邹 青 全海燕 李 平

湖南环境生物职业技术学院，湖南衡阳 421000

单硝酸异山梨酯（isosorbide mononitrate） 化学名 1，4：3，6-二脱水-D-山梨醇-5-硝酸酯，为新一代硝酸酯类抗心绞痛用药，特别适用于冠心病、心绞痛患者的防治，是目前硝酸酯类药物中较有前途的品种之一[1-3]。最新的研究结果显示[4]：心脑血管疾病的高死亡率在一定程度上是因为人们没有意识到疾病背后隐藏的时辰节律性[5]。研究发现，凌晨6 ～ 13点之间心血管疾病的发病率比其他时段高30% ～ 40%[6]。目前单硝酸异山梨酯的制剂主要为口服制剂和透皮吸收制剂，开发研究的重点集中在缓控释制剂上[7]。单硝酸异山梨酯普通片剂目前在国内外应用较广，但在实际使用中由于存在着服药间隔和服药剂量掌握不严格两个主要问题致使60%以上的患者由于产生耐受性而未得到最佳疗效。而单硝酸异山梨酯缓释片明显改善了药物浓度波动大的问题，降低了药物的耐受性。但该制剂仅改善了普通制剂波动较大的现状，并没有考虑到心绞痛疾病的时辰节律性[8]，并不能提供心血管疾病所需要的脉冲释药曲线。本研究根据药物的性质、心绞痛疾病的发病特点及时辰药理学的指导，拟采用单层渗透泵技术，在片芯外分别包HPMC隔离衣膜和控释衣膜（含致孔剂，无需打孔）制备一种具有4h时滞的新型单硝酸异山梨酯择时释放微孔渗透泵控释片[9-10]——可防治晨发性心绞痛，并采用高效液相色谱法建立了该制剂的含量测定方法[11]，为该新剂型的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器

LC-10AP高效液相色谱仪（日本岛津分析仪器公司）；N-2000双通道色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津分析仪器公司）；BS110S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ3200B型超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）；BY300A小型包衣锅（上海黄海药检仪器厂）；TDP型单冲压片机（上海天祥、健台制药机械有限公司）；RCZ-8A智能溶出实验仪（天津大学无线电厂）。

1.2 试药

单硝酸异山梨酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100705-200902）；单硝酸异山梨酯（山东方明药业有限公司，批号：20120916）；可压性淀粉（上海卡乐康包衣技术有限公司）；葡萄糖（中国惠兴生化试剂有限公司）；Opadry CA（上海卡乐康包衣技术有限公司）；PVPK30（上海卡乐康包衣技术有限公司）；PEG-400（广东汕头市西陇化工厂）；HPMC（上海卡乐康包衣技术有限公司）；丙酮（南京化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，南京化学试剂有限公司）；乙醇（分析纯，南京化学试剂有限公司）；单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片（自制，批号：20191020，20191025，20191031，规格 40mg），其他试剂均为分析纯。

1.3 方法[12-13]

1.3.1 片芯的制备 将单硝酸异山梨酯与适量葡萄糖（渗透压促进剂）、适量可压性淀粉混匀，以5%PVPK30乙醇溶液为粘合剂制成软材，用20目筛制粒，40℃恒温箱充分干燥后，用18目筛整粒，然后加入适量滑石粉，混合均匀后压片，制成片芯。硬度应控制在60 ～ 80N。

1.3.2 隔离衣包衣液配制 称取HPMC适量，在搅拌过程中缓慢加入到90%的乙醇溶液中，使分散均匀。

1.3.3 控释衣包衣液配制 称取Opadry CA适量，在搅拌过程中加入到90∶10（v/v）的丙酮水溶液中，按比例称取适量PEG400缓慢溶解到上述丙酮水溶液中，使混合均匀。

1.3.4 包衣工艺 片芯在40～50℃（片床温度）下包隔离衣，流速5mL/min，至片芯达到预定增重后，40℃下烘干6 ～ 8h，经检验合格后在40～50℃（片床温度）下包控释衣，流速4mL/min，至控释衣膜增重达到预定要求后40℃下烘干6～8h。

2 含量测定结果[14]

2.1 色谱条件

色谱柱：Beckman ODS （ 4.6mm×25cm，5μm）；流动相：甲醇∶水=40∶60（v/v）；流速：1mL/min；柱温：35℃；检测波长：219nm；进样量：20μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取单硝酸异山梨酯40mg，置于100mL容量瓶，加适量流动相振摇溶解后，稀释并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0.4mg/mL的单硝酸异山梨酯对照品溶液1。精密量5mL对照品溶液1置于50mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得到浓度为0.04mg/mL的单硝酸异山梨酯对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片10片，精密称定，除去包衣膜，精密称定，研细，精密称取粉末适量（约相当于单硝酸异山梨酯40mg的细粉），置于100mL容量瓶，加流动相适量，振摇使之溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤。精密量取续滤液5mL，置于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得单硝酸异山梨酯供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液的制备

