陈新敏，梁 华，郭 燕，何抒蔓,叶鑫梅，张跃川，蒋 康△

1.四川省妇幼保健院·成都医学院附属妇女儿童医院检验科，四川成都 610045;2.四川省雅安市石棉县人民医院检验科，四川雅安 625400

传染性单核细胞增多症(IM)是一种单核-巨噬细胞系统增生性疾病，EB病毒(EBV)感染为其主要致病因素，儿童和青少年常见，临床常出现发热、皮疹、咽峡炎、淋巴结肿大等非特异性表现，多数预后良好，部分患者可出现持续高热、肝功受损等重症表现[1]。由于IM发病隐匿，临床表现多样而复杂，临床误诊率和漏诊率较高[2]。因此，寻找用于IM早期诊断的更为灵敏而有效的方法显得尤为重要。目前，异型淋巴细胞比例、EBV抗体及EBV核酸检测等已在临床实验室开展。本研究旨在探讨异型淋巴细胞比例、EBV抗体(VCA-IgM抗体)、EBV核酸(EBV-DNA)检测联合用于儿童IM诊断的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年4月至2020年3月于四川省妇幼保健院·成都医学院附属妇女儿童医院就诊的儿童共185例。其中试验组85例，年龄2～10岁、平均(5.92±3.18)岁，男48例、女37例；试验组病例纳入标准：(1)根据《诸福棠实用儿科学》第7版[3]关于儿童IM的诊断标准，确诊为IM的患儿；(2)无合并其他疾病；(3)无其他特殊用药史。排除标准：病例资料不全，影响结果分析者。对照组为同期在该院进行体检的健康儿童，共100例，年龄1～10岁、平均(5.35±2.74)岁，男61例、女39例。本研究经该院伦理委员会批准，所有纳入研究者均知情同意。两组研究对象的性别构成、年龄、身高和体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 两组间一般资料的比较

1.2方法

1.2.1异型淋巴细胞检测 取适量血液制成涂片，瑞氏-吉姆萨染色，油镜下镜检，分类100个白细胞，计算异型淋巴细胞比例。异型淋巴细胞的形态按照《全国临床检验操作规程(第四版)》[4]描述的形态进行分类，判断标准采用Downey分类方法，将异型淋巴细胞分为Ⅰ型(浆细胞型)、Ⅱ型(不规则型)和Ⅲ型(幼稚细胞型)。若异型淋巴细胞比例>10%，则判为阳性。

1.2.2VCA-IgM抗体检测 采用化学发光法进行检测。采集未抗凝静脉血3 mL，自然凝固后，以3 500 r/min，离心半径10 cm，离心10 min，分离血清用于VCA-IgM抗体检测。使用索林公司Liaison XL型全自动化学发光仪及其配套试剂，严格按说明书的操作步骤进行检测。本室参考范围：<20 U/mL为阴性，20～40 U/mL为可疑，>40 U/mL为阳性。

1.2.3EBV-DNA检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法进行检测。EDTA-K2抗凝血2 mL，采用EBV核酸扩增荧光定量检测试剂盒(广东中山大学达安基因股份有限公司)，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。结果判定：测定值>1×103copy/mL判定为阳性。

2 结 果

2.1异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体及EBV-DNA的检测 试验组儿童的异型淋巴细胞比例为(16.31±6.95)%，阳性例数54例，而对照组儿童的异型淋巴细胞比例为(2.17±0.83)%，阳性例数6例，两组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。试验组VCA-IgM抗体和EBV-DNA检测阳性例数分别为69例和73例，与对照组相比较，阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体、EBV-DNA检测结果

2.2异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体及EBV-DNA单项和联合检测在儿童IM辅助诊断中的应用 异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体及EBV-DNA单项和联合检测结果显示，3个项目联合检验的灵敏度为92.94%，高于3个项目单独检验的灵敏度，但特异度低于3个项目单独检验，见表3。

表3 异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体、EBV-DNA单项和联合检测结果(%)

