王鑫鑫 河南省民权县综合检验检测中心

游离氨基酸组成是生物技术和生物医学代谢研究的一个重要指标，也是食品营养分析中常用的一个参数。高效液相色谱和氨基酸自动分析仪是氨基酸定性和定量分析的常用仪器，全自动化氨基酸分析仪的移动相和试剂价格昂贵，因此氨基酸的成分和含量采用高效液相色谱分析。氨基酸分析一般分为生物液体和食物，检测方法为氨基酸分析仪和高效液相色谱法。在检测实际食物成分的过程中，氨基酸分析仪的方法有许多优点，例如易用性。但是，在实践中，必须认识到氨基酸分析仪比其他检测方法更昂贵。此外，由于标准和环境的差异，可靠性得不到有效保证。如果氨基酸是液相色谱分析的，通常是人工推导出来的。但是，这种处理方法劳动强度高，步骤复杂，重复性差。这项研究选择了一些常用的衍生物试剂，这些试剂在网上衍生后经过直接处理和分析，从而消除了传统操作造成的错误。本文试剂研究结果表明，本文采用的分析方法是重复的，值得推广。

一、实验准备

（一）检测仪器与试剂的准备

高效液相色谱是常用的色谱检测方法。其基本原理是将不同溶剂作为液相导入到具有固定相的彩色列中。分离待试验物体的组成后，应使用有关设备进行检测，完成样品分析。目前，高效液相色谱已广泛应用于化学和医学等许多领域。随着高效液相色谱的广泛应用，其技术和设备不断更新。目前常用的高效液相色谱设备是敏捷1100高效液相色谱、赛多尔天平TB-215D等。这些设备具有灵活性和高精度，能够满足日常检测需求。目前，高效液相色谱中常用的试剂主要是含有10mg/mL的邻苯二甲酸酯溶液、0.4N和ph10.4的硼酸缓冲溶液。这些试剂易于设置，可以满足人们的日常检测需要。此外，还需要制备三乙胺等试剂，三乙胺是常用溶剂和催化剂之一，在高效液相色谱应用中发挥着重要作用。

（二）样品预处理方法分析

在进行高效液相色谱检测之前，必须进行必要的预处理，以确保检测的顺利进行和结果的有效性。最可靠的预处理方法是在试管中预先称重一定数量的食物，具体数量必须根据实际情况确定。然后按比例将盐酸添加到喷嘴中。然后，它执行水解等活动。以上处理后，用容积瓶等进行定量工作以便于后续测试。

二、结果与讨论

1.分析氨基酸的常用推导方法有：PA推导方法、fdb推导方法、pit推导方法等。为确保衍生物效应，分别选择了PA和FMOC作为初级衍生物和二级氨基酸衍生物。在一定的浓度范围内，二极管阵列探测器可以显示良好的线性关系，相关系数为0.9988～ 0.9999。不同浓度氨基酸的重复实验精度低于5%。当信噪比为3时，二极管网络检测线检出限为1～4mol。在测量样品时，回收率可达90%至97%，取得最佳结果。但是，就固体样品的测量而言，只能得到78%至89%的回收率，样品的状况也与预处理有关。PA推导方法具有反应速度快、灵敏度高、不干扰过强的衍生物分离等特点，但这种推导方法不能直接与氨基酸及其衍生物反应，具有不稳定的缺点。由于衍生物衰减速度快，人工分流操作时间难以保证均匀性，成为液相检测氨基酸常规分析中最不稳定的因素。本文选用FM0C作为二次氨基酸衍生物试剂，采用自动取样器进行在线漂移，有效消除了离线漂移和手动操作引起的误差，降低了工作强度，提高了漂移精度。

2.虽然显示器的灵敏度高于二极管阵列显示器，但它们基本上对酪氨酸没有反应。由于一般样品中氨基酸的实际含量对二极管阵列探测器来说是足够的，而且当探测器串联连接时，屏幕光源探测器在二极管阵列后面有大量死量，定量检测主要基于二极管阵列探测器的结果。光分析仪的数据只有在样品溶液浓度低于50pmol/μ时才能量化，但酪氨酸必须始终使用二极管网络信号量化。表征是分析和检测氨基酸的一个常见问题。在仅仅确定氨基酸的保存期限时，往往难以确保其可靠性。本研究采用连续使用方法。一方面对二极管网络检测特性进行定位，另一方面以两种不同的探测器作为定性参考。使用这种方法在某种程度上提高了定性分析的准确性。该研究方法可同时测量食物中的17种氨基酸，具有高质量分析和高质量、准确分析的优点。此外，本文件使用的研究方法不需要购买特殊的分析工具，测试费用低，可以推广。

三、结束语

综上所述，高效液相色谱的应用对于测量食品中氨基酸含量十分重要。本文通过分析相关数据，研究了高效液相色谱中使用的设备和试剂，探讨了高效液相色谱分析方法和主要结果分析要点。这些研究有助于高效液相色谱的应用和食品检测的发展。