万佳丽 明凯利 向阳 林凤杰 王丫头 熊莉 周翔 余敏 黄志军

摘要  目的：建立准确可靠的小金胶囊中麝香酮含量测定方法。方法：采用（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷为固定相的色谱柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm），FID检测器温度为300 ℃，载气为氮气，流速为1.5 mL/min，未分流，柱温为程序升温，进样量为1 μL。以正十八烷为内标物，采用内标法以峰面积比进行检验计算。结果：阴性对照品溶液在与内标溶液、对照品溶液和供试品溶液色谱图相同时间处未见相同色谱峰，麝香酮在进样量为0.120 1～1.200 6 ng的范围内线性关系良好（R2=0.999 7），精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<3%，平均回收率为99.93%，RSD为1.30%（ n =6）。结论：该方法操作简便，与本品现行药典方法相比，检测结果更准确重复性更好，检测时间大大缩短，可用于小金胶囊中麝香酮的含量测定。

关键词  小金胶囊;麝香酮;含量测定;气相色谱法;内标法

Study on Determination Method of Musk Ketone Content in Xiaojin Capsules

WAN Jiali1，MING Kaili2，XIANG Yang2，LIN Fengjie1，WANG Yatou2，XIONG Li2，ZHOU Xiang2，YU Min2，HUANG Zhijun1，2

（1 Wuhan University of Technology，Wuhan 430070，China; 2 Jianmin Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Wuhan 430052，China）

Abstract Objective： To establish an accurate and reliable method for determination of musk ketone in Xiaojin Capsules. Methods： （5%-phenyl）-methylpolysilicone was used as the stationary phase column（30 m × 0.32 mm × 1.8 μm）.FID detector temperature was 300 ℃.Carrier gas was nitrogen.The flow rate was 1.5 mL/min，with no shunt.Column temperature was programmed temperature.And injection volume was 1 μL.N-octadecane was used as internal standard，and internal standard method was used to perform test and calculation according to the peak area ratio. Results： The same chromatographic peak was not seen at the same time in chromatograms of negative reference solution，internal standard solution，reference solution and test solution.Musk ketone had a good linear relationship in the range of 0.1201～1.2006 ng injection volume（R2 = 0.999 7）.RSD for precision，stability，and repeatability tests was < 3%.The average recovery was 99.93% and the RSD was 1.30%（n = 6）. Conclusion： The method is simple and convenient to operate.Compared with the current pharmacopoeia method for the product，its detection result is more accurate and repeatable，with detection time greatly shortened，and it can be used for determining the content of musk ketone in Xiaojin Capsules.

Keywords  Xiaojin Capsules; Musk ketone; Content determination; Gas chromatography; Internal standard method

中圖分类号：R284 文献标识码：A  doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2020.04.011

小金胶囊主要由人工麝香、木鳖子、制草乌、枫香脂、乳香、没药、当归、五灵脂、地龙、香墨等10味中药材组成，其处方来源于中医经典名方“小金丹”[1-2]，具有散结消肿，化瘀止痛的功效，用于阴疽初起，皮色不变，肿硬作痛，多发性脓肿，瘿瘤，瘰疬，乳岩，乳癖[3]。临床上可用于甲状腺结节、乳腺增生、前列腺增生、子宫肌瘤、乳腺癌等疾病的治疗[4-11]。小金胶囊作为治疗阴疽症状的代表方，常作为疽证理论研究的基础方，以丰富和发展中医理论[12-13]。

小金胶囊标准收载于2015版《中华人民共和国药典》，其中麝香酮为含量测定项，药典标准采用气相色谱法进行检测，但在长期实践中发现，根据药典检测方法，麝香酮出峰保留时间较长，在运行时间内无法出峰，且存在含测结果重现性较差，准确度偏低，结果真实性难以保证等问题。为了更真实的反应和控制小金胶囊的质量，本研究对药典方法进行了重新修订研究，建立了气相色谱内标法测定小金胶囊中麝香酮的含量，该方法操作简便，结果更准确，专属性强，检测时间短，较药典方法更能准确地测定麝香酮的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 6890气相色谱仪和FID检测器（美国安捷伦科技有限公司）;CH-1型高純氢气发生器（武汉科林普丰仪器有限公司）;CA-1型静音无油空气泵（武汉科林普丰仪器有限公司）;UA800-DH数字式超声波清洗仪（功率800 W，频率40 kHz，上海欧河机械设备有限公司）;Mettler ME203E、Mettler ME104E、Mettler TOLEDO XPE105电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

1.2 试剂

麝香酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110719-201716;纯度99.9%）;正十八烷（中国食品药品检定研究院，批号：111636-201303;纯度99.4%）;乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司;分析纯）;小金胶囊15批（健民药业集团股份有限公司，批号：181173;181174;181175;181176;181177;181178;181179;181280;181281;181282;181283;181284;181285;181286;181287）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷为固定相的色谱柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm）;柱温为程序升温，初始温度为170 ℃，维持5 min，以10 ℃/min的速率升温至250 ℃，维持5 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，维持9 min;进样口温度为250 ℃;FID检测器温度为300 ℃;载气为氮气;流速为1.5 mL/min;未分流;进样量为1 μL。理论板数按麝香酮峰计算应不低于20 000。

