42%丙硫菌唑·咪鲜胺悬乳剂的高效液相色谱分析方法

2020-11-03顾爱国孙长恩

现代农药 2020年5期

潘虹，顾爱国，孙长恩

（国家农药产品质量监督检验中心，南京 210007）

丙硫菌唑是拜耳公司研发的新型广谱三唑硫酮类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂[1]。咪鲜胺为咪唑类广谱杀菌剂，通过抑制甾醇的生物合成发挥作用[2]。丙硫菌唑·咪鲜胺悬乳剂作为一种新型广谱复配杀菌剂，对大田作物、水果、蔬菜的多种病虫害兼具治疗、铲除作用，尤其对小麦赤霉病的防治效果显著、持效期长，对小麦安全，应用前景广阔[3-4]。目前，关于丙硫菌唑、咪鲜胺单剂以及其他复配制剂的检测方法均有报道[5-7]，但有关丙硫菌唑·咪鲜胺复配制剂的高效液相色谱分析方法未见报道。本文建立的HPLC方法，以甲醇＋0.2%磷酸水溶液为流动相，采用Agilent Eclipse XDB-C18柱和可变波长紫外检测器，对有效成分丙硫菌唑和咪鲜胺同时分离、定量。该方法可供检测机构和企业分析室人员监督和把控丙硫菌唑·咪鲜胺复配制剂质量时作参考。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

Thermo高效液相色谱仪U3000，可变波长紫外检测器，色谱工作站；甲醇（色谱纯）；Millipore超纯水制备系统；丙硫菌唑（98.5%）对照物和咪鲜胺（99.0%）对照物，国家农药质量监督检验中心（沈阳）。42%丙硫菌唑·咪鲜胺悬乳剂，江西中迅农化有限公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18不锈钢柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长235 nm，流动相：甲醇＋0.2%磷酸水溶液（体积比76︰24）；流速：1.0 mL/min；进样体积5 μL；柱温30℃。保留时间：丙硫菌唑约为6.1 min，咪鲜胺约为4.3 min。液相色谱图见图1、图2。

图1 丙硫菌唑和咪鲜胺对照物液相色谱图

图2 42%丙硫菌唑·咪鲜胺悬乳剂被试物液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 对照物溶液的配制

在100 mL容量瓶中，称取0.03 g丙硫菌唑对照物和0.06 g咪鲜胺对照物（均精确至0.000 2 g），加入甲醇溶解，超声振荡并稀释，待温度恢复至室温后再定容，摇匀备用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取0.21 g被试物（精确至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，超声振荡并稀释，待温度恢复至室温后再定容，摇匀后经0.45 μm微孔滤膜过滤备用。

1.3.3 测定

当仪器基线稳定后，在优化的试验条件下，使对照物溶液连续进样，直至相邻两针的峰面积响应值相对变化小于1.5%，再按照对照物溶液、被试物溶液、被试物溶液、对照物溶液顺序依次进样测定。1.3.4 计算

将试验检测的两针被试物溶液及其前后两针对照物溶液中的丙硫菌唑（咪鲜胺）峰面积分别进行平均。被试物中丙硫菌唑（咪鲜胺）的质量分数按式（1）进行计算。

式中：A1为对照物溶液中丙硫菌唑（咪鲜胺）峰面积平均值，mAU·min；A2为被试物溶液中丙硫菌唑（咪鲜胺）峰面积平均值，mAU·min；m1为对照物溶液中丙硫菌唑（咪鲜胺）的质量，g；m2为被试物的质量，g；P为对照物中丙硫菌唑（咪鲜胺）的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 色谱分离条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

试验过程中，反复比对被试物丙硫菌唑和咪鲜胺与对照物在波长为190～400 nm范围内的紫外吸收光谱曲线，同时考虑溶剂峰、杂质峰干扰以及各组分的灵敏度、分离度和数据稳定性，最终确定最适检测波长为235 nm。

2.1.2 色谱柱及流动相的选择

为保证快速检测有效成分丙硫菌唑和咪鲜胺且峰形良好，选择150 mm×4.6 mm Agilent Eclipse XDB-C18不锈钢柱和250 mm×4.6 mm Agilent ZORBAX XDB-C18柱分别进行研究，采用不同比例的甲醇-水和乙腈-水作为流动相，均未得到良好的分离度。经分析比较，发现在酸性条件下被测组分相对稳定。添加不同浓度的冰乙酸和磷酸，最终选择150 mm×4.6 mm Agilent Eclipse XDB-C18不锈钢柱，并采用磷酸作为减尾剂，确定流动相为甲醇＋0.2%磷酸水溶液（体积比76︰24），流速为1.0mL/min。该测定保留时间适中，实现了丙硫菌唑和咪鲜胺的有效分离，且峰形良好。

2.2 线性相关性

配制不同质量浓度的对照物溶液，在优化的色谱分离条件下进行测定。横坐标为丙硫菌唑（咪鲜胺）的质量浓度，纵坐标为其峰面积值。二者线性回归方程和相关系数分别为：y丙硫菌唑=0.047 4x＋0.486 3，r=0.999 9；y咪鲜胺=0.063 4x-0.781 7，r=0.999 7。丙硫菌唑和咪鲜胺定量线性关系在100～800 mg/L质量浓度下良好，结果见图3、图4。

图3 丙硫菌唑线性曲线

图4 咪鲜胺线性曲线

2.3 方法的精密度

试验采用3批次的被试物42%丙硫菌唑·咪鲜胺悬乳剂，连续重复测定5次，研究了定量分析方法的精密度，结果见表1。丙硫菌唑和咪鲜胺的变异系数分别为0.36%和0.25%，满足被试物定量分析的要求。

2.4 方法的准确度

试验采用产品空白制剂中添加不同浓度丙硫菌唑和咪鲜胺对照物的方法，配制4份与被试物相近的模拟样品，开展添加回收率试验，研究方法的准确度。试验数据表明丙硫菌唑添加回收率为99.46%～100.17%，咪鲜胺添加回收率为99.21%～100.02%，两者平均回收率分别为99.75%和99.58%（表2），准确度较高，可以满足定量分析要求。