刘 钰，庄占兴，刘 军，崔蕊蕊，朱芹芹，韩增瑞，韩金涛*

(1.山东省农药科学研究院，山东省化学农药重点实验室，山东 济南 250033;2.济南绿霸农药有限公司，山东 济南 251600)

噁唑酰草胺(Metamifop，结构见图1)，化学名称：(2R)-2-[4-[(6-氯-2-苯噁唑基)]苯氧基]-N-(2-氟苯)-N-甲基丙酰胺。噁唑酰草胺(metamifop)是一种新的芳氧苯氧丙酸酯类(APP)除草剂。APP从上世纪70年代开始用于宽叶作物防除窄叶杂草，但噁唑酰草胺是这类除草剂中第一个在水稻上显示选择性的品种。噁唑酰草胺有着广泛的可混性，并有望用于其它类作物和草坪除草，已在全世界各地进行了各种田间试验，是一个很有发展前途的除草剂品种[1]。

灭草松(Bentazone，结构见图1)，化学名称：3-异丙基-(1H)-苯并-2,1,3-噻二嗪-4-酮-2,2-二氧化物。灭草松属杂环类触杀型具选择性的苗后除草剂，用于苗期，茎叶处理。防除冬、春禾谷类作物田中阔叶类杂草。噁唑酰草胺与灭草松两者进行混配，可以有效防除水稻田禾各类杂草[2-3]。

图1 噁唑酰草胺和灭草松的结构式

目前国内已有噁唑酰草胺的液相色谱和色谱-质谱法分析相关报道[4-9]，也有对灭草松的液相色谱和液相色谱-质谱法分析报道[10-13]。但噁唑酰草胺和灭草松混配制剂的色谱分析尚未见报道。本文建立了一种同时快速定性定量检测20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂的高效液相色谱分析方法，该检测方法灵敏度高，准确可靠，简便、快速，有较高的实际应用和参考价值。

1 实验过程

1.1 仪器和试剂

日立Primaide高效液相色谱仪，具有可变波长紫外检测器；

N2000色谱工作站；

乙腈：LC级；

水：0.22μm滤膜过滤的二次水；

噁唑酰草胺标准品(CAS:256412-89-2)：质量分数≥99.0%；

灭草松标准品(CAS：25057-89-0)：质量分数≥99.0%；

分析样品：20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂。

1.2 HPLC仪器条件

色谱柱： BDS HYPERSIL-C18(250mm×4.6mm×5μm)；

检测波长λ：240nm；

流动相：V(乙腈)∶V(水)=65∶35；

流量：1.0mL/min；

柱温：室温；

进样体积：5μL；

保留时间：灭草松约2.4min；噁唑酰草胺7.6min。

图见2、图3为噁唑酰草胺和灭草松典型LC色谱图。

图2 噁唑酰草胺和灭草松标准物质LC色谱图

图3 20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂LC色谱图

1.3 分析步骤

1.3.1 配制标准溶液

准确称取0.01g噁唑酰草胺标样和0.05 g灭草松标样，置于同一50mL容量瓶中，用乙腈溶解，并用乙腈准确定容,经超声波振荡15min待用。

1.3.2 配制试样溶液

准确称取20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂试样0.3g置于50mL容量瓶中，用乙腈定容备用。

1.3.3 HPLC分析

在上述分析条件下，等仪器状态稳定基线平稳后，注入数针标样溶液，等相邻两针标样中目标物峰面积的相对变化控制在1.5%以内后，按照一针标样、一针试样、一针试样、一针标样的顺序依次进行进样，记录结果。

1.3.4 计算方法

本实验以目标物在色谱图中的保留时间定性，采用外标法依据峰面积大小来定量。将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中目标物的峰面积分别进行平均。试样中被测组分的质量分数X1(%)，按下述公式计算：

式中：

A1——标样溶液中，目标物峰面积的平均值；

A2——试样溶液中，目标物峰面积的平均值；

M1——目标物标样的质量，g；

M2——试样质量，g；

P——标样中目标物的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 HPLC分析条件的优化

2.1.1 检测波长λ的确定

对噁唑酰草胺/灭草松标准样品溶液进行紫外波长(190～400nm)全扫描，得到波长λ与响应值A的光谱图。根据光谱图可知，噁唑酰草胺/灭草松在λ=240nm时，有较强吸收峰，且杂质和流动相干扰小，所以确定该分析方法的检测波长为240nm。

2.1.2 色谱柱和流动相的确定

根据噁唑酰草胺/灭草松的化学结构特点，选用Thermo Hypersil ODS C18不锈钢柱对试样进行分离检测。在上述色谱柱条件下，我们尝试了常规流动相甲醇、乙腈等按照不同的比例与水进行混配作为流动相。在保证噁唑酰草胺和灭草松既能够出峰快又能够有效分离前提下，为节约成本，最终确定V(乙腈)∶V(水)=65∶35作为试验条件。

2.2 分析方法线性相关性研究

配制噁唑酰草胺浓度分别为53,101,191,249,337mg/L的标准质量溶液，在上述确定好的色谱条件下进行分析测定，将噁唑酰草胺的质量浓度为为横坐标，将其峰面积作为纵坐标进行作图，可得到线性回归方程：y = 4804.3x - 3214.4，相关系数r=0.9992。结果可看出，在上述分析条件下，噁唑酰草胺质量浓度在53～337mg/mL范围内具有较好的定量线性关系。

配制灭草松浓度分别为290,540,1013,1364,1724mg/L的标准质量溶液，同样在上述色谱条件下进行测定，将灭草松的质量浓度作为横坐标，将其峰面积作为纵坐标作图，得到线性回归方程：y = 3994.5x + 141678，相关系数r=0.9995。结果可看出，在上述分析条件下，灭草松质量浓度在290-1724mg/L范围内具有较好的定量线性关系。

2.3 分析方法精密度研究

选用上述优化的色谱条件，为研究其标准偏差和RSD值，我们对20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂进行了5次平行检测，试验结果见表1、表2。

表1 噁唑酰草胺精密度测量结果

表2 灭草松精密度测量结果

2.4 分析方法回收率研究

在已知组分含量的20%噁唑酰草胺·灭草松微乳剂试样溶液中加入一定量的标准物质，选用上述优化的色谱条件，测定加标试样中被测组分的质量分数，计算添加回收率(见表3、表4)。由表3可看出，噁唑酰草胺的回收率范围99.0%～100.2%，对5次回收率进行平均计算，得出其平均回收率为99.4%。由表4可知，灭草松的回收率范围99.1%～101.4%，对5次回收率进行平均计算，得出其平均回收率为99.9%。由此可见，该分析方法同时测定噁唑酰草胺/灭草松的质量分数，具有满意的回收率。

表3 噁唑酰草胺回收率试验结果

表4 灭草松回收率试验结果

3 结论

上述HPLC分析方法能够同时快速准确测定样品中噁唑酰草胺和灭草松的质量分数，且具有良好的线性关系r>0.9992，有令人满意的精密度和回收率，该分析方法可以对实际生产过程中相关产品的质量检测提供依据，有一定参考价值。