李子晶

一、试验部分

（一）仪器与试剂

1.仪器。液相色谱-质谱联用仪（岛津LCMS-8030）;超纯水系统（WP-UP-YJ-20，沃特浦）;分析天平（Quintix 2102-1 cN，赛多利斯公司）;旋涡混合器（VORTEX 3，IKA公司）;恒温水浴振荡器（江苏安普SHA-C）;离心机（湖南湘仪H-2050R）。

2.试剂。甲醇（色谱纯，默克股份两合公司）;醋酸铵（分析纯，天津市致远化学试剂有限公司）;2-硝基苯甲醛（色谱纯，天津市百世化工有限公司）;二甲基亚砜（分析纯，天津市百世化工有限公司）;磷酸氢二钾（分析纯，天津市百世化工有限公司）;乙酸乙酯（分析纯，天津市泰兴试剂厂）;农药标准物质均来自农业农村部环境保护科研监测所（天津）;试验用水为经沃特浦超纯水系统处理后的超纯水。

（二）样品处理

1.样品水解与衍生化。准确称取样品2.0 g（精确至 0.01 g）到50 mL 离心管中，加入0.05 mL的100 ng/mL混合内标（AOZ-），旋涡混合50 s，再加入5 mL盐酸溶液（0.2 mol/L）和0.15 mL的2-硝基苯甲醛溶液（0.05 mol/L），涡旋振荡50 s后，置于恒温水浴振荡器中37 ℃避光震荡16 h。

2.样品的提取净化。取出离心管冷却至室温，加入3～5 mL磷酸氢二钾溶液（1.0 mol/L），调节pH值7.0～7.5，加入4 mL乙酸乙酯，涡旋振荡50 s，4000 r/min离心5 min，取上层清液转移至10 mL玻璃离心管中;再加入4 mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液于40 ℃下氮气吹干。加入1.0 mL甲醇溶液〔甲醇：水为5：95（V：V）〕涡旋振荡溶解残留物，过0.45um滤膜，待测。

3.溶液配制。分别取上述标准品（100.0 ug/mL 溶液），用甲醇稀释成 10 ng/mL 和100 ng/mL的标准储备液。

分别吸取上述标准品10ng/mL的标准储备液0.010 mL、0.025 mL、0.050 mL、0.10 mL和100 ng/mL的标准储备液0.025 mL、0.05 mL、0.10 mL于7个50 mL离心管中，不加样品，按照样品水解与衍生化和样品的提取净化步骤操作，按照色谱-质谱条件测定。

（三）色谱-质谱条件

1.色谱条件。色谱柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，5μm ）;柱温为40 ℃;进样量为20μL。流动相A：0.002 mol/L的醋酸铵溶液;流动相B：甲醇。色谱洗脱条件见表1。

2.质谱条件。离子源：电喷雾离子源ESI;扫描模式为正离子扫描;雾化气流量3L/min;干燥气流量15L/min;加热块温度250 ℃;DL温度250 ℃;CID气230 kPa;IG真空度1.9 pa;PG真空度7.5 pa;检测方式为多重反应监测。其他质谱参数见表2。

（四）添加回收试验

准确称取不含上述药物的草鱼样品2.0 g，分别以2.5 mg/kg和4.5 mg/kg两个水平进行添加回收试验，重复5次，按照上述试验方法测定，计算添加回收率和相对标准偏差。

二、结果与讨论

（一）线性回归方程

AOZ的基质标准曲线为y=0.217 700x-0.000 564 679（r = 0.996 987 6，=0.993 984 3）。

（二）方法的准确度、精密度

在空白草鱼中分别进行2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg两个水平的加标回收试验，每个水平重复测定5次，计算加标回收率和相对标准偏差。由表 3可知，在 2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 两个添加水平下，AOZ的平均回收率分别为99.648%和95.63%，相对标准偏差分别为8.43%和6.19%，方法显示出良好的准确度和精密度，可以满足试剂样品中农药残留的检测要求。

（三）实际样品分析

用本方法对市场销售的2份草鱼进行硝基呋喃类代谢物AOZ检测，均未检出。

三、结论

本研究通过对样品前处理方法、质谱条件和色谱条件的优化，建立了液相色谱-串联质譜法测定草鱼中AOZ残留量的分析方法，该方法前处理简单、快速、回收率高，方法的灵敏度、准确度和精密度等均满足农药残留分析的要求，适用于大量样品的快速检测。