杨勇 金鑫 张望元 周煜 闫伟武 谢军

摘要：为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）与副猪嗜血杆菌（HPS）混合感染时的病理变化特征，对临床收集的经实验室诊断为PRRSV、PCV2和HPS混合感染的8例患猪进行大体病理变化与组织病理学变化观察。结果表明，PRRSV、PCV2与HPS混合感染时大体病理学变化表现为胸腔与腹腔纤维素性渗出物增多，全身淋巴结肿大出血，肺尖葉与心叶实变，肾表面有出血点，肝表面有白斑。组织病理学观察发现多发性浆膜炎、间质性肾炎、化脓性肺炎、化脓性脾炎、化脓性淋巴结炎等。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒2型;副猪嗜血杆菌;混合感染;病理学变化

中图分类号：S858.28         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2020）18-0099-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.18.019 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Pathological analysis of co-infection of PRRSV，PCV2 and HPS

YANG Yong1，JIN Xin2，ZHANG Wang-yuan1，ZHOU Yi2，YAN Wei-wu3，XIE Jun2

（1. Jingshan Animal Disease Control and Prevention Centre，Jingshan  431800，Hubei，China;2.Hubei Center for Animal Disease Control and Prevention，Wuhan  430064，China;3.Hubei Agriculture Development Center，Wuhan  430064，China）

Abstract： 8 cases of swine co-infected with Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV）， Porcine Circovirus Type 2 （PCV2）， Haemophilusparasuis （HPS） were collected. In order to distinguish the difference in pathological between these three pathogens， gross pathology and histopathological were carried out. The results showed that when the swine co-infected with PRRSV， PCV2 and HPS， the gross pathology mainly included with increasing of fibrous exudation in the thoracic cavity and abdominal cavity， systemic lymph node enlargementing and hemorrhaging， consolidation of lung in tip and heart leaf， hemorrhagic spots on the surface of kidney and white spots on the surface of liver. The histopathological changed mainly showed polyserositis， interstitial nephritis， suppurative pneumonia， suppurative splenitis， suppurative lymphadenitis.

Key words： porcine reproductive and respiratory syndrome virus; porcine circovirus type2; Haemophilus parasuis; co-infection; pathological diagnosis

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）与副猪嗜血杆菌（HPS）是危害养猪业的常见病原。PRRSV和PCV2均是免疫抑制性病毒，猪感染后容易导致机体抵抗力下降，继而引起其他病毒或者细菌感染。副猪嗜血杆菌是一种猪的呼吸道病传染病病原，该菌常继发或混合感染其他病毒、细菌，造成高死亡率，给中国养猪业造成巨大的经济损失。宋宏立等[1]通过实验室诊断确诊了一例PRRSV、PCV2和副猪嗜血杆菌的混合感染病例。Cheong等[2]通过对猪场的病料进行PCR检测发现PRRSV、PCV2和HPS这3种病原的感染率很高，PRRSV为52.3%、PCV2为29.4%和HPS为69.6%，且发病具有显著的混合感染趋势。

病原体的混合感染给临床疾病的诊断带来了很大的挑战。对于混合感染病例的诊断既要求精确地诊断出动物群体中混合感染的各种病原，又要区分出疾病的主要病原和次要病原，才能有效地控制疫情。实验室诊断一般采用PCR和RT-PCR检测病原，而PCR和RT-PCR的检测结果只能说明这些病原在动物机体内存在，并不能反映机体的实际状态[3]。不同的病原体有不同的主要攻击靶细胞，在临床感染后会出现特征性的病理变化。因此，病理诊断技术是从宏观病变观察结合微观诊断，进而得出疾病诊断的结论[4]。本研究主要通过大体病理变化与组织病理学观察对PRRSV、PCV2和HPS混合感染病例进行病理学分析，旨在为临床快速诊断与鉴别诊断疾病提供依据。

1 材料与方法

1.1 病料来源

临床病例8例，分别来源于荆门市京山市的8家规模化养猪场。

1.2 主要试剂

DL2000 Marker，购自宝生物工程（大连）有限公司;磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司;猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型RT-PCR检测试剂盒和猪圆环病毒2型PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1.3 病毒的检测

