陈荣华，赵敏，康惠玲，李勤光

[摘要] 目的 比较两种全自动核酸检测系统的检测结果，探讨国产乙肝核酸定量检测的检测性能。 方法 使用两种系统对相同血浆及血清样本的检测结果，进行系统间一致性和相关性研究。结果 国产检测系统与进口检测系统罗氏相比，检验结果的符合率可达97%以上，决定系数在0.95以上，两系统间呈显著线性相关。 结论 国产乙肝核酸检测可实现全自动操作，且系统性能可与国际水平相当。

[关键词] 全自动核酸检测系统;检测性能;国产乙肝核酸检测;质量控制;结果互认

[中图分类号] R44          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）02（a）-0013-03

Comparison of Two Automatic Nucleic Acid Detection Systems for Hepatitis B Nucleic Acid Detection Performance

CHEN Rong-hua，  ZHAO Min，  KANG Hui-ling， LI Qin-guang

Mengchao Hepatobiliary Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350025 China

[Abstract] Objective To compare the detection results of two automatic nucleic acid detection systems， and to explore the quantitative detection performance of hepatitis b nucleic acid in China. Methods To study the consistency and correlation of the same plasma and serum samples by using two systems. Results Compared with the imported roche testing system， the coincidence rate of the test results reached over 97%， and the determination coefficient was above 0.95， showing a significant linear correlation between the two systems. Conclusion Domestic hepatitis b nucleic acid detection can be fully automatic operation， and the system performance can be comparable with the international level.

[Key words] Automatic nucleic acid detection system; Detection performance; Domestic hepatitis b nucleic acid test; Quality control; The results of mutual recognition

乙型肝炎是嚴重影响我国人民健康水平的公共卫生问题，病情往往迁延反复，最终可导致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌等终未期肝病[1]。抗病毒治疗适用于：ALT≥2×ULN，HBV DNA>2 000 IU/mL，或伴进展性肝纤维化的CHB患者[2]。

HBV-DNA检测是乙肝患者常规检测项目之一[3-4]，主要用来定量检测患者血清或者血浆样本内的乙肝病毒的数量，适用于临床乙型肝炎病毒感染的辅助诊断，并可用于抗病毒药物治疗中疗效的观察[5-6]。对于已经确定为乙型肝炎病毒感染的患者，在进行抗病毒治疗期间，定量检测可以随时观察抗病毒治疗的效果，从而辅助用药[7]。

目前临床普遍认可使用罗氏公司的COBAS 系统及试剂进行乙肝核酸的定量检测，该方法灵敏度高，线性范围宽，且为全自动操作[8]。但该系统因成本较高，一般仅在大型三甲医院使用;国内产品因无法实现全自动操作或国产试剂灵敏度限制，检测能力略低于罗氏。

珀金埃尔默公司旗下全资子公司苏州新波生物技术有限公司开发了一款全自动核酸检测反应体系构建系统Pre-NAT，可实现核酸提取及PCR反应体系配制的全自动操作，该系统可搭配多款PCR扩增仪共同使用，该文使用ABI7500扩增仪，搭配新波生产的乙肝核酸检测试剂[9]，对该系统检测能力与罗氏COBAS系统进行了比较研究，探讨国产核酸检测系统的检测性能，现报道如下。

1  材料与方法

1.1  检测系统

选择罗氏检测系统为参比系统，新波系统为考核系统，具体见表1。

表1   考核系统与参比系统仪器及试剂列表

1.2  检测方法

采用两套系统，分别对相同乙肝核酸阳性样本进行测试，比较新波检测系统与罗氏检测系统的一致性，并对定量测值进行线性回归及相关性分析，共检测血浆阳性样本193例，血清样本121例。

1.3  统计方法

利用Excel 2010进行数据汇总，并采用SAS 9.3统计学软件进行分析。计数资料以[n（%）]表示，一致性比较采用Kappa检验。P<0.05为差异有统计学意义

2  结果

2.1  新波检测系统及罗氏检测系统的符合率及一致性比较

对193例血浆样本及121例血清样本检测双方检测结果进行统计分析，符合率及Kappa一致性检验结果见表2、表3;新波检测系统与罗氏检测系统的阳性符合率在99%以上，总符合率在97%以上，说明两个系统检测一致性较高，少数不符结果均为低浓度样本，双方均有一定的检出概率[10]。Kappa一致性分析结果见表4（P<0.001），表明两方试剂检测结果一致性良好。

表3   新波系统与罗氏系统kappa检验

2.2  新波检测系统及罗氏检测系统线性回归及相关性分析

对检测为的血浆和血清样本中有明确定值结果的样本进行线性分析，以罗氏系统的测定数值取log10为横坐标，新波系统的测定数值取log10为纵坐标，使用SAS 9.3统计学软件对上述样本检测数据进行线性回归及相关性分析，分析结果如下所示。

