靳学远 张培旗

摘 要：利用微波辅助提取眼树莲总三萜，在单因素试验的基础上，以乙醇浓度、液料比、微波功率及提取时间为因素，以总三萜得率为指标，利用正交试验法确定最佳提取工艺。结果表明：最佳提取条件为乙醇浓度100%、液料比16∶1（mL/g）、微波功率450W、提取时间130s。在该条件下，眼树莲中总三萜的得率达到20.23mg/g，表明微波辅助提取是提取眼树莲中总三萜的适宜方法。

关键词：眼树莲;微波提取;正交试验;总三萜

中图分类号 TQ461文献标识码 A文章编号 1007-7731（2020）11-0030-02

Microwave Assisted Extraction of Total Triterpenes in Dischidia chinensis by Orthogonal Experimental Design

Jin Xueyuan1 et al.

（1College of Clinical Medicine， Hainan Vocational University of Science and Technology， Haikou 571126， China）

Abstrac： Microwave assisted extraction was applied to extract of total triterpenes in Dischidia chinensis. Based on the results of the single factor experiments， the effects of three independent variables （ethanol concentration ， solid-liquid ratio ，extraction power and extraction time） on the triterpenes yield were investigated by a orthogonal experimental design .The optimal extraction parameters to obtain the highest triterpenes yield were as follows： ethanol concentration100% ， liquid -solid ratio 16：1（mL/g），extraction power 450 W and extraction time130s .The average experimental triterpenes yield under the optimum conditions was found to be 20.23mg/g Microwave assisted extraction was a suitable method for extract of total triterpenes from Dischidia chinensis.

Key words： Dischidia chinensis;Microwave extraction;Orthogonal experimental design;Total triterpenes

眼樹莲（Dischidia chinensis），别名上树瓜子、翼鱼草等，为萝藦科眼树莲属附生藤本植物[1-2]，在我国主要分布于海南、广东、广西等省区，具有清肺化痰、凉血解毒之效。其含有三萜、多酚等物质[3-4]，具有抗炎[5]、抗肿瘤[6]、抗氧化[7]等功效。目前，三萜类化合物的提取传统上采用索氏提取法，而微波提取的效率更高，可以大幅缩短提取时间、提高得率，近年来被广泛用于中药有效成分的提取[8-10]。

为此，本研究采用微波提取眼树莲中总三萜，首先通过单因素试验确定影响提取的乙醇浓度、液料比、微波功率及提取时间，然后通过正交试验对眼树莲中三萜类化合物的提取工艺进行优化，以期为眼树莲中三萜类化合物的进一步开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料 仪器：DWIM-200ME实验室微波提取设备，广州帝威工业微波设备有限公司;722可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司;RE-52C旋转蒸发仪，巩义市予华仪器有限公司;HH-6数显恒温水浴锅，国华电器有限公司。材料：眼树莲（全草）采自海南省海口市;高氯酸、香草醛、无水乙醇等均为分析纯;试验用水均为去离子水。

1.2 试验方法

1.2.1 眼树莲预处理 采集新鲜的眼树莲，去杂质，洗净后置于60℃的烘箱中烘干，然后粉碎，装入塑料袋中密封待用。

1.2.2 眼树莲中三萜类化合物的提取与测定 取5g眼树莲，加入溶剂，搅拌均匀，在一定的料液比、微波功率和提取时间条件下进行总三萜的提取，提取后趁热抽滤，真空旋干，得浸膏。以石油醚浸提，无水乙醇溶解后采用活性炭脱色，脱色液用乙酸乙酯萃取，取澄清液于100mL的容量瓶，用乙酸乙酯定容到刻度。取溶液1mL于100mL容量瓶，在80℃水浴下蒸干。然后加入2.0mL 5%香草醛-冰醋酸和6.0mL的高氯酸进行显色反应，60℃水浴下保持20min，冷却用冰醋酸定容，在548nm波长处测其吸光度。总三萜类的浓度按下式计算：

