利胆排石片与金钱草片中金钱草替以广金钱草或聚花过路黄后对大鼠尿液、胆汁排出量的影响研究

2020-08-14李飞艳赵月珍刘群群

云南中医中药杂志 2020年4期

李飞艳赵月珍刘群群

摘要：目的研究利膽排石片、金钱草片中金钱草替以广金钱草或聚花过路黄后对大鼠尿液、胆汁排出量的影响。方法以广金钱草、聚花过路黄替代利胆排石片、金钱草片中的金钱草，制备成相应的药物，给大鼠一次性灌胃给药，采用大鼠代谢笼法，分别记录给药后动物在1、2、3、4、5、6 h的尿液量及6 h内尿液总量;采用胆汁引流法，于动物一次性灌胃给药后，每30 min收集并记录1次胆汁排出量，连续收集3 h，采用t检验，比较各组间尿液与胆汁排出量的差异性。结果与空白组比较，各药物组在6 h内排出的尿液总量明显增加（P<0.01），但尿液明显增加的具体时间各异;与LDPS组比较，LDPS-G组、LDPS-JH组在6 h内尿液总量无明显变化，LDPS-G组尿液量第1 h明显减少（P<0.01），第5、6 h明显增加（P<0.05）;与JQC组比较，GJQC组、JHGLH组在6 h内尿液总量无明显变化，GJQC组在第1 h尿液排出量明显增加、第5 h尿液排出量明显减少（P<0.01）。与空白组比较，各药物组在用药30 min后至3 h内的各时间段胆汁排出量都有明显增加（P<0.05或P<0.01）;与LDPS组比较，LDPS-G组在给药后的第5、6个30 min胆汁排出量明显减少（P<0.05）;与JQC组比较，JHGLH组在给药后30 min内胆汁排出量明显增加（P<0.05）。结论利胆排石片、金钱草片及其组方中金钱草替以广金钱草与聚花过路黄后都呈现出明显的利尿、利胆作用;以金钱草为君药，以防治胆石症为主要疗效的复方中，以广金钱草代替金钱草会降低其疗效，但是以防治尿石症为主要疗效的，用广金钱草替代后可能通过促进尿液的排出增强其疗效;广金钱草利尿作用显效较快，但维持时间较短;聚花过路黄利尿、利胆作用与金钱草类似，可以进一步在临床开展小范围的对照研究，为后期开发提供临床资料。

关键词：金钱草;广金钱草;聚花过路黄;利胆排石片;金钱草片;尿液;胆汁;大鼠

【Abstract】Objective：To study the effects of Herba lysimachiae substituting Desmodium tyracifolium or Lysimachia congestiflora in Didan Paishi Tablets and Jinqiancao Tablets on the urine and bile excretion in rats. Methods：The corresponding drugs were prepared by Herba lysimachiae in Didan Paishi Tablets and Jinqiancao Tablets and given to rats by intragastric administration at one time. The rat metabolizable cage method was used to record the urine volume of the animals at 1，2，3，4，5，and 6 hours after administration and the total urine volume within 6 hours. The bile drainage method was used to collect and record the amount of the bile excretion once every 30 minutes for 3 continuous hours after the animals were administered. The differences in the urine and bile excretion between the groups were compared by t test. Results：Compared with that of the blank group，the total amount of the urine excretion in each drug group increased significantly within 6 hours（P<0.01），but the specific time of significant increase in urine was different. Compared with the LDPS group，there was no significant change in the total urine volume within 6 hours in the LDPS-G group and LDPS-JH group. The urine volume of the LDPS-G group decreased significantly at the first hour（P<0.01），and increased significantly at the 5th and 6th hours（P <0.05）. Compared with the JQC group，there was no significant change in the total amount of urine within 6 hours in the GJQC group and the JHGLH group，and the urine output increased significantly at the first hour and the urine output decreased significantly in the GJQC group at the 5th hour（P<0.01）. Compared with that in the blank group，the bile output of each drug group increased significantly in each period of time from 30 minutes to 3 hours（P<0.05 or P<0.01）. Compared with that in the LDPS group，the bile discharge significantly reduced in the LDPS-G group and the LDPS-JH group at the 5th and 6th 30min（P<0.05）. Compared with that in the JQC group，the bile discharge in the JHGLH group significantly increased within 30min after the administration（P<0.05）. Conclusion：Herba lysimachiae substituting Desmodium tyracifolium or Lysimachia congestiflora in Didan Paishi Tablets and Jinqiancao Tablets shows obvious diuretic and choleretic effects. In the prescription of Jinqqiancao as a monarch drug to prevent gallstones，the Desmodium tyracifolium substituted will reduce its effect，but for the prevention and treatment of urolithiasis，the curative effect of the Desmodium tyracifolium substituted may be enhanced by promoting the excretion of urine. The diuretic effect of Desmodium tyracifolium is faster，but the maintenance time is shorter. The diuretic and choleretic effects of Lysimachia congestiflora are similar to those of Herba lysimachiae，which can further be conducted in small-scale controlled studies in the clinic and provide clinical data for later development.

