王蕾 张习本 李鑫

摘要：为更好的保护地方特色品种——威宁鸡，在乌蒙山区纳雍县选取5个规模养殖场，对其禽流感H5疫苗免疫效果進行调查。结果表明，5个规模养殖场在使用疫苗免疫后抗体阳性率直线上升，抗体保护率好，免疫效果佳，以上5个场的免疫方法及程序可在纳雍县及周边区县推广使用，对保护乌蒙山区威宁鸡及其他品种鸡群养殖具有重要意义。

关键词：威宁鸡;禽流感;免疫效果;乌蒙山区

中图分类号：S858.31        文献标识码：A        文章编号：1007-273X（2020）10-0005-02

威宁鸡因主要生活在乌蒙山区，故又称乌蒙鸡，属中型蛋肉兼用型品种。主产于贵州省毕节市纳雍县、赫章县等地。该品种具有耐粗饲、抗寒、抗湿、肉质鲜美、蛋大壳厚和蛋黄品质良好等特点，是贵州省优良特色地方畜禽品种资源。

禽流感是养鸡生产中常见的病毒性疾病，属甲型流感病毒，不同品种、年龄段的鸡均可感染，鸡群一旦感染流感病毒，短时间内会传播至附近鸡场，传播速度极快，给家禽养殖业造成较大损失[1]。禽流感临床可分为最急性型、急性型和温和型3种，最急性型病毒致病力最强，感染鸡死亡率非常高，急性型临床发病最多，病鸡主要表现呼吸道症状和全身症状，死亡率较低，温和型常为隐形感染，临床症状不明显[2]。

因独特的地理优势和悠久的畜牧文化，纳雍县是贵州省毕节市家禽养殖大县，目前全县家禽存栏量266万羽。同时，纳雍县也是威宁鸡的重要产区。为了更好保护地方优势特色品种资源，维护家禽养殖业的良好发展，助力毕节试验区按时打赢脱贫攻坚战。本调查将纳雍县5个育有威宁鸡的规模养殖场作为调查目标，对调查场的禽流感H5亚型血清抗体进行检测。评估春防免疫结果，为纳雍地区禽流感防控提供理论基础。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  受试养殖场和农户  分别在纳雍县维新镇、厍东关彝族苗族白族乡、化作苗族彝族乡、羊场苗族彝族乡随机选取5家威宁鸡规模养殖场，每场选取50羽雏鸡进行禽流感疫苗免疫效果调查。通过当地畜牧管理部门了解到，以上5家规模养殖场均使用了哈尔滨某疫苗公司生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗。

1.1.2  标准抗原  禽流感H5亚型标准抗原购自哈尔滨维科生物技术开发公司，生产批号为2018011。

1.1.3  主要材料  无菌采血管、单道可微量移液器、离心机、96孔V型微量血凝板、振荡器。

1.2  方法

1.2.1  基本情况  以上5个鸡场均在当地畜牧养殖部门的指导下于4月5日进行禽流感免疫工作，且均使用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗。一个月后，即5月5日进行加强免疫。

1.2.2  血液样品采集  第1次采血：首次免疫前2 d进行第一次采血，每个场选取50羽威宁雏鸡进行无菌采血，用于测量母源抗体。第2次采血：在首免30 d后对受试雏鸡进行采血。第3次采血：在加强免疫后30 d后对受试雏鸡进行采血。血液均采集在无菌采血管中，-4 ℃保存并快速送至实验室。

1.2.3  血清抗体检测

（1）血清制备。取2 mL血液于血样试管中，2 000 r/min离心5 min。观察到血球沉淀，血清悬浮于血球上层。无菌吸出血清置于无菌EP管中保存。沉积的红细胞用PBS配制成1%的红细胞悬液[3]。

（2）血凝抑制试验。反应在96孔V型血凝板上进行，每排检验1个样品。每排1～12孔均加入50 μL生理盐水，第1孔中加入被检血清50 μL，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50 μL。第1孔至第12孔加入4单位标准禽流感抗原50 μL，第12孔为病毒对照。每孔加入1%的鸡红细胞悬液50 μL。振荡均匀，后置于37 ℃恒温箱中30 min，然后进行结果判定。以红细胞100%不凝集的反应孔判为该血清的HI抑制价。

2  结果与分析

通过血凝抑制试验检测，5个规模养鸡场（命名为A、B、C、D、E场）在进行免疫前后禽流感H5抗体情况如表1、表2、表3所示。根据农业部标准，禽流感血凝抑制抗体效价HI（log2）≥4为免疫合格。试验结果显示，免疫前5个规模场的威宁鸡禽流感H5母源抗体水平均较低，96.8%受试威宁鸡母源抗体水平未达4Log2，其中4个场抗体阳性率均低于5%，尤其是E场母源抗体水平最低，为0（表1）。首次免疫后，5个场强制免疫疫苗抗体阳性率显著提高，A场抗体水平达到7log2，B、C、E场均达6log2，D场达5log2，抗体阳性率均上升至50%以上，其中4个场上升至75%以上，尤其是A、E场抗体阳性率高达90%及以上（表2）。加强免疫后，A、C、E场抗体水平达到8log2，B和D场达6log2，A、B、C、E场抗体检测阳性率均达到95%以上，A场达到100%（表3）。

综合分析，免疫前5个养殖场禽流感H5母源抗体均很低，抗体阳性率均在10%以下，难以达到保护效果。在进行首次免疫后，受试场的抗体阳性率均快速提高，A和E场高达90%及以上，疫苗保护率平均可达80%。加强免疫后，5个场抗体阳性率均稳步上升，疫苗保护率平均达到96.8%，A、C、E场疫苗免疫抗体阳性率均在98%及以上（图1）。因此，受试场疫苗免疫的抗体产生水平和保护率均达到理想水平。

3  讨论

禽流感是由正黏病毒科、流行性病毒属A型流感病毒引起的一类传染病，被世界卫生组织列为A类传染病[4]。据纳雍县畜牧部门介绍，该地多呈温和型感染，且近2年来多呈H5亚型暴发，临床表现呼吸道症状，鸡产蛋量下降，器官出血性病变等。给当地家禽养殖业带来了巨大损失。

目前，高致病性禽流感不予治疗，温和型禽流感的治疗也局限在中药和抗病毒因子的生物制剂，且治疗痊愈速度远远低于传播速度。所以该病的控制方式首选疫苗防控，免疫效果好和抗体保护率高的疫苗对防控禽流感具有非常重要的意义。对纳雍县范围内5个规模场威宁鸡禽流感的抗体效价进行调查，结果表明重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗能有效刺激威宁鸡产生禽流感H5抗体。尤其是在加强免疫后，禽流感H5抗体阳性率均在90%以上，对鸡群起到非常好的保护作用。

防治鸡禽流感必须进行规范的疫苗免疫，听取当地畜牧部门的建议，了解当地禽流感病毒的分子生物学特征和流行特点后，选择更加合适的疫苗和免疫程序。规范免疫、科学管理、加强监控，能在很大程度上避免禽流感的发生，为当地绿色规范家禽养殖增添一道保护屏障。

参考文献：

[1] 许文珍.鸡禽流感流行特点与防治措施分析[J].江西畜牧兽医杂志，2018（5）：42-43.

[2] 李亚玲.鸡禽流感病防治[J].畜牧兽医科学，2019（23）：76-77.

[3] 曹洪敬，颜世敢，王文志，等.微量血凝抑制试验检测鸡IBV抗体水平的研究[J].山东农业科学，1999（1）：44-45.

[4] 吕  冬.鸡禽流感防治[J].中国畜禽种业，2017（4）：157-158.