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高效液相色谱法同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸

2020-09-06刘晓霞

科学导报·学术 2020年81期
关键词:苯甲酸高效液相色谱

【摘  要】建立一种高效液相色谱同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法,实验选择条件是赛默飞ACES C18 Plus反相色谱柱(250*4.6 *5um),柱温30℃,甲醇与0.02mol/L乙酸铵水溶液比例为5:95,流速为1.00mL/min,PDA检测器,在波长为230nm下检测,该方法样品前处理简单,回收率、精密度和准确度良好,在常规检测中非常实用。

【关键词】高效液相色谱、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠

脱氢乙酸

食品添加剂是添加到食品中以保持风味或增强口感,改善外观或其他品质的物质。食品添加剂用途可以分为防腐剂、甜味剂、着色剂,增稠剂等。食品安全国家标准《食品添加剂使用标准GB 2760-2014》规定了不同食品中可以使用的食品添加剂的种类和限量,按照标准要求,使用添加剂对食品工业发展、食品安全、延长食品保质期有重要的作用,但是违规使用或超量使用添加剂就会给人体带来危害。目前测定食品添加剂的方法主要有气相色谱法,液相色谱法,气相色谱质谱连用法,液相色谱质谱连用法等。本文涉及的五种食品添加剂主要是运用高效液相色谱法,根据食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定(GB 5009.28-2016)、食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定(GB 5009.121-2016)、饮料中乙酰磺胺酸钾的测定(GB/T 5009.140-2003),对于同一食品样品,需要多个标准,进行多次检验,效率较低,给基层工作者带来很大的工作难度。需建立一种简单、通用的方法,能同时测定多种食品添加剂。对比国标方法本法案具有,前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、灵敏度和准确度高等优点。

1材料与方法:

1.1仪器设备

1、高效液相色谱仪(配二极管阵列检测器,Thermo scientific ultiMate 3000)2、KQ3200DE型数控超声波清洗器3、METTLER TOLEDO酸度计4、ELITIST 21K-R 高速冷冻离心机5、天津天马衡基万分之一的天平。

1.2材料与试剂

1、安赛蜜:浓度1.00mg/mL(中国计量科学研究院;2、苯甲酸:浓度1.00mg/mL(中国计量科学研究院;3、山梨酸:浓度1.00mg/mL(中国计量科学研究院4、糖精钠;浓度1.00mg/mL(中国计量科学研究院5、脱氢乙酸(Dehydroacetic Acid,25G,CAS:520-45-6)(纯度98%)6、甲醇:(色谱纯,美国Fisher公司7、氨水(优级纯)8、无水乙醇(分析纯)9、正己烷(分析纯)9、超纯水

(1)脫氢乙酸(98.0%)储备液。用10mL 20g/L的氢氧化钠溶液溶解,加水配置成1.00mg/mL的储备液。

(2)0.02mol/L乙酸铵溶液。称取1.54g优级纯的乙酸铵用水溶解后定容至1000mL,经0.22um滤膜过滤超声后备用。

(3)220g/L乙酸锌溶液,称取220g分析纯乙酸锌溶于少量水中,加入30mL冰乙酸,用水定容至1000mL.

(4)106g/L亚铁氰化钾溶液。称取106g亚铁氰化钾用水定容至1000mL.

(5)20g/L氢氧化钠溶液。称取20g分析纯氢氧化钠用水溶解后定容至1000mL.

(6)氨水溶液(1+99).取氨水1mL,加99mL水中,混匀。

实验方案:

1.3试验方法

1.3.1色谱柱:(ACES C18Plus 250*4.6 SN:4F30809),流动相:甲醇:乙酸铵=5:95,总流速:1.00mL/min,柱压:69MPa,柱温:30℃,检测波长:230nm,进样体积:10uL,采集时间:25min.

