试剂厂企业生产。在具体试验过程中，要对温度进行控制，一般情况下是在室温条件下完成[1]。

2 仪器与设备

在试验过程中所使用到的仪器设备有TU-1901双光束紫外分光光度计、高速离心机。

3 试验方法

3.1 缓冲溶液的配制

称取13.6g三水合乙酸钠溶于50mL蒸馏水，注入6mL乙酸搅拌均匀，用1%浓度的氢氧化钠溶液调节缓冲溶液PH值到4.75。

3.2 邻二氮菲的配制

称取4mg邻二氮菲，加入l000μL缓冲液，充分溶解。

3.3 硫酸铁铵的配制

称取24mg硫酸铁铵，加入l000μL缓冲液，充分溶解。

3.4 维生素C标准溶液的配制

称取2.5mg维生素C（标准品），加入缓冲溶液定容至1000μL。

4 样品中维生素C的测定

将样品研磨均匀后，称取一定质量移入离心管，加入缓冲液体积至1.5mL，充分混匀样品呈浆状，随后用高速离心机进行离心处理，吸取50μL的上清液到比色皿中，依次加入邻二氮菲150μL、硫酸铁铵150μL、缓冲溶液2150μL充分混合1分钟。然后测量其在510nm处的吸光值，并与维生素C标准浓度曲线进行比较分析，计算样品中维生素C含量。

5 参数确定与优化

5.1 最大吸收波长的确定

在具体试验过程中，维生素C会与显色剂有一定的结合，此时需要对相应的光谱特点进行分析。对于游离的显色剂以及维生素C设计，进行相应的光谱扫描，图1为相应的扫描结果。从图中可以得出，有利于显色剂溶液在200-900nm之间不存在明显的吸收峰，可以从曲线1中看出。游离显色剂在引入维生素的条件下，能够与维生素C发生快速的显色反应，从图中的曲线2可以看出，在波长510nm的位置，光谱曲线有明显的吸收峰，此时具体的峰值为2.285，该处可以判定为是生成物的特征吸收峰。

5.2 反应时间的确定

测量的波长点确定之后，分别移取50μL维生素C标准液、100μL邻二氮菲、100μL硫酸铁铵、2150μL缓冲液到比色皿中，充分的混合，在紫外可见分光光度计上进行时间扫描，具体的扫描结果为图2。由曲线可以看出，结合反应的速度非常快，维生素C与显色剂再结合一分钟之后，吸光值就趋于稳定状态，由此可以判定反应的时间为一分钟。

5.3 邻二氮菲用量的优化

图1 光谱扫描曲线

图2 反应的时间扫描曲线

在对邻二氮菲的用量进行优化时，维生素C溶液以及硫酸铁铵溶液的浓度分别为2.5mg/mL、2.4mg/mL，容积分别为50μL、150μL，然后选取4.0mg/mL邻二氮菲溶液，把这些溶液分为不同的溶剂放到比色皿中，然后反应一分钟的时间，随后进行相应的光谱扫描，图3为具体的扫描结果，从结果可以看出，在吸收波长为510nm时，邻二氮菲的引入量如果增加，那么吸光值也会随之增大，峰值最大处邻二氮菲的引入量为150μL，如果引入量继续增大，那么峰值会出现下降的现象[2]。

图3 光谱扫描曲线

5.4 硫酸铁铵用量的优化

在对硫酸铁铵的用量进行优化时，维生素C溶液以及邻二氮菲溶液的浓度分别为2.5mg/mL、4.0mg/mL，容积分别为50μL、150μL，此时所选取的硫酸铁铵的浓度为4.0mg／mL，把硫酸铁铵分为容积不同的样品，把它们放到比色皿中进行反应，反应一分钟之后进行相应的光谱扫描，图4为具体的扫描结果。从曲线结果可以得出，在波长为510nm处，硫酸铁铵的引入量与吸光值成正比，当引入量为150μL时，峰值达到上限，此时的体系不具有稳定性，因此该结合反应需要一定的时间。

图4 光谱扫描曲线

6 结语

该文章主要针对维生素C的相关显色反应进行了分析和研究，最终发现维生素C的质量浓度与相应的吸光值有一定的关系，在此基础之上，应用了相应的紫外分光光度法分析技术，由此可以实现维生素C含量的快速测定。