李华岑，刘素梅，邱天宝，韩 江

（1.河南省兽药饲料监察所，河南 郑州 450008；2.河南牧业经济学院）

健胃散是《中国兽药典》（2015年版）中的经典方剂，其功效为消食下气，开胃宽肠。大量的临床实验证明健胃散能预防和治疗胃肠道疾病，能提高动物的生长性能。为提高健胃散质量标准，建立了一种高效液相色谱法测定健胃散中熊果酸的含量的新方法，该法简单、准确，可以较好地控制健胃散中熊果酸的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器与设备

Waterse2695高效液相色谱仪，配紫外检测器；XBridge®C18色谱柱；METILERXP205电子天平。

1.2 试药及试剂

山楂、槟榔、六神曲、麦芽、熊果酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111742-201823)，甲醇、乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 实验方法

2.1 色谱条件

XBridge®C18色谱柱（5μm，4.6NN 150mm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20），柱温为25℃，检测波长为210nm，进样量为10μl。

2.2 标准工作液的制备

精密称取熊果酸对照品10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度线，摇匀；使用时用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取健胃散阳性样品1g，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇至近刻度，超声30min，加甲醇至刻度线，摇匀，即得；取健胃散阴性样品0.68g，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇至近刻度，超声30min，加甲醇至刻度线，摇匀，即得。

3 结果与讨论

3.1 线性与范围

精密称取熊果酸对照品10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度线，摇匀；使用前用甲醇稀释成浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的标准工作液，备用，使用时用0.45μm的微孔滤膜过滤，注入液相色谱仪，保存色谱图，用对照品溶液浓度与相应组分峰面积计算回归方程和相关系数。得到回归方程为A=4518.8C+684.81，相关系数r=1.0000，即在5～100μg/ml的浓度范围内和峰面积呈现良好的线性关系。

3.2 专属性

分别称取健胃散阳性样品、健胃散阴性样品、熊果酸对照品按照样品制备方法，在2.1的色谱条件下，记录色谱图。根据所得到的色谱图可知，熊果酸阴性样品色谱图中在熊果酸对照品色谱峰位置无相应的色谱峰，说明专属性良好。

3.3 精密度

取100μg/ml的标准工作液，在2.1色谱条件下重复进样6次，记录色谱图，计算得到100μg/ml对照品溶液中熊果酸峰面积的RSD为0.06%，结果表明方法精密度良好。

3.4 准确度

精密称取健胃散阴性药材6份，每份为0.68g，按照2.3项下制备样品溶液，分别精密加入100μg/ml的熊果酸对照溶液18μl，在2.1色谱条件下进行测定，记录相关数据。健胃散阴性样品中熊果酸平均回收率为99.7%，RSD值为0.2%。

3.5 稳定性

按照.2.3项下操作制备1份健胃散阳性样品溶液，分别在0、2、4、6、8、12h以2.1为色谱条件进样测定，记录色谱图。健胃散阳性溶液中熊果酸色谱峰面积的RSD值为1.38%，结果表明样品在12h内稳定性良好。

3.6 重复性

精密称取同一批健胃散阳性样品6份，每份1g，精密称定，照2.3项下方法制备供试品溶液，在2.1为色谱条件下测定，记录相关数据。健胃散阳性样品中熊果酸的平均含量为1.82mg/g，RSD值为1.73%，结果表明方法重复性良好。