图1为两方系统对血浆样本测值散点图直线回归分析，表4为回归系数及相关系数分析结果，线性回归系数为0.9490，决定系数r2为0.9568（P<0.0001），回归方程有统计学意义，两方系统测值之间有直线关系。采用Spearman相关分析方法，原始数据取以10为底的对数后进行相关性分析，相关系数为0.9622（P<0.0001），说明两组数据具有相关关系，且相关程度较高。

图1   考核系统（新波）与参比系统（罗氏）血浆样本测值线性回归分析（n=153）

表4   双方系统检测血浆样本线性回归方程系数结果

图2为两方系统对血清样本测值散点图直线回归分析，表5为回归系数及相关系数分析结果，线性回归系数为0.9620，决定系数r2为0.9601（P<0.0001），回归方程有统计学意义，两方系统测值之间有直线关系。采用Spearman相关分析方法，原始数据取以10为底的对数后进行相关性分析，相关系数为 0.9666（P<0.0001），说明两组数据具有相关关系，且相关程度较高。

图2  考核系统（新波）与参比系统（罗氏）血清样本测值线性回归分析（n=94）

3  讨论

一般对于乙型肝炎患者治疗视为有效的指标包括HBV DNA复制受到抑制、丙氨酸氨基转移酶下降到正常值范围、血清HBeAg转换成阴性等[11]。因此，血清HBV DNA的监测对抗病毒治疗方案的疗效判断有重要的意义。随着抗病毒治疗时间的延长，HBV DNA均呈逐渐下降的趋势，但由于检测灵敏度的缺陷，对于500 IU/mL以下的病毒核酸难以准确定量，特别是对于HBeAg阴性患者，应该选择高敏方法检测HBVDNA水平，灵敏度低至20 IU/mL，可更好地观察抗病毒疗效，优化治疗方案[12]。

综上所述，两种全自动核酸检测系统在检测乙肝核酸时具有较高的一致性和相关性。与市场普遍认可的罗氏COBAS检测系统相比，苏州新波生产的全自动核酸检测系统的总符合率达97%以上，阳性符合率可达99%以上;对阳性样本进行线性回归分析，两方系统测值之间有直线关系，同时相关性分析显示两方系统检测结果相关程度较高。结果表明苏州新波生产的全自动核酸检测系统对血清及血浆样本均具有优秀的乙肝核酸定量检测能力，说明国产乙肝核酸检测系统不仅可实现全自动化操作，且检测性能可达到国际同等水平。

[参考文献]

[1]  Dienstag JL， Hepatitis B virus infection[J]. N Engl J Med， 2008， 359（14）： 1486-1500.

[2]  European Association for the Study of the Liver.EASL clinical practice guidelines： Management of chronic hepatitis B virus infection[J]. J Hepatol， 2012， 57（1）：167-185.

[3]  中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2015更新版）[J].中华肝脏病杂志，2015，23（12）：888-905.

[4]  李忠斌，邵清，李梵，等.拉米夫定和阿德福韋酯初始联合与替诺福韦酯单药治疗慢性乙型肝炎48周疗效和安全性比较[J].医学研究杂志，2016，45（4）：105-108.

[5]  Han MS，Park Y，Nah H，et al.Comparison of the QIAGEN artus HBV QS-RGQ assay with the roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV assay for quantifying viral DNA in sera of chronic hepatitis B patients[J].Ann Lab Med，2017，37（3）：248-253.

[6]  Santos AP，Levi JE，Lemos MF，et al.An in-house real-time polymerase  chain reaction：standardisation and comparison with the Cobas Amplicor HBV monitor and Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV tests for the quantification of  hepatitis B virus DNA[J].Memnst Oswaldo Cruz，2016，111（2）：134-140.

[7]  姚娜，潘彤，赵倩，等，Procleidx TIGRIS System检测方法学性能验证评价[J].继续医学教育，2019，33（3）：124-125.

[8]  裴宝芹，夏兵.核酸检测与ELISA检测对HCV感染者筛查分析[J].中国冶金工业医学杂志， 2017，34（6）：742.

[9]  杨忠思，马维娟，冯秋霞.两种核酸检测模式检测结果分析[J].中国输血杂志， 2016，29（1）：83-85.

[10]  曲乃方，张璞，樊美香，等.乙肝感染肝衰竭患者骨髓干细胞的初步研究与应用[J].中外医学研究，2010，8（25）：30.

[11]  余学高，邓间开，何小洪，等.HBV DNA高敏检测试剂盒的性能验证和临床应用评价[J].分子诊断与治疗杂志， 2019，11（2）：111-116.

[12]  聂蒲芳.核酸与ELISA检测联合应用于血液筛查的效果[J].临床医学研究与实践，2018，3（25）：103-104，107.

（收稿日期：2019-11-05）