张 平 魏京广

（1 中山大学生命科学学院 广东广州 510275 2 华南农业大学海洋学院 广东广州 510642）

草履虫是生物学研究中一种重要的实验材料，因其结构简单、单细胞、自由生活、繁殖周期短，常被选作细胞生物学、分子遗传学、生物信息学等的科研材料［1］；草履虫还是生物学专业本科生动物学实验重要的实验材料；又因其营养丰富、易成活、易取材等优势，也成为一些观赏鱼种苗饲育的良好饵料［2］。

教学上传统的草履虫多来源于野外采集，但存在许多问题，例如样品不纯、易受天气和环境影响等。草履虫培养方法多样、简便，但培养获得的虫液常混有四膜虫，且四膜虫往往比草履虫的生命力更强、繁殖速度更快。笔者在多年的教学中发现，即便使用灭菌的培养液进行培养，几天之后也难免有四膜虫侵入，再加上草履虫个体较小且运动快，所以为了得到纯化的草履虫，常需要花费较多的时间和精力。实验室通常采用毛细管虹吸的方法，得到单个草履虫后，先将其置于凹玻片或小培养皿培养，再扩大培养［3］，这样的纯化方法费时、费力。本教研室从调节培养温度入手，力求找到一种草履虫纯化的简便方法，供实验教学参考。

1 材料与方法

1.1 培养液的制备 本实验制备了3 种培养液，即酵母培养液、稻草培养液和小麦粉培养液。每种培养液250 mL，制备3 瓶备用。

1）酵母培养液的制备：将药店购买的小包装酵母片1 片（约1 g）溶解于250 mL 经阳光照射2 h 以上的自来水中，搅拌均匀，备用。

2）稻草培养液的制备：称取2 g 稻草，剪成2 cm 长的小段，置于经阳光照射水中24 h，备用。

3）小麦粉培养液的制备：称取2 g 小麦粉，溶解于250 mL 自来水中，煮沸，搅拌均匀，制成悬浊液，备用。

1.2 接种与培养 将含有四膜虫的草履虫原液摇匀，取5 mL 接种于培养液中，每种培养液接种3 瓶，用锡箔纸封口后，置于25℃培养箱培养。5 d后，取样镜检。每瓶培养液随机抽取0.1 mL，重复3 次，加入卢戈氏碘液［4］，杀死并染色草履虫，置于显微镜下计数，取9 个重复样品的平均值。

1.3 温度筛选 将草履虫密度最高的3 瓶酵母培养液分别转移至冰箱中培养，设置冰箱的温度分别为0℃、4℃、8℃，在培养时间为1 d、2 d、3 d后，分别取样镜检。每瓶培养液随机取样3 次，每次取样0.1 mL，加入卢戈氏碘液，杀死并染色草履虫，于显微镜下计数，取3 个重复样品的平均值。

2 结果与分析

研究结果表明，与其他2 种培养液相比，酵母培养液中的草履虫密度高、活力强，更适合生产和实验的需要；但培养液中仍有大量的四膜虫（表1）。因此教学中大量使用草履虫时，宜采用酵母片培养法，该方法可在短时间内培养出高密度的草履虫。

表1 不同培养液中草履虫和四膜虫数量的比较（n=3；单位：只）

表2 不同温度下草履虫和四膜虫的镜检结果（n=3；单位：只）

比较不同温度下草履虫和四膜虫的培养情况，由表2可知，在4℃和8℃时草履虫密度较高，但8℃时仍有四膜虫存在。从培养时间来看，随着天数的增加，4℃和8℃时草履虫的数量变化不大，而四膜虫对温度的敏感性明显高于草履虫；在0℃和4℃冰箱中放置2 d 后已镜检不到四膜虫，但0℃时溶液易结冰，不易操作，而且此时草履虫的密度也大大降低。由上述结果可知，在纯化草履虫时，选择4℃冰箱放置2 d 可达到理想的效果。