A=0.0756×C+0.0115

式中：A—吸光度;C—总三萜类物质的浓度，mg/mL。然后根据浓度和眼树莲质量计算提取得率。

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 乙醇浓度对总三萜得率的影响 取5份眼树莲，按15∶1（mL/g）的液料比，分别加入浓度为60%、70%、80%、90%、100%的乙醇，在450W功率下微波提取120s。不同乙醇浓度对总三萜得率的影响见图1。由图1可知，随着乙醇体积分数的增大，总三萜得率增大。这是由于无水乙醇（100%）的极性和总三萜相似，可以将其最大限度地溶出。由于乙醇浓度最大是100%，因此，试验选用无水乙醇作为提取溶剂，不再将该因素作为正交试验优化的自变量。

2.1.2 液料比对总三萜得率的影响 取5份眼树莲，按不同的液料比分别加入无水乙醇，在450W的功率下微波提取120s。不同液料比对总三萜得率的影响见图2。由图2可知，随着液料比的增大，得率增加，当液料比超过15∶1（mL/g）后，得率增加缓慢，这是由于液料比高，溶质传递的浓度差大。但随着溶剂用量增加，微波加热负荷、提取时间和下一步浓缩工艺的能耗也需要增加。因此，从节约溶剂和能耗的角度考虑，实验选取最佳液料比为15∶1（mL/g）。

2.1.3 微波功率对总三萜得率的影响 取5份眼树莲，按液料比为15∶1（mL/g）加入浓度无水乙醇，在不同的功率下微波提取120s。不同微波功率对总三萜得率的影响见图3。由图3可知，450W之前，总三萜的得率随功率增大而增大，450W之后，总三萜得率开始下降，可能在于微波功率过大，导致体系升温过快，使部分三萜物质结构被破坏。因此，微波功率选用450W。

2.1.4 提取时间对总三萜得率的影响 取5份眼树莲，在液料比15∶1（mL/g）的情况下加入无水乙醇，在450W的功率下微波提取时间不同。不同提取时间对总三萜得率的影响见图4。由图4可知，随着提取时间的增加，总三萜类得率增大，当提取120s时，得率达到最大值;此后又出现下降趋势，这是由于随着时间的增加，总三萜类物质结构遭到破坏，从而导致提取率下降。因此，提取时间选为120s。

2.2 正交试验优化眼树莲中总三萜的微波提取工艺 在单因素考察的基础上，采用L9（34）正交试验对眼树莲中总三萜的提取工艺条件进行优化。正交试验的因素与水平见表1，结果如表2所示。由表2极差R可知，各因素对眼树莲中总三萜得率影响大小的次序为：微波功率>液料比>提取时间。最佳提取条件为A3B2C3，即：液料比16∶1（mL/g）、微波功率450W、提取时间130s。

对表2的正交结果进行方差分析，在设定a=0.05条件下，方差分析结果见表3。由表3可知，微波功率对眼树莲中总三萜得率的影响显著，其余因素对总三萜得率的影响不显著。采用2kg眼树莲，按上述最佳条件进行放大试验，总三萜得率达到20.23mg/g。

3 結论

利用正交试验对翻眼树莲中总三萜的微波提取工艺进行优化，得到的最佳工艺条件如下：乙醇浓度100%、液料比16∶1（mL/g）、微波功率450W、提取时间130s。在该条件下，眼树莲中总三萜的得率达到20.23mg/g，表明微波辅助提取是提取眼树莲中总三萜的适宜方法。

参考文献

[1]谢宗万.中药材正名词典[M].北京：北京科学技术出版社，2004：803.

[2]广东省植物研究所.海南植物志（第三卷）[M].北京：科学出版社，1974：276-277.

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[9]米丽班·霍加艾合买提.响应面法优化微波提取紫花苜蓿黄酮工艺[J].理化检验-化学分册，2012，48（10）：1206-1212.

[10]陈猛，袁东星，徐鹏翔.微波萃取法研究进展[J].分析测试学报，1999，18（2）：82-86.

（责编：张宏民）

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