王秀莉 孟安华

（1 东北师范大学生命科学学院 吉林长春 130024 2 东北师范大学附属中学 吉林长春 130021）

“用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体”是高中生物学课程必修1 里的一个重要实验［1］。但是中学开设这个实验较少，成功率很低，而且笔者在做预实验时发现按照教材给出的实验步骤在实验操作过程中存在一些问题：1）溶解的建那绿B 溶液在显微镜下原本就有颗粒；2）找到口腔上皮细胞比较困难；3）用洋葱表皮作为实验材料，比较容易观察到细胞，但健那绿B 有颗粒，不能确定观察现象的正确性；4）洋葱表皮细胞和口腔上皮细胞哪个更适合作为实验材料还不明确。针对以上问题笔者设计了一系列实验，探索出最适合线粒体观察的方案。

1 实验仪器、材料与试剂

1.1 实验仪器和材料 倒置光学显微镜（奥林巴斯，IX81），载玻片，盖玻片，移液器（200 μL），吸头（200 μL），滤纸，量筒，烧杯，漏斗，牙签。人口腔上皮细胞，洋葱表皮细胞。

1.2 实验试剂 蒸馏水；生理盐水：取0.9 gNaCl溶于100 mL 蒸馏水中；健那绿B：取0.3 g 健那绿B 粉末溶于30 mL 生理盐水中，35℃水浴中溶解，并用滤纸过滤。

2 实验方法与步骤

1）用镊子夹住洋葱的表皮并撕下，将其平铺在载玻片上，在表皮上滴加适量健那绿B 染液，3 min 或10 min 后盖上盖玻片，用滤纸包好压一压，然后将临时装片放置于显微镜下观察。

2）在载玻片上滴一滴健那绿B 染液，用灭菌牙签较钝的一端在口腔壁上刮几下，然后在染液中涂一涂，3 min 或10 min 后盖上盖玻片，用滤纸包好压一压，然后将临时装片放置在显微镜下观察。

3 实验结果与分析

3.1 健那绿B 染液的过滤 由于在实验中发现配置好的染液在标记线粒体时会在细胞外出现不明颗粒，笔者将染液进行了过滤，并将过滤和未过滤的染液在显微镜下进行观察和对比，观察结果如图1所示，未过滤的染液有很多颗粒，而过滤后的染液则没有颗粒出现，所以接下来的实验均用过滤后的健那绿B 染液。

图1 健那绿B 染液的观察（20×）

3.2 洋葱表皮细胞的线粒体观察 实验中采用了洋葱表皮细胞为实验材料，健那绿B 染色时间分别为3 min 和10 min，实验结果如图2所示，染色3 min 后在显微镜下观察几乎看不到线粒体被标记的小颗粒，而染色10 min 后的细胞中可观察到被染色的呈圆球状的线粒体颗粒，说明健那绿B 的染色时间为10 min 是适宜的。吴艳［2］提出由于植物细胞有中胶层和细胞壁的存在，所以植物细胞内的线粒体染色时间需稍长些。

图2 洋葱表皮细胞线粒体的观察（20×）

3.2 口腔上皮细胞的线粒体观察 采用口腔上皮细胞为实验材料，健那绿B 染色时间也分别为3 min 和10 min，实验结果如图3所示。染色3 min后在显微镜下观察到被标记的线粒体小颗粒不太明显，而染色10 min 后的细胞中可清晰地观察到被染色的呈现球状或棒状的线粒体颗粒，从实验结果可知，对于口腔上皮细胞内的线粒体的观察，染色时间稍长些效果更明显。

图3 口腔上皮细胞线粒体的观察（60×）

4 结论与建议

4.1 结论 健那绿B 染液配制后需用滤纸过滤去除溶解不彻底的健那绿B 小颗粒，洋葱表皮细胞和口腔上皮细胞均可作为实验材料，但口腔上皮细胞优于洋葱表皮细胞，这2 种细胞的染色时间均为10 min 时效果最好。

4.2 建议 为了避免口腔上皮细胞太少而不易观察到，刮取口腔上皮细胞时可用牙签多刮几次，或者用2～3 根牙签依次刮取尽可能多的细胞，并且牙签要在染液中搅拌一下，使细胞尽量分散开，在观察时要耐心地寻找分散比较好且铺展开的细胞观察。

由于洋葱表皮细胞比较大，观察时用20 倍或40 倍的物镜比较合适，而口腔上皮细胞相对较小，可用高倍物镜（60 倍或100 倍）进行观察，这样容易观察到细胞内较小的线粒体。