余德基 周凤英 陈思颖

【摘要】 目的 探讨利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对血流感染病原菌快速鉴定的准确性。方法 选取356例（356份）患者的血液样本作为研究对象， 分别使用MALDI-TOF MS与 Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统（Vitek 2 Compact） 对血流感染病原菌进行检测， 并以Vitek 2 Compact鉴定结果为金标准， 观察MALDI-TOF MS的鉴定符合率。结果 在阳性血培养瓶中， 革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群， 种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌， 种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母， 种水平鉴定符合率为80.00%（24/30）， 另检出马尔尼菲青霉菌9株， 因不做生化鉴定未列入对比。结论 利用MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定具有较高准确率， 且检测简便、检测时间短。

【关键词】 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱;血流感染病原菌;快速鉴定

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.086

相关临床研究显示， 近年来随着广谱抗生素不合理应用与侵入性操作的不断增加， 血流感染的发病率及病死率逐年上升， 进而对其造成较为严重的损伤[1]， 甚至导致患者死亡等不良后果[2]， 因此为有效的消除病原菌， 提升患者的健康水平， 则需要对血流感染病原菌进行有效的鉴定， 以便能够采取针对性的措施进行治疗[3]。随着临床检测技术的不断发展， 目前临床中多使用MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速

鉴定[4]。本研究探讨MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定的准确性。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 将本院2018年7月～2019年6月收集的356例（356份）患者的血液样本作为研究对象， 其中男236例， 女132例;平均年龄（58.1±4.9）岁。对所有样本均进行单菌株感染血培养， 结果显示， 细菌培养阳性317份（革兰阴性224份、革兰阳性93份）， 真菌培养阳性39份。

1. 2 方法

1. 2. 1 试剂与仪器 甲酸、乙腈、Bact/ALERT? 3D 全自动血培养仪、VITEKMS质谱仪、基质液、靶板、VITEK 2 COMPACT及其配套的鉴定板条、血琼脂平板、中国蓝平板、巧克力平板、沙保氏平板、念珠菌显色平板。

1. 2. 2 检测

1. 2. 2. 1 涂片染色镜检 使用革兰染色镜对阳性报警的株菌进行检测， 以便能够初步对待测菌的种类进行确定， 并排除假阳性的干扰。

1. 2. 2. 2 菌种常规鉴定 若革兰染色镜检结果为细菌， 则采取接种血琼脂平板、中国蓝平板与巧克力平板;若镜检结果为真菌， 则采取接种血琼脂平板、中国蓝平板与念珠菌显色平板， 并对其进行18～24 h的孵育， 之后使用 VITEK 2 COMPACT予以鉴定， 并记录鉴定结果。

1. 2. 2. 3 菌种快速鉴定 与上述接种操作一样， 区别在于只对其进行4 h的孵育， 之后用培养的菌膜制备质谱靶板行质谱鉴定。

1. 2. 2. 4 MALDI-TOF MS的鉴定流程 点样上清液

1 L至48孔的靶板， 在室温下进行干燥， 之后添加配套基质液， 同时点样大肠埃希菌ATCC8739于质控点， 并立即加入配套基质液， 待全部干燥后使用MALDI-TOF MS进行检测， 若鉴定结果位于60.0%～99.9%说明鉴定结果可靠， 其评分标准如下：绿色表示唯一的鉴定结果， 可信率为60.0%～99.9%;黄色表示低分辨率有2～4个鉴定结果， 可信率>60%， 但仍然需要进行进一步的鉴定;红色表示无法鉴定， 可信率≤60%。

1. 3 观察指标及判定标准 分析单菌株血流细菌感染鉴定结果、单菌株血流真菌感染鉴定结果。种水平鉴定符合率=种水平鉴定正确率+种水平鉴定错误率。

2 结果

2. 1 单菌株血流细菌感染鉴定结果 在阳性血培养瓶中， 革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群， 种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌， 种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。见表1。

2. 2 单菌株血流真菌感染鑒定结果 真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母， 种水平鉴定符合率为80.00%（24/30）， 另检出马尔尼菲青霉菌9株， 因不做生化鉴定未列入对比。见表2。

3 讨论

血流感染将会对机体健康造成严重的不良影响， 只有明确感染病原菌的类型才可予以及时有效的针对性治疗[5， 6]。

随着检测技术的不断发展提升， 目前临床中多使用MALDI-TOF MS进行检测， 该检测技术的主要原理在于通过对比已知菌种建立数据库， 将检测获得微生物的蛋白质图谱与数据库中的微生物图谱进行比较， 以便能够获得良好的鉴定结果[7]。通过临床实践可知， 该种检测方式具有如下优势：①具有简便的操作方式， 并且无需花费过多的检测费用;②具有较为快速的检测能力， 因而无需等待较长时间。

本研究结果显示， 通过使用短期培养法联合质谱的检测结果显示， 在阳性血培养瓶中， 革兰阴性菌主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌复合菌、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌群， 种水平鉴定符合率为94.64%（212/224）;革兰阳性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、肺炎链球菌， 种水平鉴定符合率为94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母、清酒假丝酵母、光滑假丝酵母、新型隐球菌、克柔假丝酵母、葡萄牙假丝酵母， 种水平鉴定符合率为80.00%（24/30）。与Vitek 2 Compact常规培养标本检测结果相比具有较高的准确率， 因而能够在较大程度上满足临床检测需求。

综上所述， MALDI-TOF MS对血流感染病原菌快速鉴定具有较高准确率， 并且具有检测简便、时间短等优势， 可作为临床中首选的检测方式。但临床检测人员仍然需要加强对该种检测方式的研究， 以便能够获得更加准确的检测结果， 从而为患者提供更好的服务。

参考文献

[1] 张航烽， 黄文芳. 利用MALDI-TOFMS对血流感染病原菌快速鉴定的研究进展. 中国微生态学杂志， 2013， 25（2）：242-246.

[2] 方毅， 张景皓， 赵虎. MALDI-TOFMS直接鉴定血培养阳性标本中的病原菌. 老年医学与保健， 2017， 23（6）：523-527.

[3] 周道红， 黎敏， 鲁卫平. 利用MALDI-TOFMS快速鉴定经固体培养基短时培养的阳性血培养物中的病原菌. 国际检验医学杂志， 2018， 39（22）：2746-2749.

[4] 盛微翔， 吳亮， 史伟峰， 等. 分离胶促凝管联合MALDI-TOFMS快速检测血培养阳性瓶中细菌的探讨. 现代诊断与治疗， 2017， 28（22）：4117-4119.

[5] 陈峰， 李媛睿， 皇甫昱婵， 等. 分离胶促凝管联合MALDI-TOFMS直接检测血培养阳性细菌. 检验医学， 2015， 30（2）：113-121.

[6] 张蓓， 赵丽娜， 韩清珍， 等. 皂素处理联合MALDI-TOFMS直接鉴定血培养阳性病原菌. 检验医学与临床， 2018， 15（17）：

2525-2528.

[7] 周志美， 张磊， 吴尚为. 对血流感染实验室诊断的最新认识. 中华医院感染学杂志， 2013， 23（7）：1735-1737.

[收稿日期：2019-07-25]