用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒核酸，按照猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型RT-PCR检测试剂盒和猪圆环病毒2型PCR检测试剂盒说明书操作，进行PCR和RT-PCR扩增，反应结束后取扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳成像，观察记录病原检测结果。

1.4 细菌的分离与鉴定

无菌挑取病猪的肺组织，划线接种于TSA培养基（5%无支原体新生牛血清+1%NAD），置于37 ℃恒温箱中，培养24 h。挑取单菌落，进行革兰氏染色，并镜检。通过观察细菌染色形态与菌落形态，挑取单个菌落进行传代纯化培养。将细菌纯培养物按常规方法接种到微量生化鉴定管，在37 ℃恒温箱培养24 h，观察记录结果。

1.5 病理学分析

对送检病猪进行剖检，观察各组织器官的病理学变化，取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、扁桃体等组织，经福尔马林溶液固定后进行常规石蜡包埋、切片及HE染色。利用Nikon 80i生物光学显微镜观察组织病理学变化，同时详细记录组织微观病变。

2 结果与分析

2.1 病毒检测结果

经RT-PCR和PCR检测，从8家猪场病料中扩增出的基因片段与试剂盒阳性对照大小一致，结果见图1、图2。结果表明，8家猪场的病料均为PRRSV、PCV2阳性。

2.2 细菌鉴定结果

分离得到的细菌在TSA培养基上生长良好，菌落呈灰白色，光滑，透明，边缘规则，呈露滴状。革兰氏染色后镜检呈革兰氏阴性的长杆菌。生化鉴定结果表明，氧化酶呈阴性，尿素酶呈阴性，触酶呈阳性，CAMP试验阴性，发酵葡萄糖、蔗糖、果糖和半乳糖。该细菌鉴定为副猪嗜血杆菌。

2.3 PRRSV、PCV2与HPS混合感染猪的大体病理学特征

8例病猪临床表现消瘦，被毛粗乱，耳朵与腹部常有出血点，存在腹式呼吸。剖检可见胸腔、腹腔与关节腔内浆液性渗出物增多，严重时可观察到心外膜呈绒毛状，肺胸膜和肋胸膜有大量纤维素性渗出物附着并发生黏连（图3A），腹腔脏器表面有纤维素性假膜覆盖，关节腔有浓稠的黄色液體（图3B）。肺尖叶、心叶有暗红色的实变区，呈斑驳状，部分肺表面有出血点（图3C）。心表面除纤维素性渗出物增多外，常有针尖状的出血点。全身淋巴结肿大，轻微出血，颜色呈棕黄色（图3D），部分淋巴结切面粗糙，有颗粒感。肾色淡，皮质与髓质有针尖大小的出血点，部分肾表面有大小不等的白色斑点（图3E）。肝变性，质地脆软（图3F），偶尔肝硬化，表面有白斑。

2.4 PRRSV、PCV2与HPS混合感染猪的组织病理学特征

组织切片观察可见心、肺、肝等组织被膜外可观察到大量纤维素性渗出物，呈明显的纤维素性胸膜炎与纤维素性腹膜炎变化（图4A、图4E）。心肌细胞坏死，间质有淋巴细胞浸润灶（图4B）。肺泡腔及支气管内有中性粒细胞浸润（图4C）。淋巴结水肿，淋巴细胞减少，中性粒细胞浸润（图4D）。肝窦扩张，枯否氏细胞、中性粒细胞增多（图4F）。脾淋巴细胞严重减少，中性粒细胞浸润（图4G）。肾间质有淋巴细胞浸润灶（图4H），肾小球肿大，毛细血管淤血，肾小管变性、坏死（图4I），髓质间质中有多个出血灶。