【Key words】Herba lysimachiae，Desmodium tyracifolium，Lysimachia congestiflora，Lidan Paishi tablets，Jinqiancaoo tablets，urine，bile，rats

利胆排石片与金钱草片收载于2015年版《中国药典》[1]，两者均以金钱草为君药。利胆排石片由金钱草、茵陈、黄芩等10味药组成，用于湿热蕴毒、腑气不通所致的胁痛、胆胀，症见胁肋胀痛、发热、尿黄、大便不通;胆囊炎、胆石症见上述证候者，临床广泛用于胆道结石的治疗[2～4];金钱草片以单味金钱草成方，用于湿热下注所致小便频数短涩，淋沥疼痛，尿色赤黄，腰腹疼痛，甚至尿挟砂石，临床常用于治疗尿路结石[5]。

金钱草为报春花科植物过路黄Lysimachia christinae Hance的干燥全草，具有利湿退黄、利尿通淋、解毒消肿的功效[1]，临床广泛用于湿热黄疸、肝胆结石和泌尿道结石等的治疗[6～10];广金钱草与金钱草因一字之差，以及地方用药习惯，在湖南等地常混作金钱草使用[11]，实则两者来源于不同科属，广金钱草来源于豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium（Osb.）Merr.的地上部分，具有利湿退黄、利尿通淋的功效[1]，主要用于治疗泌尿系统结石、减轻泌尿系统结石患者疼痛[12～13];聚花过路黄为报春花科植物聚花过路黄Lysimachia congestiflora Hemsl.的干燥全草，与金钱草为同科同属，因其形态相似，常被当作金钱草误采误收，加之经营、使用单位质量把关不够严谨，导致了现今临床上常见聚花过路黄误做金钱草使用的现象[11]。

基于金钱草在临床上广泛用于胆石症、尿石症的治疗，而促进胆汁、尿液排出分别是防止胆结石、肾结石形成及帮助结石排出的主要机制，以及金钱草、广金钱草、聚花过路黄三者在临床混用的现象[14～16]，本文研究防治结石的两个法定方药利胆排石片、金钱草片中金钱草被其他两混用品种替代后对大鼠尿液、胆汁排出量的影响。

1 材料

1.1 受试药物

1.1.1 中药材

1.1.1.1 利胆排石片组成中药金钱草，产地四川，批号1711012;木香，产地云南，批号1711008;大黄，产地甘肃，批号1712011;麸炒枳实，产地江西，批号1710008;姜厚朴，产地浙江，批号1711009，均由江西樟树天齐堂中药饮片有限公司提供。芒硝，产地陕西，批号2016070606，湖南三湘中药饮片公司提供;槟榔、茵陈、黄芩、郁金均购于湖南邵东廉桥药材市场，经本单位鉴定专家鉴定为正品。

