赵先亮 刘茜英 许俊博 张 娜▲

1.华润双鹤利民药业（济南）有限公司质量技术部，山东济南 250200；2.华润双鹤药业股份有限公司产品发展中心，北京 100102

硝苯地平临床适用于预防和治疗冠心病心绞痛、高血压，对顽固性、重度高血压也有较好治疗效果[1-7]。硝苯地平缓释片由德国拜耳首次研发应用于临床，相对于普通片，缓释片可使患者的血药浓度保持稳定，同时减少了服药频率，增加顺应性[8]；相对于控释片，缓释片的性价比更高[9]。但由于硝苯地平原料的难溶性、高渗透性和光不稳定性[10]，造成该产品生产过程质量不稳定的因素较多，体外溶出曲线的研究可以为口服固体制剂在体内作用的一致性提供评价依据，并可为产品处方工艺的改进提高提供支持和帮助[11-12]。使该产品与德国拜耳原研制剂Adalat-L 具有一致的溶出行为是保证其质量与疗效一致性的关键，如何参照原研制剂处方工艺，进行筛选优化，生产过程中如何控制影响其释放度的因素，从而保证质量及疗效与原研制剂一致，是仿制药企业面对的难题。目前，国内仿制药体内外的等效性不尽如人意[13-14]。本研究通过对硝苯地平缓释片（Ⅱ）处方工艺中影响制剂释放度的各种因素进行考察，得出了用于指导生产的关键参数。

1 仪器与试药

1.1 仪器

GZP-55 高速旋转式压片机（上海天和制药机械有限公司）；BGB-150D 高效包衣机（浙江小伦制药机械有限公司）；安捷伦1100 型高效液相色谱仪，包括G1322A 型真空脱气机、G1312A 两元泵、G1329A 型自动进样器、G1316A 型柱温箱和G1315B 型紫外检测器（安捷伦科技有限公司）；ZRS-8G 智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；FADT-1206 自动取样溶出系统（上海富科思分析仪器有限公司）；XS105DU型电子天平（瑞士Mettler 公司）；KQ-600DV 型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 药品与试药

乙腈（色谱纯，美国天地）；甲醇（色谱纯，美国天地）；吐温-80（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；磷酸（分析纯，莱阳康德化工有限公司）；异丙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；原研制剂Adalat-L（规格：20 mg，批号：JPS0089，日本BAYER）；硝苯地平对照品（纯度为99.8%，批号：100338-201605，中国药品生物制品检定所）；硝苯地平杂质Ⅰ对照品（纯度为100%，批号：100339-201604，中国药品生物制品检定所）；硝苯地平杂质Ⅱ对照品（纯度为100%，批号：100340-201604，中国药品生物制品检定所）；硝苯地平原料（批号：02-20180304，上海玉瑞生物科技有限公司）；玉米淀粉（山东聊城阿华制药股份有限公司）；硬脂酸镁（山东聊城阿华制药股份有限公司）；乳糖（江苏道宁药业有限公司）；微晶纤维素（江西益普生药业有限公司）；薄膜包衣预混剂（上海卡乐康包衣技术有限公司）。

2 方法与结果

2.1 硝苯地平缓释片（Ⅱ）的制备

参照硝苯地平缓释片原研专利处方工艺[15]，处方中原辅料经预处理、混合后，湿法制粒、压片，然后进行包衣。

2.2 溶出曲线的绘制

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.01 mol/L 磷酸氢二钠溶液（11∶9，磷酸调节pH 值至6.1）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：40℃；进样量：50 μL。理论塔板数按硝苯地平峰计算不低于4000。

2.2.2 释放度测定 查阅相关文献发现，已经报道的该类品种释放度测定方法不少，使用的释放介质有0.1 mol/L氯化氢溶液[16]、磷酸盐缓冲溶液[17]、蒸馏水[18]、0.5%十二烷基硫酸钠（SDS）水溶液[19]、0.25% SDS 水溶液[20]、0.4%吐温-80 磷酸盐缓冲液[21]、0.5%吐温-80 氯化钙溶液[22]等。本研究采用日本橙皮书[23]中硝苯地平缓释片的释放度测定方法（同原研制剂一致），以0.3%吐温80 水溶液900 mL 为溶出介质。测定全程避光，取样品6 片，照溶出度与释放度测定法（《中华人民共和国药典》[24]2015 年版四部通则0931 第二法） 浆法，将片剂同时放入溶出杯内，转速为75 r/min，温度37℃，依法操作，分别于0.5、1、2、4、8、12 h 取溶液10 mL，滤过，弃去初滤液5 mL，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质，取续滤液作为供试品溶液；另取硝苯地平对照品约15 mg，精密称定，置10 mL 量瓶中，加甲醇适量超声使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用溶出介质定量稀释制成每1 mL约含硝苯地平20 μg 的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（《中华人民共和国药典》[25]2015 版三部通则0512），精密量取供试品溶液和对照品溶液各50 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算每片溶出量，并计算相应时间的药物累积释放度。

以取样时间为横坐标、以累计溶出量为纵坐标绘制溶出曲线，并采用相似性f2因子法评价不同供试品与参比制剂溶出曲线的相似性，如果f2≥50，则表示两种制剂在所评价的时间内溶出度相似[26]。