1.3.2标准溶液的配制:

分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸标准储备液(1000mg/L)各10mL于100mL容量瓶中,用水定容成混合标准中间溶液(100mg/L).分别准确吸取混合标准储备液0.0、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00于10mL容量瓶中,用水定容至刻度,配制成质量浓度为:0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L,经0.22um水系滤头过滤后上机检测,绘制标准曲线。

样品前处理:

(1)液体样品:碳酸饮料、配制酒、酱油、醋等液体样品,称取混匀样品2-5g(精确至0.0001g),放入50mL的比色管中,用水定容至刻度,混匀,过0.22um微孔滤膜过滤,滤液待机分析,含蛋白较多的液体样品各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白。

(2)固体样品:含油脂较多的试样,精确称取2-5g试样于100mL比色管中,加10mL正己烷,于60水浴加热5min,轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)50mL,无水乙醇2mL,弃去有机相,水相转移至100mL比色管中。一般固体试样精确称取2-5g样品于100mL的比色管中,加入50mL的水,摇匀浸泡30min.分别在上述样液中各加5mL的亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白,最后定容、静置,取上层液经0.22um水系滤头过滤后上机。采用外标准与标准曲线比较定量。待测样液待测组分浓度应在标准曲线范围内,超出曲线应将样液稀释后再进行分析。

结果计算:样中待测组分含量的计算公式如(1)所示。

式(1)中,X为试样中待测组分含量,g/kg。

c为由标准曲线得出的试样中待测物的质量浓度,mg/L.

v为试样定容体积,mL.

1000为mg/kg转换为g/kg的换算因子。

2 实验结果与分析:

2.1波长选择

实验中对安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种添加剂进行波长扫描,发现最大吸收波长分别在:225.4nm、219.2nm、228.7nm、255.0nm、310.8nm处(其中脱氢乙酸的最大吸收波长310.8nm处有干扰,而次级波长为230.2nm),综合考虑各组分的灵敏度,本实验选择的波长为230nm.

2.2流动相选择

如果选乙腈和0.02mol/L乙酸铵水溶液为流动相时,由于乙腈洗脱能力强,还没分离就被冲了下来。无法达到分离效果。如果提高甲醇比例,会使糖精钠和脱氢乙酸叠加在一起。实验中采用甲醇与0.02mol/L乙酸铵水溶液做流动相,流速为1.0mL/min.甲醇与乙酸氨水溶液流动相比例为5:95时,分离效果最好。

2.3 线性回归方程、检出限和回收率

将配制好的标准曲线上机分析,得到每种物质线性方程,在线性范围内较好,相关系数R均大于0.998,以3倍噪声为检出限,以饮料为代表样品,添加低水平的5种混标,每个水平重复测定6次,计算平均回收率和精密度,结果见表1。5种添加剂的加标回收率为96.4%-98.5%,相对标准偏差为1.02%-1.89%。

3 结论:

本文建立一种同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸5种食品添加剂的液相色譜法,解决了国家标准不能同时检测的弊端,适用范围基本上覆盖了所有食品类别,通过二极管检测器对定性结果做了进一步论证,提高了检测结果的准确性,该方法耗时短,操作简单,适用于样品的快速检验,可作为国家标准的补充进行推广。

参考文献:

[1]中华人民共和国卫生部GB 2760-2014  食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S]。北京:中国标准出版社,2014。

[2]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.28-2016食品中苯甲酸,山梨酸和糖精钠的测定[S]。北京:中国标准出版社,2016。

[3]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.121-2016食品中脱氢乙酸的测定[S]。北京中国标准出版社,2016。

[4]中华人民共和国卫生部GB/T 5009.1402003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定[S]。北京中国标准出版社,2003。

[5]方小丽,超高液相色谱法同时测定饮料中食品添加剂[J],食品工业,2018,39(12):314-318

[6]苏建国,彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J]。中国食品添加剂,2011,22(2):243-245.

[7]张春玲.高效液相色谱法同时测定食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠[J],中国卫生检验杂志,2007,17(5):936-937.

作者简介:

刘晓霞(1981年-),女,山西临汾人,临汾市综合检验检测中心工程师,大学本科。

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