1.1.1.2 金钱草片组成中药金钱草，批号同利胆排石片中金钱草。

1.1.1.3 广金钱草产地广西，批号1710006，江西樟树天齐堂中药饮片有限公司提供。

1.1.1.4 聚花过路黄购于湖南邵东廉桥中药材市场，经专家鉴定为报春花科聚花过路黄的全草[17]。

1.1.2 中药制剂

1.1.2.1 利胆排石片（简称“LDPS”）因动物给药途径为灌胃给药，用药时利胆排石片尚需粉碎、加水溶解成混悬液，配置成适当浓度，因此制备过程中省去了加辅料、制粒、压片的过程，其余均按照2015年《中国药典》[1]中利胆排石片制剂工艺操作，其中木香、大黄、芒硝粉碎成细粉，金钱草、茵陈等7味药加冷水浸泡1 h，加水量至液面超过药材3～5 cm，煎煮2次，水沸后计时，分别煎煮30 min、25 min，合并2次滤液，旋转蒸发仪减压浓缩至浓度为0.5 g/mL的药液备用。临用前将木香、大黄、芒硝3药细粉加入煎液中，加纯化水稀释成所需浓度。

1.1.2.2 广金钱草替代金钱草的利胆排石片（简称“LDPS-G”）除了金钱草用广金钱草替代外，其余操作同利胆排石片。

1.2.2.3 聚花过路黄替代金钱草的利胆排石片（以下简称“LDPS-JH”）除了金钱草用聚花过路黄替代外，其余操作同利胆排石片。

1.1.2.4 金钱草片（简称“JQC”）依照2015年版《中国药典》[1]，金钱草片制备工艺为金钱草加水煎煮3次，每次1 h，合并煎液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.4～1.5的稠膏，加辅料，制粒，干燥，压片。实际操作中滤液浓缩至浓度为0.5 g/mL的药液备用，省去了加辅料及以后的制粒、压片操作。

1.1.2.5 广金钱草替代金钱草的金钱草片（简称“GJQC”）将金钱草片中金钱草以广金钱草替代，其余操作同金钱草片，称之为“广金钱草片”。

1.1.2.6 聚花过路黄替代金钱草的金钱草片（简称“JHGLH”）将金钱草片中金钱草以聚花过路黄替代，其余操作同金钱草片，称之为“聚花过路黄片”。

1.2 实验动物 SD雄性大鼠70只，SPF级，体重180～200g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，质量合格证号43004700042552，许可证号SCXK（湘）2016-0002，饲养于湖南中医药大学实验动物中心，许可证号SYXK（湘）2013-0005，使用证明编号00086740。

1.3 试剂与器材氨基甲酸乙酯（乌拉坦），上海展云化工有限公司，批号160510。大鼠代谢笼，淮北正华生物仪器设备公司;摩尔超纯水机，动物型50，上海摩勒科学仪器公司提供;5号1次性静脉输液针，湖南康利来医疗器械公司提供。

2 方法

2.1 分组及给药动物按体重随机分为7组，即利胆排石片（LDPS）组、广金钱草替代金钱草的利胆排石片（LDPS-G）组、聚花过路黄替代金钱草的利膽排石片（LDPS-JH）组、金钱草片（JQC）组、广金钱草片（GJQC）组、聚花过路黄片（JHGLH）组、空白组，每组8只。

大鼠给药以人和动物按体表面积折算的临床等效剂量给药，大鼠剂量换算系数为0.018。利胆排石片临床用量1次6～10片，1日2次，1天剂量折合生药量为13.2 g～22 g，大鼠用药剂量即为（1.2～2.0）g/kg，本研究采用1.5 g/kg的剂量给药;金钱草片临床用量1次4～8片，1日3次，1天剂量折合生药量为24 g～48 g，大鼠剂量即为（2.2～4.3）g/kg，本研究采用3.0 g/kg的剂量给药。

2.2 对大鼠尿液排出量的影响采用大鼠代谢笼法[18]。大鼠适应性喂养1周，实验前禁食（正常饮水）18 h，每只大鼠按20 mL/kg灌服纯化水，收集2 h尿液，选用尿量达灌服量的40%以上水负荷者为合格动物。筛选出水负荷量合格的56只动物，随机分成7组，即空白组、LDPS组、LDPS-G组、LDPS-JH组、JQC组、GJQC组、JHGLH组，每组8只，模型筛选完30 min后，药物组按20 mL/kg体重分别灌胃相应剂量的药液，空白组以相同容量的纯化水灌胃，给药后立即放入代谢笼内（每笼1只）。连续收集6 h尿液，分别记录第1、2、3、4、5、6 h尿量（mL），分析各时间段组间尿液排出量的差异性。