2.3 方法学验证

按照《中华人民共和国药典》[24]2015 年版“药品质量标准分析方法验证指导原则”对该方法进行了全面的验证，验证项目及结果见表1，结果显示分析方法准确可靠。

2.4 影响因素考察

硝苯地平缓释片释药机制是利用硝苯地平几乎不溶于水的特点，对硝苯地平原料进行微粉化处理，使其粒径成微细分布，在介质中缓慢逐步溶解，达到缓释的结果[13]。原研制剂专利处方选用的辅料包括乳糖、微晶纤维素、淀粉、吐温-80 及硬脂酸镁等，均为口服固体制剂常用辅料。基于硝苯地平缓释片制剂释放机制分析，影响药物释放行为的主要因素有原料粒径、填充剂、黏合剂、表面活性剂、包衣层用量等处方及其工艺参数。

2.4.1 原料粒径 硝苯地平缓释片原研专利[15]中，限定了硝苯地平的比表面积范围（0.5～6 m2/g），提示硝苯地平的粒径D90会影响药物的释放曲线。因此，需考察不同粒径硝苯地平原料对缓释片释放度的影响。本研究使用三种不同粒径原料：原料1（D90：65 μm）、原料2（D90：35 μm）、原料3（D90：5 μm）分别制备硝苯地平缓释片。体外释放度测定结果见表2 及图1A。结果显示，原料粒度越小，体外释放速度越快，与缓释机制相吻合。当硝苯地平原料粒径D90达到35 μm 时，制剂体外释放曲线与原研制剂一致。

2.4.2 填充剂 原研制剂Adalat-L 采用了乳糖和微晶纤维素两种填充剂，乳糖为水溶性填充剂，微晶纤维素不溶于水兼具有崩解剂的作用，这两种辅料用量比可能对硝苯地平缓释片（Ⅱ）的体外释放有影响。因此，对两种辅料的用量进行了研究，乳糖∶微晶纤维素用量分别为1∶2、1∶1 和2∶1。体外释放度测定结果见表2及图1B。结果显示，乳糖的比例增加对硝苯地平释放有一定的促进作用，这可能与亲水性辅料乳糖在一定程度上减小了疏水性药物的接触角，改善了硝苯地平的润湿性有关。当乳糖用量与微晶纤维素用量比例相等或低于微晶纤维素比例用量时，制剂体外释放曲线与原研制剂一致。

2.4.3 黏合剂 硝苯地平缓释片（Ⅱ）依靠原料在水中难溶特性实现缓释，加入黏合剂后制得颗粒硬度及崩解性能对该品的释放有较大影响。因此，考察不同浓度的淀粉浆对其释放度和稳定性的影响，淀粉浆浓度分别为8%、10%、15%。体外释放度测定结果见表2及图1C。结果显示，黏合剂浓度增加，制剂释放速率减慢，黏合剂的浓度是影响制剂释放速率的关键因素之一。

2.4.4 表面活性剂 吐温80 作为一种表面活性剂，可以增加难溶性原料药的释放速率。因此，考察不同吐温80 加入量对缓释制剂释放速率和稳定性的影响，吐温80 的用量分别为0.5%、1%、1.5%时，制剂释放度测定结果见表2 及图1D。结果显示，吐温80 的用量在0.5%～1.5%范围内，对制剂释放速率相近。这可能与表面活性剂加入量少，在固体制剂中仅起到增加药物润湿性的作用，而不是增溶的作用有关。

2.4.5 包衣层 硝苯地平是高光敏感药物，遇光易发生化学歧化作用，降解为杂质Ⅰ及杂质Ⅱ[27-28]，所以具有遮光作用的薄膜衣将对该产品的质量稳定性具有较大影响。薄膜包衣不仅避免了制剂有关物质的增加，也会影响药物的释放，因此，考察不同包衣增重对其释放速率的影响。包衣增重分别为1%、3%、5%。体外释放度测定结果见表2 及图1E。结果显示，一定范围内的包衣厚度对本品体外释放度相近。

表2 各影响因素对硝苯地平缓释片（Ⅱ）释放度的影响

3 讨论

目前我国硝苯地平缓释制剂多为骨架型缓释片，采用亲水硅胶材料如羟丙甲纤维素及羟丙纤维素等为骨架材料，存在缓释骨架溶散过快或崩塌导致突释现象弊端[13]，而且该基质缓释系统释药速度与外部环境变量有较大关系，易受如pH、溶出介质及搅拌速率的影响[29]，很难做到与原研制剂释放行为完全一致[11-12，30]。本研究参照原研制剂处方工艺，研究制剂的缓释作用机制与原研制剂相同，避免了大量高分子骨架辅料导致的人体代谢负担，通过研究最终确定控制硝苯地平缓释片（Ⅱ）释放度的关键处方工艺参数包括原料粒径D90：10～40 μm，乳糖与微晶纤维素用量比例相等，淀粉浆浓度为10%，吐温80 的用量为0.5%，包衣增重为3%。

图1 各种影响因素下溶出曲线（n=6）

研究过程中发现原辅料的质量波动是影响该产品批量生产质量稳定性的重要因素。原料D90限度制定应基于原料粒径的正态分布，这对原料的粉碎及混合提出了更加严苛的要求，应对原料制定粒度内控标准，保证不同批次硝苯地平原料粒径分布的一致性是保障制剂释放行为一致性的关键；国产玉米淀粉、乳糖及微晶纤维素批间差异较大，未从分子聚集状态、粒径等方面进行细化分型，特定型号的辅料使用是保障所生产制剂质量稳定的关键因素，需要生产企业密切关注原辅料生产企业的处方工艺稳定性，并研究制订适当的入厂内控标准防控质量波动。

因硝苯地平具有光敏性，为保证产品的质量，生产和储存过程中应采用适当的避光措施，产品增加了薄膜包衣在一定程度上降低了其见光降解速度，为进一步保证产品稳定性，应采用避光的上市包装。