王姣?牟萍?李培峰

摘要：目的：将TAT修饰在DSPE-PEG2000-NHS长链的末端，反应合成靶向化合物DSPE-PEG2000-TAT，来提高药物靶向性。结果：采用此方法能够很好的制得功能性磷脂共轭化合物DSPE-PEG2000-TAT，并且操作简单，用时少，减少浪费节约成本。

关键词：穿膜肽;靶向配体

将药物制成靶向制剂，不但可以提高药物在肿瘤部位的浓度，使药物的功效增大;还可以降低其他部位的血药浓度，使药物的副作用降低，从而使药物的利用率大大增加[1]。细胞穿膜肽几乎能够穿过所有与之相接触的细胞胞膜，并且对细胞膜没有损伤作用[2]。最理想的方法是将靶头与PEG长链的末端相连，既可以起到长循环的作用，又可以有效的靶向作用到肿瘤细胞[3， 4]。

1 试验方法

按照摩尔比为1：1的比例称取功能化磷脂材料DSPE-PEG2000-NHS和TAT各2mg置于西林瓶中，加入2ml的无水DMF溶解，利用N-甲基吗啉调节酸碱度至pH值为9.0。室温搅拌36小时后转移至透析袋中（MWCO， 3500 Da），用去离子水透析36小时，除去反应溶剂，将样品冷冻干燥后放于-20℃冰箱中保存备用。

2 试验结果

2.1 MALDI-TOF-MS测定

本试验通过MALDI-TOF-MS测定产物的分子量，进而来确定产物。本试验使用2， 5-二羟基苯甲酸作为MALDI-TOF-MS法的基质。结果见图1。

如Figure 1 A和 Figure 1 B所示，DSPE-PEG2000-NHS的平均相对分子质量约为2895.35 Da，反应产物中DSPE-PEG2000-TAT的平均相對分子质量约为4290.54 Da。

2.2讨论

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）简称飞行时间质谱常用于混合物、生物大分子的测定[5]。通过上述方法测得了DSPE-PEG2000-NHS与DSPE-PEG2000-TAT的平均相对分子质量，由反应路线可知，合成产物的分子量计算公式如下：MDSPE-PEG-TAT=MDSPE-PEG-NHS + MTAT-MNHS。DSPE-PEG2000-TAT与DSPE-PEG2000-NHS之间的分子量差约为1395.19Da，再考虑到发生合成反应时有基团-NHS离去，与TAT的分子质量1555.16 Da相近而吻合，从而判定TAT与DSPE-PEG2000-NHS发生反应的摩尔比例是1：1。

3.结果

本试验成功合成了一种靶向性载体材料DSPE-PEG2000-TAT，可将其修饰于脂质体表面作为靶向分子，制备TAT修饰他莫昔芬与紫杉醇脂质体。通过MALDI-TOF-MS对合成产物DSPE-PEG2000-TAT进行测定，结果符合实际操作的要求，可以证明本试验采用此方法操作简单，用时少，减少浪费节约成本，能够很好的制得功能性磷脂共轭化合物DSPE-PEG2000-TAT。

参考文献：

[1]孙春萌.细胞穿膜肽的研究进展[J].中国药学杂志.2013，48（14）：1143-1147.

[2]范博.细胞穿膜肽在药物递送系统中的研究进展[J].药学学报.2016，51（2）：264?271.

[3] Shin M C，Zhang J，Min K A，et al.Combination of antibody targetingand PTD-mediated intracellular toxin delivery for colorectal cancer therapy[J].J Control Release，2014，194：197-210.

[4] Dietz G P，B?hr M.Delivery of bioactive molecules into the cell：the Trojan horse approach[J].Mol Cell Neurosci，2004，27（2）：85-131.

[5] Lee ES，Gao Z，Kim D，et al.Super pH-sensitive multifunctional polymeric micelle for tumor pH（e）specific TAT exposure and multidrug resistance[J].J Control Release，2008，129：228?236.

通讯作者：牟萍