取处方量辅料，按“1.3”项下的方法制备不含单硝酸异山梨酯的空白择时微孔渗透泵片，并按“2.3”项下的步骤同法制备，即制得阴性样品溶液。

2.5 系统适用性试验

取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按照“2.1”色谱条件，分别取20μL进样测定，色谱图见图1，结果表明，在上述色谱条件下，其他成分不干扰单硝酸异山梨酯的HPLC测定。

图1 HPLC色谱图

2.6 线性关系试验

精密称取单硝酸异山梨酯对照品50mg置100mL容量瓶中，加适量流动相溶解，稀释至刻度，作为储备液（500μg/mL）。精密量取储备液5、3、1.5、1、0.5mL，置 50mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度得到 50、30、15、10、5μg/mL 的单硝酸异山梨酯对照品溶液。按照“2.1”色谱条件，取20μL进样测定，用浓度与峰面积进行线性回归。结果表明，单硝酸异山梨酯浓度（C）与其峰面积（A）在5.0～50μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为A=4930C-606.18（r=0.9999，n=5）。

2.7 精密度试验

取“2.2”项下的对照品溶液，按照“2.1”色谱条件，连续进样5次，测定峰面积，计算单硝酸异山梨酯峰面积的RSD为0.92%（n=5）。

2.8 溶液稳定性试验

取“2.2”项下的对照品溶液及“2.3”项下的供试品溶液，放置 0、2、4、6、8、12h 后，按照“2.1”色谱条件，测定单硝酸异山梨酯面积，以峰面积考察稳定性。结果表明，对照品溶液和供试品溶液中单硝酸异山梨酯峰面积的RSD分别为0.78%，0.96%（n=5）。表明单硝酸异山梨酯对照品溶液和供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.9 重复性试验

取单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片样品，除去包衣膜，精密称定，研细，分别精密称取6份粉末适量（约相当于单硝酸异山梨酯40mg的细粉），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”色谱条件，取20μL进样，测定峰面积；另取“2.2”项下对照品溶液，同法测定，按外标法计算。样品中单硝酸异山梨酯的平均标示量为98.8%，RSD为0.91%（n=6）。

2.10 回收率试验

精密称取单硝酸异山梨酯对照品32，40，48mg（80%、100%、120%）各三份，置于50mL容量瓶中，按处方比例加入辅料，加入流动相适量，振摇溶解，稀释至刻度，摇匀。用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液稀释至适当浓度并进样，另取“2.2”项下单硝酸异山梨酯对照品溶液作为对照，计算回收率，得到平均回收率为99.19%，RSD为0.41%（n=9）。

2.11 样品含量测定

取单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片样品3批，按“2.3”项进行制备，按照“2.1”项下条件进样，记录数据。另取“2.2”项下单硝酸异山梨酯对照品溶液，以峰面积计算单硝酸异山梨酯的含量。结果见表1，3个批号的样品含量均符合规定。

表1 单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片的含量测定结果（%，n=3）

2.12 单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片的体外释放曲线

取上述3批自制单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片，按照《中国药典》2015年版四部通则0931溶出度与释放度测定法[15]，采用转篮法，以pH6.8的磷酸盐缓冲液为释放介质，转篮转速为100r/min，温度为（37.0±0.5）℃，比较三个批次的释放度差异，结果见图2。

图2 单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片的体外释放曲线

由图2结果可知，三批单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片体外释放曲线批间重复性良好。三批样品在前4h几乎不释放，4～16h内基本达到零级释放，释药持续12h。本制剂日服一次，不仅可减少患者服药次数，且通过缓慢恒速释放药物，使血药浓度保持平稳，且具有约4h时滞，与心绞痛发作的生物节律相符合，适于心绞痛的时辰给药治疗。

3 讨论

本研究制备的单硝酸异山梨酯择时微孔渗透泵片与现有制剂相比不仅具有血药浓度波动小，给药次数少，药效持久，还具有符合心脑血管疾病的时辰节律性的特点。自制片通过隔离衣和控释衣的共同溶蚀控制药物释放的时滞，待隔离衣缓慢溶蚀后，基本通过控释衣控制药物的释放，并达到零级释放，从而具有择时和控释的双重效果。其还具有传统渗透泵制剂药物的释放行为，不受环境pH值、食物以及胃肠蠕动等因素的影响[16-17]。

目前在美国上市的盐酸维拉帕米渗透泵片（商品名为Covera-HS），是首个上市的脉冲制剂[18]。它是依据渗透泵技术制备的择时释药制剂，含有双层膜结构，内层为羟丙甲纤维素（HPMC）隔离衣膜，外层为醋酸纤维素控释衣膜，在靠近药物层的控释衣膜上有释药小孔。其为双层片芯外包双层膜的制剂，需要激光打孔，而本研究制备的单硝酸异山梨酯择时释时微孔渗透泵片为单层片，控释衣膜的释药孔由致孔剂遇水形成的大量微孔组成[19-20]。因此，相比已经上市的择时释药制剂，本研究的择时释药制剂不仅制备简单，且无需激光打孔，降低了生产成本。