苏文娟， 孔 伟， 张宝良

(甘肃省家畜繁育改良管理站，甘肃 武威 733000)

牛病毒性腹泻(BVD)，亦被称为牛粘膜病，被归类为一种接触型传染病，且传播力强、传播途径广泛。本病主要是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，临床主要的特征可以表现为体温升高明显、萎靡不振、食欲减退甚至拒食、逐渐停止反刍行为、粘膜充血肿胀、产奶量受到严重影响等典型症状。本研究通过对甘肃武威地区某牛场中13份样本进行血清学和基因层面的检测，了解该养殖场BVD发病的情况。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 病料来源 甘肃武威地区某牛场中腹泻病牛13只，采集静脉血2 mL，每只牛粪便20 g。

1.1.2 样品采集 选择有明显腹泻的病牛，采集静脉血2 mL，每只牛粪便20 g。

1.1.3 试验材料 爱德士生产的牛病毒性腹泻抗原试剂盒，天根RNA提取试剂盒，Takara生产的反转录试剂盒和扩增试剂盒。

1.2 方 法

1.2.1 血清学检测 取病牛血液进行3 000 r/min离心5 min，取血清进行检测，实验步骤参考爱德士牛病毒性腹泻抗原检测试剂盒说明说进行检测，结果进行数据分析判断阴阳性。

1.2.2 PCR鉴定 取粪便5 g进行反复冻融，过滤后进行提取，RNA提取方法参考天根RNA提取试剂盒使用说明书进行操作，反转录以及PCR参考Takara试剂盒使用说明书进行操作，引物采用BVDV 5′UTR引物进行扩增(F：5′-CCTAGCCAT-GCCCTTAGTAGGACT-3′；R：5′-GGAACTCCA-TGTGCCATGTACA-3′)[1]，引物在上海生工进行合成。

2 结果

2.1 血清学检测结果

使用爱德士牛病毒性腹泻抗原检测试剂盒检测血清显示，13份样本中有8份样本血清学检测为阳性，5份样本血清学检测结果为阴性。本次检测的阳性率为61.54%。

2.2 PCR鉴定结果

对13份菌株进行RNA提取，反转率，并使用BVDV 5′UTR引物进行扩增，结果显示其中8份样本可以扩增大小为267 bp的片段，如图1，本次检测的PCR鉴定结果与血清学结果相符。

注：M为DL-2 000 Marker；1～13号为样本。

3 讨 论

在1980年以后我国首次发现牛病毒性腹泻病，在随后的几十年里，多省也陆续有该病的报道[2]。2016年曲萍等对我国西北5个省，自治区进行了BVD流行情况的调查，结果显示不同的养殖方式牛患病感染的抗体阳性率在31%～100%不等，散养的牛感染情况明显高于舍饲或者半舍饲的[3]。2018年闫晓玲等对张掖地区的BVD感染情况进行调查结果显示检测到的样本感染阳性率为36.5%[4]。2018年Bettina等人对世界BVD的流行情况进行调查，调查的结果显示我国畜群水平的BVD抗体的阳性情况为20%～40%[5]。2017—2020年王衡等对武威地区的牛粪便进行了BVD的PCR检测，鉴定结果为12.5%～19.7%[6]。本次检测的抗原阳性率高达61.54%，阳性率相对较高，一方面可能由于本养殖场正处在BVD的急性发病期，且采集的样本均为有腹泻症状的病牛，所以检测到的阳性率较高，另一方面本次检测的样本量相对较少。后续笔者还会对武威地区该养殖场以及其他养殖场、散户的牛病毒性腹泻流行情况进行进一步研究，扩大数据量，更好地为牛病的防控情况做参考。

随着BVD在我国的流行越来越广泛，该病严重困扰着广大养殖户，当代的养殖业养殖场应该采取科学的手段，有效避免该病的发生。首先要加强对本养殖场牛的饲养管理，坚持自繁自养的模式，不从疫区引进牛只，新购买的牛必须要按照相关的规定做好隔离工作。第二，淘汰患病的牛，淘汰PI感染的牛，降低种群的阳性率，降低发病情况，减少传染源。第三，避免病毒的传播，对养殖场做好消毒工作，运输用具、水盆、食槽、圈舍进行彻底的消毒。第四，按照相关的规定，定期接种疫苗，使群体具有较强的抵抗力，且在平时的饲养中注重动物日粮搭配，增加动物的营养情况。

养殖业良好的发展在于我们每一个从业人员的不断努力，在过去的几十年我们在畜牧业，养牛业取得了很大的成绩，在量增长的同时，发生疾病的可能也就同时增多了，如何能够更好地让养殖业能够良性的发是我们每一个从业人员值得重视的问题。为了更好的解决养殖业疾病的困扰我们要对目前的一些常见病，如消化系统疾病，营养代谢疾病，呼吸系统疾病都应该进行更加深刻地了解，本研究针对牛病毒性腹泻病，一种十分常见的消化系统疾病就行了调查，调查结果显示被检测的13份样本有8份样本血清学检测和PCR鉴定检测结果均为阳性，阳性率高达61.54%，这也提示了该养殖场牛病毒性腹泻的发病率非常高，需要进行一些适当的措施来对牛群进行净化和治疗，降低自身的经济损失。同时本研究的调查结果也可以作为一手数据来为甘肃武威地区牛病毒性腹泻的流行情况以及疾病综合防控情况进行参考。