2.3 对大鼠胆汁排出量的影响大鼠排尿量实验结束后，继续喂养1周，进行胆汁排出量实验，分组同2.2对大鼠尿液排出量的影响。手术前动物禁食不禁水18 h，腹腔注射浓度为25%的乌拉坦溶液麻醉大鼠，给药体积为0.5 mL/100g（体重），固定大鼠，于胸骨剑突下，腹部横切开口约3 cm，找到胃幽门处，翻转十二指肠，找到连接肝脏的一条静脉，与静脉并行的一条约1 mm粗细浅黄色管道，即为胆管，分离胆管旁的系膜及脂肪组织，在近十二指肠端用解剖针挑起胆管，用5号静脉输液针向肝端胆管插入，待胆汁流出顺畅后，用动脉夹固定针头，用生理盐水湿润的纱布覆盖腹部，引流的静脉输液管留取约6 cm长，1 mL EP管收集胆汁，胆汁流量稳定后，计时，收集30 min内胆汁，用1 mL注射器抽取胆汁读数，即为给药前胆汁流量;30 min后，各药物组于十二指肠处以相应的药物注射给药1次，空白组以纯化水注射给水1次，给药、给水体积按10 mL/kg体重计，收集胆汁，连续收集给药3 h内的胆汁，每30 min读数1次，记录数据。比较动物给药前后各时间段各组间胆汁排出量的差异性。

2.4 统计学方法采用SPSS18.0统计软件对数据进行分析，用独立样本t检验，计量资料均以（x±s）表示，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有非常显著性差异。

3 结果

3.1 对大鼠尿液排出量的影响与空白组比较，各药物组在6 h内排出的尿液量明显增加，有非常显著性差异（P<0.01）;LDPS组在第1 h内尿液排出量明显增加（P<0.01），在第3、4 h尿液排出增加明显（P<0.05），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;LDPS-G组在第4、5 h尿液排出增加明显（P<0.05），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;LDPS-JH组在第1 h尿液排出量明显增加（P<0.01），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;JQC组在第3、5 h尿液排出量明显增加（P<0.01），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;GJQC草组在第1、4 h尿液排出量明显增加（P<0.01），在第3 h尿液排出量明显增加（P<0.05），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;JHGLH组在第2、3 h尿液排出量明显增加（P<0.05），在第4、5 h尿液排出量明显增加（P<0.01），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异。结果见表1。

与LDPS组比较，LDPS-G组在第1 h尿液排出量明显减少，在第5、6 h尿液排出量明显增加（P<0.05），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;LDPS-JH组在第3 h尿液排出量明显减少（P<0.05），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异。结果见表1。

与JQC组比较，GJQC组在第1 h尿液排出量明显增加、第5 h尿液排出量明显减少（P<0.01），其他各时间段内尿液排出量均无明显差异;JHGLH组在各时间段内尿液排出量均无明显差异。结果见表1。

与LDPS组比较，LDPS-G组在给药后的3 h内的第5、6个30 min胆汁排出量明显减少，有显著性差异（P<0.05），在第1、2、3、4个30 min胆汁排出量无明显差异;LDPS-JH组在给药后的3 h内的6个30 min内胆汁排出量均无明显差异。结果见表2。

与JQC组比较，GJQC组在给药后3 h内的6个30 min内胆汁排出量均无明显差异;JHGLH组在给药后3 h内的第1个30 min内胆汁排出量明显增加（P<0.05），在第2、3、4、5、6个30 min胆汁排出量无明显变化。结果见表2。

4 讨论

排尿量实验结果显示，LDPS、LDPS-G、LDPS-JH、JQC、GJQC、JHGLH都有明显利尿作用，但各药起效时间有所差异，其中LDPS、LDPS-JH、GJQC显效较快，1 h内即见明显利尿作用，除LDPS-JH外，各药均在用药后3～5 h有较强利尿作用显现。

