郭普宇，刘迪，霍婉玲，李婷婷，崔万林，范雨婷，薛春梅，2*

(1. 佳木斯大学生命科学学院，黑龙江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大学应用微生物研究所，黑龙江 佳木斯 154007)

紫丁香蘑(Lepistanuda)，又称紫晶蘑、裸口蘑，属伞菌目口蘑科食用真菌[1-3]，营养丰富，有药用。紫丁香蘑对肿瘤和病菌有抑制作用[4-6]。本试验对不同浓度赖氨酸-PDA培养基中紫丁香蘑菌丝的生长状况进行对比，筛选出最适合紫丁香蘑菌丝生长的赖氨酸浓度。探究赖氨酸对紫丁香蘑菌丝生长的影响，为紫丁香蘑菌丝生长提供一个简单有效的方法，促进氨基酸在紫丁香蘑栽培上的应用。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试紫丁香蘑现保存于佳木斯大学生命科学学院微生物实验室。为了进行本次筛选试验，实验前对紫丁香蘑母种进行活化培养，母种培养基采用PDA培养基，无菌操作接种后，经过7 d的活化培养后筛选出最适合紫丁香蘑菌丝生长的赖氨酸浓度。

1.2 供试培养基及制备

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：马铃薯200 g、琼脂10 g、葡萄糖10 g、加水定容至1000 mL，pH自然。

将马铃薯洗净去皮，切成小块，称取200 g。加水煮烂，用8层纱布过滤。取滤液，加入10 g琼脂，不断地加热搅拌混匀，使琼脂溶解完全后过滤到1000 mL烧杯中。再加入10 g葡萄糖，搅拌均匀至葡萄糖完全溶解，定容至1000 mL。分别装入7个锥形瓶中，每个锥形瓶装100 mL，用封口膜和牛皮纸包扎完毕。将上述盛有培养基的锥形瓶放于高压蒸汽灭菌锅内。在120 ℃恒温高压(0.098～0.118 MPa)灭菌30 min，备用。

赖氨酸-PDA培养基：赖氨酸固体0.4 g、无菌水40 mL。

用电子天平称取0.4 g赖氨酸固体加入40 mL无菌水中，摇匀至无沉淀出现，制备成浓度为10 mg/mL赖氨酸母液，用注射器吸取赖氨酸母液，将注射器的针头取下并换上细菌过滤器，匀速按压注射器，过滤出无菌的赖氨酸溶液滴入提前备好的空锥形瓶中，放入4 ℃冰箱中备用。分别吸取已经配置好的赖氨酸母液0、150、300、450、600、750、900 μL加入到100 mL的PDA培养基中，摇晃使培养基中的营养物质混合均匀，分别制成浓度为0、30、60、90、120、150、180 μg/mL的赖氨酸-PDA培养基。

1.3 培养方法

1.3.1 接种。用解剖刀切取紫丁香蘑生长旺盛的组织块，约1 cm左右，放入不同浓度的赖氨酸-PDA培养基中，封口膜封好，并用记号笔做好标注。每个变量设置3个重复，放于恒温、恒湿相同条件下进行培养观察。记录菌丝生长过程及状态。以上均以未加入赖氨酸母液的PDA培养基作为空白对照。

1.3.2 培养条件。放入25 ℃培养箱中培养。

1.3.3 观测方法。48 h后每天定时、定点标记并测量1次菌丝生长量、菌丝生长势及密度。分别记录上述培养基中菌丝生长情况并进行对比观察。

2 结果与分析

经过7 d的培养观测，在上述培养基中紫丁香蘑菌丝长度，如表1。

表1 第7天紫丁香蘑菌丝在不同赖氨酸培养基中的菌丝长度

通过3组实验数据我们可以看出，在赖氨酸浓度为30 μg/mL的培养基中，紫丁香蘑的菌丝体平均长度最长，其次是赖氨酸浓度90 μg/mL的培养基，而没有赖氨酸的对照组最短。

表2 不同浓度赖氨酸-PDA培养基中菌丝生长状态对比

我们又对比了紫丁香蘑的菌丝体的生长速度、菌丝浓度、菌丝长势与菌丝颜色等多项指标，赖氨酸浓度为30 μg/mL和90 μg/mL的2种培养基，其菌丝的生长速度较快，菌丝浓度较密，菌丝边缘平整，菌丝体白色无异常。

3 结论

通过上述试验结果表明，最适合紫丁香蘑菌丝生长的赖氨酸浓度为30 μg/mL或90 μg/mL的培养基，菌丝长势最好、菌丝最浓密、菌丝粗壮、菌丝边缘最整齐。

本试验对于紫丁香蘑母种的培养和菌种的保存具有重要的意义，同时对紫丁香蘑母种培养基优化和栽培提供参考。