王佳敏，王延东，梁 锐，王颖莉*

（1.山西中医药大学中药与食品工程学院，山西晋中 030619；2.华南农业大学农学院，广东广州 510642）

在畜牧业中，抗生素作为饲料添加剂起到促进动物生长、提高机体免疫、改善饲料利用率、减少发病率与死亡率、改善繁殖性能等作用[1]，但抗生素过度使用引起的食品安全问题已成为人们关注的热点，抗生素残留于肉、蛋和奶等产品中会破坏畜禽胃肠道微生态平衡，干扰免疫系统，降低畜禽对疾病的抵抗力[2-3]。因此，2019年7月10日中华人民共和国农业农村部发布194号文件公告，将于2020年7月1日停止生产、进口、经营、使用部分药物饲料添加剂。因此，抗生素替代产品成为当前研究热点。

中药作为一种天然替抗产品，具有低毒、功能性强、经济实用、不良反应小、无残留和无耐药性等优点，可提高饲料转化率，增强机体抗病力、抗氧化应激能力、抗菌抗病毒功能，增强繁殖性能，提高产品品质[4]。研究表明，黄芪、甘草、黄芩、白术、党参、绞股蓝等中药材可作为饲料添加剂，起到促进畜禽生长性能和增强免疫功能的作用[5-6]。黄芪多糖具有促进淋巴细胞的增殖与分化、增加胞浆细胞分泌、调节淋巴细胞亚群平衡等作用[7]。

黄芪复方主要由黄芪、甘草等组成，制备成颗粒便于与日粮复配。本试验旨在研究日粮中添加黄芪复方颗粒对肉鸡生长性能、免疫及抗氧化功能的影响，为其在畜禽生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 黄芪复方颗粒为本试验自制，由黄芪、甘草等水回流提取浓缩成膏状制粒。鸡免疫球蛋白A（IgA）、G（IgG）、M（IgM）ELISA Kit剂盒购于Andy gene（批号均为AD201909）。超氧化物岐化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒（批号20191016）购于南京建成生物工程研究所。试验仪器包括DNM-9602酶标仪（北京普朗新技术有限公司）、LEICA IP 1020全自动组织脱水机、LECIA RM2265全自动轮转式切片机、LECIA DM2500 LED研究级荧光显微图像系统（德国莱卡）。

1.2 试验设计及试验日粮 选用1日龄公母混合100羽罗斯308肉鸡适应性饲喂7 d后，称重并随机分成4组，每组5个重复，每个重复5羽。对照组饲喂基础日粮，试验组分别于饲料中添加0.87%、1.74%、3.48% 黄芪复方颗粒，试验期21 d。参照美国罗斯308肉鸡营养需要，1～21日龄采用肉小鸡颗粒料，22～42日龄（试验期）采用肉中鸡配合料，饲料购于文水县大象禽业象丰饲料有限公司。试验期的基础日粮组成及营养成分见表 1。

表1 基础日粮组成及营养成分

1.3 饲养管理 试验采用三层笼养，红外灯保温，各组分别隔离饲养，自由采食和饮水，于第20天新支二联多价疫苗接种，21日龄开始在日粮中添加黄芪复方颗粒，试验持续21 d[8]。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 肉鸡生长性能 于肉鸡42日龄时以重复为单位称重称取全部试验鸡的体重，计算饲料消耗量、平均采食量、增重、平均日增重、耗料增重比。

1.4.2 肉鸡免疫器官指数 于肉鸡42日龄时每组随机选取10只肉鸡，翅下静脉采血，取脾脏、双侧胸腺和法氏囊，剥离脂肪和结缔组织，称重并计算免疫器官指数：

脏器指数（g/kg）=脏器重/活体重

1.4.3 血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的测定 翅静脉采血，静置30 min，2 000 r/min离心15 min，制备血清。严格按照 ELISA检测试剂盒说明书进行测试，建立标准曲线，计算IgA、IgG、IgM含量[9]。

1.4.4 血清抗氧化酶活性的测定 SOD测定采用WST-1法，于450 nm处测定吸光度。MDA测定采用TBA法，于532 nm下测定吸光度。

1.4.5 HE染色分析 每组抽取10只体重相近的肉鸡，采集法氏囊、脾脏、胸腺的组织样品，经生理盐水洗净后置于甲醛固定液中，脱水、石蜡包埋、切片、HE染色、光镜下观察、拍照。

1.5 统计分析 用SPSS 13.0统计软件对各项数据进行方差分析，结果表示为平均值± 标准误（或标准差）。P＜0.01表示差异极显著，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。

2 结果

2.1 黄芪复方颗粒对肉鸡生长性能的影响 肉鸡饲喂全程无发病和死亡情况。由表2可见，各试验组饲料消耗量和平均采食量均高于对照组（P＞0.05）；各试验组增重和平均日增重均有提高，且1.74%、3.48%黄芪复方颗粒组增重较对照组分别提高了10.98%、13.64%（P＜0.01），耗料增重比分别降低9.60%、11.30%（P＜0.01）。结果表明饲喂黄芪复方颗粒对肉鸡的生长性能有一定的促进作用。

表2 黄芪复方颗粒对肉鸡生长性能的影响

2.2 黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官指数的影响 如表3所示，与对照组相比，各试验组的脾脏指数和胸腺指数均有提高（P＞0.05）。各试验组法氏囊指数均有提高，其中0.87%、3.48%组分别提高了52.68%、48.21%（P＜0.05）。