2.2 对照品溶液的制备

内标溶液，精密称取正十八烷适量，加乙酸乙酯制成每1 mL含1.5 mg的溶液，作为内标溶液。精密称取麝香酮对照品2 mg，置5 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取小金胶囊内容物适量，研细，取约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入内标溶液1 mL、乙酸乙酯4 mL，密塞，称定重量并记录，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，取出，放冷，称重，用乙酸乙酯补足重量差，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。阴性对照品溶液，小金胶囊去麝香酮后，不加内标溶液，同供试品溶液提取方法即得。

2.4 专属性试验

分别取内标溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，根据2.1的色谱条件进行专属性试验，结果显示阴性对照品溶液在与内标溶液、对照品溶液和供试品溶液色谱图相同时间处未见相同色谱峰，提示麝香酮具有良好的专属性，色谱图见图1。

2.5 线性关系考察

精密称取正十八烷66.60 mg，置50 mL量瓶中，加乙酸乙酯使其溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为1.324 0 mg/mL的正十八烷内标溶液;另精密称取麝香酮对照品100.15 mg，置50 mL量瓶中，加乙酸乙酯使其溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为2.001 0 mg/mL的麝香酮对照品储备液。分别精密量取对照品储备液0.3、0.5、1、2、3 mL，分别置5 mL量瓶中，各精密加入内标溶液1 mL，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以麝香酮峰积分面积与正十八烷峰积分面积的比值对麝香酮进样量（X：ng）进行线性回归，得回归方程为Y=3.348 6X+0.030 7（R2=0.999 7）。见图2。结果表明，麝香酮进样量在0.120 1～1.200 6 ng的范围内与峰面积比呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液按上述色谱条件连续进样5次，计算得麝香酮与内标峰面积比值的RSD为0.36%（ n =5），结果表明，该仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

将小金胶囊样品（批号：181173）按“2.3”项下方法制成供试品溶液，于室温下放置，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、24 h进样，计算得麝香酮与内标峰面积比值的RSD为1.04%（ n =6）提示小金胶囊供试品溶液在24 h内具有良好的稳定性。

2.8 重复性试验

取同一批号样品（批号：181173），按“2.3”项下方法制备6份样品，按“2.1”项下色谱条件进样检测，计算得麝香酮含量的平均值为1.288 5 mg/g，RSD为1.10%（ n =6），结果表明方法重复性良好。

2.9 回收率试验

取已知含量的小金胶囊样品（批号：181173）研细，取约0.5 g，精密称定，共平行6份，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入麝香酮对照品储备液4 mL、正十八烷内标溶液1 mL，按“2.3”项下方法制成6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，计算回收率，结果如表1所示，平均回收率为99.93%，RSD为1.30%（ n =6）。

2.10 样品含量测定

取15批小金胶囊样品，按“2.3”项下方法制备成供试品溶液，按照上述色谱条件分别进样，记录色谱图，按内标法以峰面积比计算，麝香酮含量测定结果见表2。根据各批测定结果，制订限度为本品麝香酮含量不低于1.00 mg/g，即每粒含人工麝香以麝香酮（C16H30O）计，（规格：0.35 g/粒）不得少于0.35 mg。

2.11 与现有药典方法比较

取15批小金胶囊样品，分别用正文制定的方法与药典方法进行检测，色谱图如图3所示，药典方法在30 min运行时间内无法出峰，在35 min出峰，正文制定的方法在16 min左右麝香酮即可出峰。各批小金胶囊样品含量测定结果见表3，2种方法检测结果差别较大，药典方法含测数据普遍比正文制定方法含测数据高，且波动性较大，正文制定的方法测定的样品麝香酮含量波动性较小，准确性高。2种含测方法比较结果见表4，正文制定的方法解决了药典方法在运行时间内无法出峰的问题，并缩短检测时间，明确仪器参数，较药典方法更能准确地测定麝香酮的含量。

程序升温方法 初始温度100 ℃，以每分钟10 ℃的速率升温至200 ℃，保持20 min。出峰时间在35 min左右，在运行時间（30 min）内无法出峰。 初始温度170 ℃，保持5 min分钟，以每分钟10 ℃的速率升温至250 ℃，保持5 min，每分钟30 ℃的速率升温至280 ℃，保持9 min。麝香酮和内标物分别在13 min和16 min左右即可出峰。 解决了原方法运行时间内无法出峰的问题，同时缩短检测时间，降低成本;改善麝香酮峰形;减少色谱柱的损耗和污染。