利胆排石片（LDPS）、金钱草片（JQC）中金钱草替以广金钱草或聚花过路黄后对两种制剂的总利尿效果并无影响。但根据GJQC与LDPS-G在6 h内各时间段的尿液排出情况得出，GJQC从明显增加到明显减少，推断广金钱草起效快，维持时间较短，LDPS-G是从明显减少到明显增加，两者都含广金钱草，但利尿效果快慢却有明显差异，分析其原因可能是GJQC为单方制剂，无其他药材的相互作用，其利尿作用即是廣金钱草呈现出的效果，而LDPS-G为复方制剂，广金钱草的利尿效果会受到组方中其他9味药的影响，其影响机制有待进一步研究。

胆汁排出量实验结果表示，LDPS、LDPS-G、LDPS-JH、JQC、GJQC、JHGLH在3 h内都有明显促进胆汁排出作用，即均有利胆作用，其中LDPS、LDPS-G、LDPS-JH、JHGLH显效快，用药30 min内胆汁排出就有明显增加，JQC、GJQC显效相对较慢，在30 min后显示出明显利胆作用。LDPS中金钱草替以广金钱草后，利胆作用在2～3 h明显降低，替以聚花过路黄后，利胆作用无明显变化。JQC中金钱草替以广金钱草后，利胆作用无明显差异，替以聚花过路黄后，胆汁排出量在30 min内增加明显，30 min后增加效果不明显。

综上所述，可以得出利胆排石片（LDPS）中金钱草被广金钱草取代后，利胆作用在2 h后有明显降低，而利尿作用却自3 h始有增加趋势，至5 h增加明显，因此，项目组成员认为以金钱草为君藥、以防治胆石症为主要疗效的中药复方，不能以广金钱草替代配方，但是以防治尿石症为主要疗效的，用广金钱草替代后可能通过促进尿液的排出增强复方的疗效，此结果与已有报道金钱草与广金钱草在防治结石方面的选择性作用相吻合[10，19]。金钱草片（JQC）中金钱草被广金钱草取代后，利尿作用起效较快，维持时间短，临床上可以用于比较急的状况，通过增加服用次数来达到较为满意的疗效。LDPS、JQC中金钱草替以聚花过路黄后，对大鼠尿液、胆汁的排出量均无明显变化，该结果可以解释现今临床上金钱草、聚花过路黄2个品种混用于抗结石药方中，而又能取得较好疗效的现象。

另外，聚花过路黄原本是1味民间草药，据俞冰[20]等考证，该药最早记载于清朝赵学楷所撰的《百草镜》，名为“地蜈蚣”;2006年版《中药大辞典》以“风寒草”收载，曰：“能祛风散寒、化痰止咳、解毒利湿、消积排石，用于风寒头痛、咳嗽痰多、黄疸、胆道结石、尿路结石等的治疗”[21];2010年版《四川省中药材标准》以“风寒草”收载[22]，有祛风散寒，化痰止咳，解毒利湿，消积排石的功效，用于风寒头痛、咳嗽痰多、尿路结石等的治疗。现今，中医临床少有以“风寒草”等为名以聚花过路黄全草入药治疗结石，却常被发现以“金钱草”的混伪品身份出现[11，14]，本文结果表明，聚花过路黄在促进动物尿液、胆汁排出方面有明显作用，与金钱草相似，且其植株常生于路旁、溪边、荒山坡等处，极富密集性，繁殖容易，绿色持续期较长，常被用作优良野生地被植物资源[23]，资源丰富，因而建议在临床做相关对照研究，尝试在有明确临床疗效基础上，为“聚花过路黄”正名，进一步推广临床应用，恢复其在医疗中的地位，而不是以金钱草的混伪品出现于市场或临床，又因各本草记载的功效有别，其究竟具有哪些方面的疗效，也有待进一步研究。

项目组成员后续将就利胆排石片（LDPS）、金钱草片（JQC）中金钱草被广金钱草或聚花过路黄取代后，对结石模型动物的结石形成影响做进一步研究。

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