郭晓珊 陈丙春

摘要：目的：观察雄黄斑马鱼幼鱼急性毒性。方法：用高剂量170 mg/L，中剂量85 mg/L，低剂量42.5 mg/L的雄黄水溶液处理斑马鱼幼鱼，观察记录鱼的中毒情况（平衡、游动、呼吸、体色变化）以及 24-144小时的死亡情况及开始死亡时间及死亡数目。结果： 在雄黄浓度為170mg/L时，其72小时干预的斑马鱼胚胎死亡过半数，所以雄黄的急性毒性LD50为170mg/L。

关键词：雄黄; 斑马鱼幼鱼; 急性毒性

雄黄，为我国常用的矿物类中药。李时珍《本草纲目》曰：“雄黄入点化黄金用，故名黄金石”。中医学认为雄黄具有解毒杀虫、燥湿祛痰、截疟等功效。雄黄最早入药的记载为《神农本草经》，临床应用的历史已有几千年。自20世纪50年代以来，国内医者将含雄黄的复方制剂或单方用于治疗血液系统疾病、恶性淋巴系统疾病甚至实体瘤，取得了明显的治疗效果。尤其是近年来其对慢性粒细胞白血病和急性早幼粒细胞白血病表现出的良好治疗效果得到了世界的广泛关注，成为除了砒霜外砷类抗癌药的又一新星，与砒霜比其低毒性更是备受关注。

雄黄可内服外用，用途广泛，很多中成药处方包括一些经典名方如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸以及儿科常用中成药至宝丸、小儿惊风七厘散等含有雄黄。据统计，国家标准中收载的含有雄黄的中成药约200个。然而，毒副作用较强是雄黄应用中面临的主要挑战。

近年来的研究结果显示：有无机砷及其代谢产物能通过胎盘屏障损害胎儿的正常发育，吴文斌等研究发现雄黄对啮齿类动物及其胚胎胎仔发育的毒性很低，需要进一步在非啮齿类动物身上试验证实。目前，雄黄对非啮齿类动物及其胚胎胎仔发育的毒性的研究还未见报道。

斑马鱼是目前研究药物毒性实验的最直观的理想模式动物之一，因为其繁殖快，幼鱼全身透明，可视性强。斑马鱼是一种小型热带鱼。由于产卵量大、易收集、饲养简单等特点， 现已成为一些毒理标准（ 如 OECD 和ISO 标准） 的推荐测试物种和研究发育生物学的理想模型。

1.材料  野生斑马鱼幼鱼（3月龄）。

2.药物及其配置

2.1 雄黄水飞炮制及配置雄黄溶液3个剂量组：取雄黄生品，精密称定，置研钵中加0.5倍量的水，研磨5min至糊状，再加40倍量的水搅拌1min，停置4min，倾取混悬液，下沉的粗粉继续研磨，如此反复操作，直至手捻细腻、无亮星为止，合并各次混悬液，静置10h以上，倾去上清液，过滤，将滤出物60℃以下恒温干燥10h，即得炮制品。

2.2配置雄黄溶液3个剂量组：高剂量170 mg/L，中剂量85 mg/L，低剂量42.5 mg/L，为人临床拟用剂量的100、50和25倍。空白对照为纯水。

3实验方法： 4组试剂分别处理4组健康的雌雄斑马鱼幼鱼（3月龄），试验开始时连续观察 8 小时，观察记录鱼的中毒情况（平衡、游动、呼吸、体色变化）以及 24-144小时的死亡情况及开始死亡时间及死亡数目。当鱼死亡时，立刻取出，观察并记录其体表特征和内脏表面特征。实验时间为 96小时，96小时后若仍有存活鱼，继续实验至 7天。

4.实验结果：

不同浓度雄黄对斑马鱼幼鱼的影响

从本次实验可以看出，在雄黄浓度为170mg/L时，其72小时干预的斑马鱼幼鱼死亡过半数，所以雄黄的急性毒性LD50为170mg/L。

5.讨论：

由此可见，水飞法炮制雄黄对斑马鱼幼鱼的急性毒性LD50为170mg/L。

雄黄的炮制方法有干研法，水飞法，煮法，熬法，油熬法，复制法，火飞法等，而以干研法和水飞法最为常用。雄黄经水飞成极细粉未，在反复操作中，As203就逐渐溶解去除。同时，雄黄中主要成分二硫化二砷不溶于水，故水飞对其没有影响。实验证明：用水飞法除去As203是一个较好的方法。水飞时用水量越多，则As203含量就越低。当用水量为1：125时、As203含量已接近lmg/g;1：250时，As203已降至0.21mg/g以下。

梁爱华等[2]在雄黄中 As2S2质量分数为90%，可溶性砷为1.696mg·g-1情况下，给小鼠单次灌胃给药的 LD50为20.5g·kg-1（ 等于摄入可溶性砷 34.8mg·kg-1） ，相当于人日用量约 12 812 倍。而给大鼠反复灌胃给药时，雄黄超过一定剂量用药达到 2 个月或以上时，可造成肾脏和肝脏病理损害，其中肾脏显示更为敏感。大鼠灌胃雄黄 1，2，3 个月的无明显毒性剂量（ NOAEL） 分别为 160，20，10 mg·kg-1·d-1（ 累积摄入可溶性砷8.14，2.04，1.53 mg·kg-1） 。估计临床使用雄黄的相对安全剂量范围为 10 ～160 mg（ 依用药时间不同） 。结论： 反复使用雄黄时，建议在可溶性砷≤1.7mg·g-1的条件下，雄黄用药 1～2 周时，剂量不超过 160 mg; 用药 2～4 周时，剂量不超过 20mg;如果降低剂量至10mg 或以下，则在用药 6 周内相对安全。

雄黄具有一定的砷毒性，其毒性大小与炮制、加工、给药剂量和给药时间等密切相关。深入研究雄黄的毒性、安全剂量，为雄黄在临床的应用打下一定的理论基础。

参考文献：

[1]吴文斌，汤家铭，祝晓雯，等. 中药雄黄对孕大鼠母体和胚胎-胎仔发育的毒性[J].毒理学杂志，2009，23（ 5） ： 380-383.

[2]梁爱华，李春英，王金华，等.雄黄的毒性研究[J].中国中药杂志，2011，36（14）： 1889-1894.

通讯作者：

陈丙春（1979年—），女，硕士研究生，研究方向：基础医学。