2.3 黄芪复方颗粒对肉鸡血清免疫功能的影响 由表4可见，各试验组IgA、IgG、IgM含量均高于对照组。与对照组相比，0.87% 组和1.74% 组IgA含量分别显著和极显著提高，0.87%、1.74%组IgG含量极显著提高，0.87%、1.74% 组IgM含量极显著提高，3.48% 组IgM含量显著提高。结果表明黄芪复方颗粒可以显著增加鸡血清中免疫球蛋白数量，增强免疫功能，且1.74%组增加明显，IgA、IgG、IgM分别提高了48.06%、34.26%、76.21%。

表3 黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官指数的影响

表4 黄芪复方颗粒对肉鸡血清 IgA、IgG、IgM的影响 μg/mL

2.4 黄芪复方颗粒对血清中抗氧化酶活性的影响 由表5可见，与对照组相比，各试验组SOD含量均高于对照组，且3.48%组剂量组SOD含量显著提高了13.18%；试验组的MDA含量均低于对照组（P＞0.05）。

表5 黄芪复方颗粒对肉鸡血清SOD和MDA的影响

2.5 黄芪复方颗粒对免疫器官组织结构的影响 由图1可知，法氏囊、脾脏、胸腺免疫器官结构完整，排列整齐，未有异常改变。囊内皮质与髓质易分辨，皱襞发达且淋巴细胞增多。与对照组相比，试验组淋巴小结体积较大、数量较多、大小均匀、排列紧密。3.48%组被膜较其他试验组完整、小梁较其余组结构整齐[10]。由图2可知，各组脾脏淋巴细胞密集，与对照组相比，试验组红髓和白髓界限明显，白髓所占比例增大[11]。由图3可知，与对照组相比，1.74%、3.48%组剂量组髓质面积增加，胸腺小体呈增多趋势；0.87%组皮质所占比例较大，颜色较深，T淋巴细胞含量较多。

3 讨论

3.1 黄芪复方颗粒对肉鸡生长性能的影响 生长性能与动物增重与采食量相关，耗料增重比是评价养殖动物经济效益的指标，增重减耗可有效改善微环境生态平衡，提高营养物质消化利用率，改善消化功能，进而提高生长性能[12]。本试验表明，1.74%、3.48%黄芪复方颗粒组的增重较对照组分别极显著高出10.98%、13.64%，耗料增重比分别极显著降低9.60%、11.30%，因此黄芪复方颗粒能改善肉鸡生长性能，提高增重，降低耗料增重比。黄芪、甘草具有补中益气、补气益脾的功效，可增强机体免疫功能，提高抗病能力，一定程度与改善畜禽的生长性能相关。

3.2 黄芪复方颗粒对肉鸡免疫功能的影响 免疫功能主要受免疫系统调节，免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫因子等组成。免疫器官指数是衡量机体免疫功能的主要指标，免疫器官指数越高则表示免疫系统发育越成熟，机体对致病原的抵抗力越强[13]。本试验结果显示，中枢免疫器官胸腺、法氏囊（禽类）、外周免疫器官脾脏的脏器指数均增大，HE染色显示器官结构完整清晰。在免疫细胞方面，胸腺、法氏囊和脾脏是免疫细胞发生、分化和成熟的场所，含有淋巴细胞、浆细胞等免疫细胞[14-15]。在免疫分子方面，免疫球蛋白是一类具有抗体活性的球蛋白，其含量变化与动物机体健康状况和免疫力密切相关，含量越高表明机体的体液免疫功能越强[16]。IgG和IgA具有抑菌、抗病毒等免疫活性，IgM具有激活补体等功能，IgG、IgA、IgM均是主要的体液免疫检测指标[17]。本试验中，1.74%黄芪复方颗粒组可极显著增加免疫球蛋白数量，IgA、IgG、IgM分别提高48.06%、34.26%、76.21%进而增强免疫功能。

此外，免疫功能的增强可能与黄芪和甘草2味药相关。现代研究表明，黄芪多糖、黄芪皂苷等可提高巨噬细胞活性，活化中性粒细胞，促进T淋巴细胞的增殖和转化，增强B淋巴细胞免疫功能，促进抗体生成[7]；甘草中甘草葡聚糖可刺激脾脏淋巴细胞的增殖，甘草酸可增强巨噬细胞吞噬功能和细胞免疫功能[18]，因此黄芪复方颗粒从中医药理论讲可作为饲料添加剂增加动物畜禽的免疫功能。

3.3 黄芪复方颗粒对肉鸡抗氧化功能的影响 正常机体会产生适量的自由基，但过量的自由基会破坏机体正常秩序及生理代谢等，进而引发相关疾病。SOD是抗氧化中清除自由基的主要生物酶，可通过将活性氧分子转化为无毒化合物，使机体免受氧化应激和组织损伤；MDA为脂质氧化反应的稳定终产物，其含量越高反映了自由基对机体脂肪的损伤程度越大，表明机体细胞膜和肝组织被氧化受损[19]。因此 SOD活力高低可以间接反映机体清除自由基的能力，MDA含量是反映脂质过氧化程度的直接量化指标[20]。本试验结果表明，黄芪复方颗粒组SOD含量均增加，MDA含量均降低，3.48%组SOD显著提高13.18%，可增强机体抗氧化能力，间接起到改善肉品质的作用。

4 结论

本试验结果表明，1.74%、3.48%组较对照组分别极显著增重10.98%、13.64%，1.74% 组IgA、IgG、IgM分别极显著提高48.06%、34.26%、76.21%，3.48%组SOD显著提高13.18%。可见，黄芪复方颗粒可促进肉鸡生长、促进免疫器官的生长发育、增强抗氧化作用，为中草药作为免疫增强剂添加于饲料中提供了理论依据。