张府君，郝晶晶，药雅俊，甄会贤

(山西药科职业学院，山西 太原 030031)

金钱草的原植物为报春花科珍珠菜属植物过路黄(LysimachiachristinaeHance)，药用部位为全草[1]。又名过路黄、连线草、镜面草。全草含槲皮素、山柰素等黄酮类化合物以及无机盐多糖等成分。具有清热解毒，抑菌[2]，抗血栓[3]，散瘀消肿，抗炎[4]，利湿退黄之功效，可用于热淋，沙淋，尿涩作痛[5]等症，因此其具有良好的药用价值。但金钱草传统药材的使用需要进行正确煎煮，不仅过程繁琐，而且对煎煮器具、时间等都有要求，将药材饮片制备成配方颗粒后可以省略自行煎煮(提取)过程，是一种使用方便、安全有效的制剂。本实验通过对金钱草配方颗粒质量标准的研究，为金钱草配方颗粒的标准化制备和质量标准提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2998检测器，Empower色谱工作站，美国沃特世公司；AB135-S电子天平(十万分之一)，瑞士METTLER公司；HANGPING FA2104型(万分之一天平)，上海精科；YC-015喷雾干燥机；SB-800DTD型超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司；硅胶G板(批号：20170626)，青岛谱科分离材料有限公司；WD-9403C紫外仪，北京六一生物科技有限公司；RE-5205旋转蒸发仪，上海亚荣机器厂。

1.2 试剂与试药

金钱草饮片(批号：160901)，河北智嘉药业有限公司，经甄会贤副教授鉴定均为《中国药典》(2015版)收载品种；槲皮素对照品(含量测定用，批号：100081-201610)、山柰素对照品(含量测定用，批号：110861-201611)，中国食品药品检定研究院；甲醇(批号：Lot No 161104290004)，瑞典欧森巴克化学公司；乙腈(批号：Lot No.12960217)，天津赛孚瑞科技有限公司；娃哈哈纯净水。其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 金钱草配方颗粒的制备工艺

称取金钱草饮片适量，加水浸泡30 min，加热回流提取两次，每次1 h，第一次加水10倍，第二次加水8倍，滤出药液，合并滤液。将滤液置旋转蒸发仪中60 ℃减压浓缩至相对密度为1.05～1.10，喷雾干燥(参数：进风温度200 ℃；出风温度60 ℃；进样流速5.0 mL/min)，即得。

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备

取金钱草配方颗粒1 g，参照文献[6]制备供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备

分别称取槲皮素、山柰素对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL含槲皮素0.20 mg、山柰素0.10 mg的对照品溶液。

2.1.3 薄层色谱鉴别

照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液20 μL，槲皮素对照品5 μL，山柰素对照品20 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10:8:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105 ℃加热数分钟，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图1)。

图1 金钱草配方颗粒薄层色谱板

2.2 含量测定[7]

(1)色谱条件。色谱柱：BDS HYPERSIL C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(60:40)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：360 nm；进样量：10 μL。

(2)对照品溶液的制备。取槲皮素对照品和山柰素对照品适量，加 80%甲醇制成每 1 mL各含槲皮素200 μg、山柰素100 μg的混合溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备。取本品粉末0.5 g，精密称定，参照文献[1]制备供试品溶液。

(4)系统适用性试验。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪测定(对照品溶液连续进样6次)，考察系统适用性，结果理论塔板数为2600(金钱草药材质量标准中要求理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500)、重复性RSD=1.21%、分离度5.30、拖尾因子0.97、均符合要求(槲皮素、山柰素对照品、金钱草配方颗粒、金钱草饮片色谱图见图2～图5)。

图2 槲皮素对照品HPLC图(1 槲皮素)

图3 山柰素对照品HPLC图(2 山柰素)

图4 金钱草配方颗粒HPLC图

图5 金钱草饮片HPLC色谱图

(5)样品含量测定。分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各10 μL，进样测定，结果见表1。

表1 含量测定结果

2.3 指纹图谱的初步研究

2.3.1 流动相的考察

本试验比较了甲醇-0.1%磷酸水与乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱的方法。本试验对文献资料的两种流动相进行了考察。(1)甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(表2)，结果见图6，此色谱条件下金钱草膏出峰，但出峰效果极差，且分离效果不好。(2)乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(表3)，结果见图7，此色谱条件下供试品的色谱峰分离效果良好。故选择表3的梯度洗脱条件，该条件下，供试品出峰，各成分达到基线分离，峰型对称，分离效果较好。

表2 梯度洗脱条件

图6 金钱草配方颗粒指纹图谱(表2条件)

表3 梯度洗脱条件

图7 金钱草配方颗粒HPLC图(表3条件)

2.3.2 指纹图谱的建立

色谱条件。色谱柱：BDS HYPERSIL C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱(表3)，流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：360 nm；进样量：10 μL。

参照物溶液的制备。取槲皮素对照品和山柰素对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL各含槲皮素200 μg、山柰素100 μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备。同2.2.2含量测定项下“供试品溶液的制备”。

测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μL，进样测定，记录60 min的色谱图，即得。槲皮素、山柰素对照品，金钱草配方颗粒HPLC图(见图8～图10)。

图8 槲皮素参照物溶液HPLC图

图9 山柰素参照物溶液HPLC图

图10 金钱草配方颗粒HPLC指纹图谱

3 结 论

薄层色谱鉴别以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10:8:1)为展开剂，得到的薄层色谱图斑点显色清晰，分离良好，金钱草配方颗粒样品与槲皮素、山柰素对照品在相应位置显相同颜色荧光斑点。含量测定试验中，在参考文献[8]的基础上，对流动相中磷酸浓度以及甲醇、磷酸的不同比例进行了对比，结果显示当流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(60:40)时，系统适用性试验均符合药典规定，专属性强，分离度好。指纹图谱考察了甲醇-0.1%磷酸水和乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱的方法，通过比较确定了用乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱，初步确定了金钱草配方颗粒的HPLC指纹图谱测定条件。

本文的薄层色谱鉴别法、含量测定和指纹图谱建立的测定方法简便可行、准确、快速，样品处理及色谱条件简单，方法可靠。可用于金钱草配方颗粒的制备，为后期的制剂工艺和质量标准建立提供参考。