3 讨 论

EBV是一种嗜淋巴细胞的双链DNA病毒，属于疱疹病毒科，主要经唾液传播，人群中感染率超过95%。EBV感染后可在口腔咽部上皮细胞内增殖，引起呼吸道感染，并可长期潜伏在淋巴组织中，因此，其感染具有增殖性和潜伏性的特点[5]。EBV不仅是引起IM的重要病原体，而且与某些淋巴系统相关的肿瘤，如伯基特淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、T/NK细胞淋巴瘤等的发生密切相关[6-7]。EBV感染后症状不典型，与其他呼吸道感染性疾病症状相似，临床漏诊率和误诊率均较高。

健康人体内B淋巴细胞表面存在EBV受体，当人体感染EBV，B淋巴细胞表面的EBV受体(CD21)，最先受攻击，随后激活T淋巴细胞，使细胞毒性T淋巴细胞演变成异型淋巴细胞[8]。因此，异型淋巴细胞比例是临床辅助诊断IM常用的检测指标之一，约80%的IM患者血清中可见异型淋巴细胞比例增高[9]。EBV感染后，异型淋巴细胞比例随病程发展而变化，一般在发病初3～5 d出现，第7～10天达高峰后逐渐下降，持续2～8周。另外，因异型淋巴细胞由T淋巴细胞活化而来，在某种程度上反映了机体与病毒的相互作用，是临床评价IM病情严重程度的指标之一。本研究结果显示，IM患儿血清中异型淋巴细胞比例升高，为(16.31±6.95)%，阳性率为63.53%，与对照组患儿相比差异有统计学意义(P<0.05)，这也与国内学者的研究结果相似[10]。因而，异型淋巴细胞比例可作为EBV感染所致的IM的辅助诊断指标之一，其具有简单易行，低廉快捷，适用于基层医院，但由于异型淋巴细胞的形态识别具有主观性，检测者辨识能力的差异等因素，导致异型淋巴细胞比例的检测结果重复性、可比性较差。随着免疫学、分子生物学等检测技术的广泛应用，现已引入了EBV抗体及核酸检测等方法用于临床辅助诊断EBV感染所致的IM。

EBV感染机体后，B淋巴细胞可诱导机体发生体液免疫反应，产生一系列EBV抗体。原发性EBV感染时，机体首先产生对抗衣壳蛋白(CA)的IgM、IgG 抗体，即VCA-IgM、VCA-IgG抗体，其中VCA-IgM抗体最早出现，是急性感染期的可靠指标，其在体内持续1～2个月后逐渐消除，VCA-IgG抗体出现晚于VCA-IgM，急性感染晚期机体会出现抗早期抗原(EA)的抗体，恢复期会出现晚期抗核抗原(NA)的抗体，VCA-IgG、病毒中和抗体(VNA-IgG)在体内会持续存在[11]。鉴于EBV潜伏感染的特点及机体抗体产生的规律，临床上多以VCA-IgM阳性作为EBV感染所致IM辅助诊断的依据。本研究采用血清VCA-IgM抗体检测，研究结果也发现，69例已确诊为IM的患儿VCA-IgM抗体检测为阳性，有16例[18.82%(16/85)]的患儿抗体检测为阴性，这与儿童免疫系统尚未完全发育或处于病毒感染初期，机体感染病毒后，无法产生抗体或抗体量太低，导致血清学检测出现假阴性结果[12]。

随着分子生物学检测技术的发展，临床现已引入了荧光定量PCR检测EBV-DNA，通过定量检测患儿血清EBV-DNA水平反映体内病毒感染和复制情况[13]。该检测项目对IM的辅助诊断和疗效评估都具有重要意义。本研究结果显示，EBV-DNA检测的阳性率为85.88%，高于异型淋巴细胞比例和血清学抗体检测阳性率，这与CAO等[14]的研究结果相似。

由于IM起病隐匿，且与其他急性呼吸道感染性疾病的症状相似，临床易出现漏诊和误诊，因此有必要寻求针对儿童IM及时而有效的辅助诊断方法。目前，临床常用异型淋巴细胞比例、EBV抗体及核酸检测这3种检测方法来辅助诊断IM。本研究结果显示，3种方法联合检测诊断IM的灵敏度为92.94%，高于3种方法单独检测结果，与国内学者的研究结果较一致[15]。

因此，有条件的实验室，应将异型淋巴细胞比例、VCA-IgM抗体检测及EBV-DNA检测3个项目均开展，并进行联合检测，以提高辅助诊断IM的灵敏度，弥补单项试验的不足，降低漏诊率和误诊率。