武水珍

羊布鲁氏菌病又被称为布病，它是由布鲁斯杆菌感染引发的一种发热、流产、睾丸炎症、关节肿胀为主要症状的人畜共患传染性疾病，该种传染性疾病除了危害羊之外，还可以危害多种反刍动物，同时也会危害到人类的身体健康。为了更好的防范该种传染性疾病的传播流行，都需要做好妥善的疫苗免疫接种工作和疫情的检测筛查。在羊布鲁氏杆菌病诊断过程中常用的检测方法多种多样，主要包括了虎红平板凝集试验、试管凝集试验、酶联免疫吸附试验到等，不同的试验有着不同的操作标准，同时检测的精确性也存在一定差异。为了进一步研究不同学生检测方法对布鲁氏杆菌病的检测效果，从流行过羊布鲁氏杆菌病的2个规模化养殖场当中采集新鲜血液200份，进行血清学检测，现将具体内容介绍如下：

一、试验材料与方法

1、试验材料获取

本次研究从流行过羊布鲁氏杆菌病的两个规模化养殖场中采集新鲜血液200份，将其放置在4度的温箱当中进行保存。在检测过程中主要涉及到的试剂为虎红平板凝集抗原、虎红平板凝集试验阳性血清、羊布鲁氏杆菌病抗体检测试剂盒（EILSA）、布鲁氏杆菌试管凝集抗原、布鲁氏杆菌标准阳性血清、标准阴性血清、绵羊红细胞。上述材料均从正规途径采集。在试验过程中所涉及到的仪器主要包括了生化培养箱、酶标仪、全自动酶标洗板机、单多道移液器等。

2、试验方法

在试验操作过程中，首先对采集到的血液进行血清分离得到的血清进行编号处理。虎红平板凝集试验、补体结合试验、试管凝集试验的检测和判定按照布鲁氏杆菌诊断技术标准进行。羊布鲁氏杆菌抗体检测试验，按照抗体检测试剂盒中的相关说明进行严格的操作，并进行阳性阴性判断。

二、结果分析

1、不同血清检测方法200份血清样品当中的阳性率

在进行血清學检测过程中，根据布鲁斯杆菌病防治技术规范的相关规定要求，对于普通平板检测为阳性，但试管凝集检测为阴性的血清，应该在试验结束30天之后，再次采集该头患病羊的新鲜血液进行一次检测，如果虎红平板凝集试验的检测结果再次为阳性，则可以判断该血清为阳性，否则判断为阴性。在检测之前将200份的血清进行统一的编号处理，然后选择使用上述三种血清检测方法，分别对血清进行检测，阳性率和阳性数如表1所示。结合表1数据可以看出，虎红平板凝集试验的阳性数量最多，阳性率高达27.5%，其次是血清凝集试验，最低的是EILSA试验，阳性率分别为24.00%、21.50%。详细情况如表1所示。

表1 不同血清检测方法200份血清样品当中的阳性率

2、EILSA试验与虎红平板凝集试验、血清凝集试验对比

将养殖场的虎红平板凝集试验血清凝集试验分别与EILSA试验结果进行比较分析，进一步分析不同检测方法的假阳与特异性和敏感性。以EILSA试验为检测标准，虎红平板试验的特异性最低，血清凝集试验的特异性达到了90%以上。由此可以看出，以EILSA试验为检测标准，不管是虎红平板凝集试验还是血清凝集试验，都存在一定程度的假阳和假阴现象，其中虎红平板凝集试验的特异性最低假阳率最高。在今后的布鲁氏杆菌病血清检测过程中，有条件的养殖场推荐使用EILSA试验，同时还可以将虎红平板凝集试验和血清凝集试验联合使用，这样能够进一步提高诊断的精确性。

三、讨论

我国羊布鲁氏杆菌病在诊断过程中主要依据国家相关标准，首先使用虎红平板凝集试验或者全乳沉淀试验，对血液或者乳汁进行初次的筛选，筛选出阳性病例之后，然后再使用血清凝结试验进行复检。虎红平板凝集试验具有敏感性，相对较高，操作简便，耗时短，成本低的特点，但是在实际检测工作开展过程中，很容易受到血清严重溶血交叉反应或者抗原反应超过4分钟纤维素的凝集块影响而出现假阳现象。本次检测结果可以发现，虎红平板凝集试验的阳性检出率均要高于血清凝集试验和EILSA试验。因此在使用虎红平板凝集试验筛选出阳性血清之后还需要应用其他的方法对阳性血型进行再一次的验证与确诊。试管凝集试验检测免疫球蛋白敏感性相对较高，它可以作为羊布鲁氏杆菌病早期发病的诊断依据。另外该种诊断方法也可以用于人畜布鲁氏杆菌病免疫接种后，机体最早血清学抗体的检测，该种方法的优点是判定相对较为容易，具有很高的诊断价值。但是由于血凝试验在操作过程中相对比较复杂，整个试验过程相对较长，在进行结果判定过程中很容易受到相关人员的主观因素影响而出现较大的误差。如果单独应用该种检测方法对羊布鲁氏杆菌病进行诊断，很容易造成误诊或者漏诊。因此该种诊断方法并不是对所有感染动物抗体水平都具有很明显的诊断意义。本次研究结果表明，使用血清凝结试验检测阳布鲁氏杆菌病人抗体，阳性抗体的检出率要低于虎红平板凝结试验，并且在检测过程中存在可疑的现象，需要经过30天之后再去采集血液进行再次检测，可疑山羊只有全部为阳性，才能够判定为布鲁氏杆菌病感染。由于血清凝集试验的检测时间相对较长，需要配合其他检测手段，才能够提高检测的工作效率和检测的灵敏性。EILSA试验，是一种特异性强的检测手段，能够在大多数哺乳动物布鲁氏杆菌病检测当中得到很好的推广应用。应用该种检测手段出现假阳或者假阴的概率相对较低，一次性能够完成大量样本的检测。该种检测方法不仅应用于血清检测，还在乳汁检测方面有着较高的应用价值。通过应用该种检测方法能够很好的确诊虎红平板凝集试验和血清凝集试验检测过程中存在的假阳或者假阴的病例，并且操作较为简单，灵敏度较高，特异性较强，在今后羊布鲁氏杆菌病诊断过程中值得进一步推广应用。

（作者单位：810099青海省海南州动物疫病预防控制中心）