赵俊英

(陇东学院 化学化工学院,甘肃 庆阳 745000)

食品添加剂可以改善食品的口味，有效的保证食品的新鲜度，起到很好的防腐作用，而大部分的食品添加剂均有一定的毒性，亚硝酸盐就是其中常见的一种。亚硝酸盐可以抑制某些微生物的生长，防止食品变质，尤其能够抑制肉毒芽孢杆菌的生长和繁殖，从而明显降低肉毒芽孢杆菌的中毒概率[1]。同时也是一种有毒物质。国家强制性标准规定，乳制品中亚硝酸盐含量不得高于0.2mg·kg-1，肉制品残留量不得超过0.03g·kg-1。联合国也规定每人每天亚硝酸盐的摄入量不得高于0.2mg·kg-1[2]。因此有必要寻找一种简单快速准确地测定其含量的方法。测定亚硝酸盐含量的方法目前主要有化学发光法、电化学法、色谱法、荧光光度法、紫外-可见分光光度法[3]。采用不同方法测定亚硝酸盐具有不同的优缺点，本文选择分光光度法进行测定，该方法操作简单快速，显色反应产物的稳定性好，可以广泛使用于亚硝酸盐的测定[4]。

1 实验部分

1.1 实验原理

亚硝酸盐分光光度法分析中经典的方法是Griess分光光度法，控制一定酸度下，亚硝酸盐同对氨基苯磺酸反应产生重氮化合物，然后同盐酸萘乙二胺发生偶合作用，生产紫红色的偶氮化合物[5]，其吸光度与亚硝酸盐含量成正比，根据吸光度大小即可得到亚硝酸盐含量。

1.2 仪器及试剂

721分光光度计、电子天平、亚硝酸钠(A.R)、20%盐酸(A.R)、对氨基苯磺酸(A.R)、盐酸萘乙二胺(A.R)、亚铁氰化钾(A.R)、硼砂(A.R)、乙酸锌(A.R)、各种饮料。

1.3 样品处理

用量筒量取10mL的待测样品置于烧杯中，加入5mL饱和硼砂溶液，12.5mL的亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液，可看到有沉淀生成，搅拌析出更多沉淀，再加入少量蒸馏水搅拌均匀后用玻璃棒引流至500mL的容量瓶中，蒸馏水洗涤烧杯3-4次，引流至容量瓶，定容混匀后将其转移至大烧杯中静置30min，待蛋白质完全沉淀，取上层清液抽滤，将30mL的初滤液倒入废液桶，其余滤液存储备用。

2 结果与讨论

2.1 测定波长的确定

室温下于100mL容量瓶中，加入2.0mL亚硝酸钠标准溶液，4.0mL对氨基苯磺酸溶液，待其重偶氮化4min后再加入2.0mL2g·L-1盐酸萘乙二胺溶液，混匀后定容，静置15min，待反应完全后，测量吸光度，数据见表1。由表1可知吸光度在一定范围内随波长增大先增大后减小，在538nm波长处吸光度最大。因此，本文选择538nm作为测量波长。

表1 波长的确定

2.2 盐酸萘乙二胺用量的确定

其他条件不变，改变盐酸萘乙二胺的量分别为1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL测定吸光度，数据见表2。以表2的数据作图，见图1。由图1可知，随着盐酸萘乙二胺用量的增加，吸光度在增大，并在3.0～6.0mL时逐渐趋于平衡，实验在2.0mL时吸光度最大，因此本文选择盐酸萘乙二胺加入量为2.0mL。

表2 盐酸萘乙二胺用量的确定

2.3 对氨基苯磺酸用量的确定

其他条件不变，分别加入1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL对氨基苯磺酸溶液，测定吸光度，数据见表3。以表3数据作图，见图2。由图2可知，吸光度随着对氨基苯磺酸用量的增加呈现先增大后降低的趋势，在4.0mL时吸光度最大，因此本文确定对氨基苯磺酸取的用量为4.0mL。

图2 对氨基苯磺酸用量的确定

表3 对氨基苯磺酸用量的确定

2.4 重偶氮化时间的确定

其他条件不变，改变重偶氮化时间为2，3，4，5，6，7min，测定吸光度，数据见表4。以表4数据作图，见图3。由图3可知，吸光度随着重偶氮化时间的增加先增加后减小。因此本文中选择重偶氮化时间为3min。

表4 重偶氮化时间的确定

图4 显色时间的确定

2.5 显色时间的确定

其他条件不变，分别测定显色时间为5，10，15，20，25，30min时的吸光度，数据见表5。以表5数据作图，见图4。由图4可知，吸光度随着时间的增加而增加，且在15min左右吸光度最大，因此本文显色时间确定为15min。

表5 显色时间的确定

综上，测定条件为538nm波长，控制重偶氮化时间为3min，盐酸萘乙二胺(2g·L-1)加入量为2.0mL，对氨基苯磺酸(4g·L-1)加入量为4.0mL,显色时间为15min。

2.6 标准曲线的绘制

分别吸取0.00，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00，2.50mL亚硝酸钠标准溶液(相当于0,1,2,3,5,7,10,12.5μg亚硝酸钠)，测定吸光度，数据见表6。以亚硝酸钠为横坐标，吸光度为纵坐标，作图，见图5。由图5可知，线性回归方程为y=0.0390x+0.0114，相关系数R2=0.9988。

表6 亚硝酸钠标准曲线

2.7 样品测定

取40.0mL的样液放置于100mL的容量瓶中。按本文确定条件依次加入其它试剂。稀释，定容，测定吸光度，数据见表7。

表7 不同种类软饮料中亚硝酸盐的含量

由表7可知，农夫山泉、雪碧、优酸乳、冰红茶和橙汁中亚硝酸盐含量分别为0.0092，0.0431，0.0427，0.0466，0.0498μg·g-1,低于国家标准0.2μg·g-1，符合国家标准，可放心食用。

3 结论

本文采用分光光度法对软饮料中亚硝酸盐的含量进行测定。实验表明，在波长538nm，显色时间为15min，显色剂中对氨基苯磺酸用量为4.0mL，盐酸萘乙二胺用量为2.0mL的实验条件下，由实验得到的亚硝酸盐含量和回收率结果如下：农夫山泉、雪碧、优酸乳、冰红茶和橙汁样品中亚硝酸盐的含量分别为0.0092，0.0431，0.0427，0.0466，0.0498μg·g-1。