仪器参数 参数不明确，如进样口温度、检测器温度未明确。 固定进样口温度为250 ℃，检测器温度为300 ℃。 仪器参数更明确。

其他 1.对照品溶剂为乙醇，供试品溶剂为乙酸乙酯;2.进样量：对照品溶液2 μL、供试品溶液3 μL。 溶剂统一为乙酸乙酯，进样量均为1 μL。 对照品和供试品方法一致，更合理，减少波动和误差。

3 讨论

3.1 方法选择

文献报道中关于麝香酮的检测分析方法很多，如高效液相衍生化法、薄层双波长扫描法、气相色谱法、GC-MS/MS法等[14-19]，但相较而言，气相色谱法为当前检测麝香酮较常用的方法。与其他方法相比，气相方法样品前处理简单，通过适宜的程序升温条件，即可保证麝香酮具有良好的峰形和响应性，而高效液相衍生化法样品处理复杂，薄层双波长扫描法针对中药大处方受干扰成分影响且响应差，而GC-MS/MS法虽能获得较好的结果，但对设备要求高，检测成本高。因此，综合考虑，本文选择气相色谱法检测麝香酮。

3.2 定量方法的考察

比较内标法和外标法2种定量方法，其中内标法以正十八烷作为内标物。取样品（批号：181173），按正文测定法制备供试品溶液1份，在气相色谱条件下连续进样6次，计算麝香酮峰峰面积的RSD为7.70%（ n =6），麝香酮峰峰面积与正十八烷峰峰面积比值的RSD为1.00%（ n =6），结果表明内标法准确性更高，可消除由于进样量等色谱条件的变化或波动而引起的误差。

3.3 程序升温条件的考察

考察比较了五种柱温程序升温方法对色谱图的影响，程序1：初始温度为200 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升温至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，保持10 min;程序2：初始温度为250 ℃，保持13 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，保持10 min;程序3：初始温度为150 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升温至250 ℃，保持10 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，保持10 min;程序4：初始温度为180 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升温至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，保持10 min;程序5：初始温度为170 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升温至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升温至280 ℃，保持9 min。结果表明，在一定范围内，起始柱温越高出峰越快，但分离度稍差。见图4（A）、（B）、（C）、（D）、（E）。其中程序2下内标物正十八烷未分开，程序1下分离度稍差，程序3、4、5下分离度均较好，但在程序5下麝香酮的峰型和响应值最好，故综合考虑选择程序升温条件为5。

3.4 小结

本试验采用气相色谱内标法测定小金胶囊麝香酮的含量，解决了药典方法运行时间内无法出峰的问题，同时缩短检测时间，降低成本，并且该方法操作简便、灵敏度高、准确度好，毒性小，对环境污染小，较药典方法更能准确地测定小金胶囊中的麝香酮的含量。

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（2019-12-09收稿 责任编辑：徐颖）

中医药有效方剂筛选研究取得阶段性进

国家中医药局坚决贯彻落实习近平总书记重要指示精神，把人民群众生命安全和身体健康放在第一位，加速推进中医药防治新型冠状病毒感染的肺炎科研攻关工作。日前，由该局组织实施的应急科研专项已取得阶段性进展，据4省试点临床观察显示，清肺排毒汤治疗新型冠状病毒感染的肺炎患者总有效率可达90%以上。

据悉，1月27日，国家中医药局以临床急用实用效用为导向，紧急启动“防治新型冠状病毒感染的肺炎中医药有效方剂筛选研究”专项，在山西、河北、黑龙江、陕西四省试点开展清肺排毒汤救治新型冠状病毒感染的肺炎患者临床疗效观察，重点观察确诊患者乏力、发烧、咳嗽、咽痛、纳差等症状及影像学表现变化情况，旨在迅速找到针对本次疫病有良好疗效乃至特效的核心方药。据统计，截至2月5日0时，4个试点省份运用清肺排毒汤救治确诊病例214例，3天为一个疗程，总有效率达90%以上，其中60%以上患者症状和影像学表现改善明显，30%患者症状平稳且无加重。

据专家介绍，清肺排毒汤由汉代张仲景所著《伤寒杂病论》中的多个治疗由寒邪引起的外感热病的经典方剂优化组合而成，组方合理，性味平和，可用于治疗新型冠状病毒感染的肺炎轻型、普通型、重型患者，在危重症患者救治中也可结合患者实际情况合理使用。该方也可用于普通感冒和流感患者。但该方为疾病治疗方剂，不建议作为预防方使用。

（转载于中国中医官方公众号）

基金项目：国家中医药管理局中药重点产品行业标准制定计划（ZYY-2017-018）作者简介：万佳丽（1996.09—），女，硕士研究生在读，研究方向：中药学研究，E-mail：wanjiali1996@163.com通信作者：黄志军（1972.06—），男，博士，副教授，研究方向：天然药物及其活性研究，Tel：（027）84520229，E-mail：452354589@qq.com