3 讨论

PRRSV、PCV2与HPS 3种病原的单独感染与混合感染时病理变化有较大的差别。PRRSV单独感染病理变化以间质性肺炎，淋巴结出血和淋巴细胞减少为特征[5]。PCV2单独感染时组织病理变化以淋巴结淋巴细胞耗竭，巨噬细胞浸润，扁桃体和脾内存在PCV抗原的包涵体，其他多个器官有淋巴细胞浸润或肉芽肿性炎症为特征[6]。HPS急性感染经常产生急性败血症，其内毒素诱导血管内弥散性凝血，导致多个器官形成微血栓，全身感染特征为胸腔与腹腔浆液成分增多，呈现关节炎和脑膜炎。慢性感染则出现严重的纤维素性脓性心包炎、胸膜炎、腹膜炎和慢性关节炎[7]。PRRSV与HPS混合感染病理变化表现为胸腔内积有大量混浊液体，心外膜呈“绒毛心”状，肺间质增宽、水肿，气管和支气管内有大量带泡沫的液体，全身淋巴结肿大、出血[8]。PCV2与HPS混合感染病理变化表现为全身淋巴结肿大，胸腔与腹腔纤维素性渗出物增多，肺水肿，关节炎，肾脏呈土黄色表面布满白斑[9]。

PRRSV与PCV2感染属于免疫抑制性疾病，破坏机体的免疫防御系统，使机体易感染其他病毒或细菌。研究表明，PRRSV感染通过其编码的蛋白质抑制宿主先天免疫，损害巨噬细胞并阻断局部免疫;PCV2感染后优先靶向淋巴组织，导致猪的淋巴细胞耗竭和免疫抑制，损害宿主的免疫防御能力。PRRSV感染可加速机体对HPS的感染[10]，HPS感染可以增强PRRSV感染介导的炎症反应。

本研究发现PRRSV、PCV2与HPS混合感染时大体病理学变化为胸腔与腹腔纤维素性渗出增多，全身淋巴结肿大出血，肺尖叶、心叶实变，膈叶间质增宽、水肿。组织病理学观察到多发性浆膜炎、间质性肾炎、化脓性肺炎、化脓性脾炎、化脓性淋巴结炎、坏死性肾炎、肝窦扩张中性粒细胞浸润。PRRSV、PCV2与HPS混合感染时通过组织病理学观察发现各组织中中性粒细胞大量浸润，推测这可能是PRRSV与PCV2促进了HPS的易感性，增强了HPS的致病性，导致机体组织中中性粒细胞增多。

结合送检病例的发病情况，通过临床病理剖检、细菌分离鉴定和病毒检测等实验室检查，综合判定为PRRSV、PCV2与HPS的混合感染。组织切片结果表明，PRRSV、PCV2与HPS的混合感染病例各组织的病理变化均较单独感染病例严重。因此，不同规模的养殖场均应通过加强饲养管理、强化生物安全和使用有效药物等综合措施来预防控制疫病，尤其是混合感染疫病的发生。

参考文献：

[1] 宋宏立，崔 欢，张 诚. 猪蓝耳病毒、猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染的实验室诊断及血清抗体检测[J].兽医科学，2019（23）：84-87.

[2] CHEONG Y，OH C，LEE K，et al. Survey of porcine respiratory disease complex-associated pathogens among commercial pig farms in Korea via oral fluid method[J]. Journal of veterinary science， 2017，18（3）：283-289.

[3] 樊福好.猪健康状态的数学评价[J].养猪，2010（1）：57-58.

[4] 程志萍.兽医病理学在动物疫病诊断及生产中的应用[J].中国畜禽种业，2019（9）：56-57.

[5] HUANG C，DU Y，YU Z，et al. Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus Nsp4 cleaves VISA to impair antiviral responses mediated by RIG-I-like receptors[J]. Sci Rep， 2016， doi： 10.1038/srep28497.

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[8] 譚实勇， 邓瑞林， 罗满林. 猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治[J]. 畜牧与兽医， 2010， 42（4）：90-92.

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[10] YU J， WU J， ZHANG Y， et al. Concurrent highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection accelerates Haemophilus parasuis infection in conventional pigs[J]. Veterinary microbiology， 2012， 158（3-4）： 316.