袁 勇 吕传柱 -

(1. 海南医学院，海南 海口 570102；2. 海南医学院急救与创伤研究教育部重点实验室，海南 海口 570102；3. 海南医学院第二附属医院海南省急危重症临床医学研究中心，海南 海口 570102)

肝纤维化是一种慢性渐进性病理过程，多发于肝硬化、肝癌等多种肝病中。导致肝纤维化的原因有很多，如酒精性肝损伤、活动性病毒性肝炎、脂肪肝、药物性肝损伤等，最终导致弥漫性胶原或非胶原物质在肝内大量沉积，其核心病理改变是肝内发现肝星状细胞(Hepaticstellate cells，HSCs)激活并大量增殖，成肌纤维细胞样细胞是病理改变的最后呈现形式[1-2]。在HSCs激活并增殖的过程中，各种致纤维化介质如转化生长因子β1(transfo-rminggrowth fatorbata，TGF-β1)会大量分泌，大量研究[3-6]表明，转化生长因子β1是造成肝纤维化进展的最主要细胞因子，能使肝星状细胞激活和大量分泌胶原或非胶原物质，与肝纤维化的进展有强关联性。而IL-1β、IL-6、TNF-α是肝脏炎症反应的关键炎症因子，常用于评价肝纤维化中因炎症造成肝损伤程度[7]。

中医认为肝纤维化程度和肝脏产生大量瘀血密切相关，抗肝纤维化治疗过程中可以选用活血化瘀类中药[8]。鸡矢藤是著名南药之一，广泛生长于琼海，具有活血止痛的功效[9-11]。已有研究[12]发现，鸡矢藤可以抑制TGF-β1mRNA的表达，减缓肝纤维化的进程，但其表达的具体传导通路还有待进一步探究。试验拟对鸡矢藤干预大鼠肝纤维化模型的TGF-β1/Smad通路进行探究，以期为筛选有效抗肝纤维化中药研究提供借鉴案例。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与药物

鸡矢藤颗粒剂：广州一方药业公司；

Trizol试剂：纯度99%，美国英杰生命技术有限公司；

白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒：武汉华美生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物序列 引物TGF-β1序列和内参照引物序列参照参考文献[12]。引物Smad3序列：Forward 5’CCAGGCCTCTTGATGGTCGT3’；Reverse 5’GGCGGAAGTTCTGTTAGAAT3’。引物Smad7序列：Forward 5’CTTTCGCTTGGGTCAACTCTC3’；Reverse 5’TGGGATCACGCATATATTTCC3’。

1.2.2 动物分组、造模及给药 参照文献[12]。

1.2.3 Smad3和Smad7 mRNA表达检测 荧光实时定量法[12]。

1.2.4 TGF-β1检测 参照文献[12]。

1.2.5 血清指标(IL-1β、IL-6、TNF-α)检测 ELISA法[13]。

1.3 数据处理

2 结果及分析

2.1 各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平

如表1所示，C组与A组差异极显著(P<0.01)，与B组差异显著(P<0.05)。说明鸡矢藤对肝纤维化有理想疗效。

表1各组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α的水平†

Table 1 Comparison of IL-1β,IL-6 and TNF-alevels in rats in each group(n=10)

ng/mL

† *表示A组的各项指标与B组和C组有极显著差异(P<0.01)；△表示B组的各项指标与C组有显著差异(P<0.05)。

2.2 各组TGF-β1、Smad3和Smad7的mRNA的表达水平

如表2所示，对于TGF-β1mRNA的表达，C组与A组差异显著(t=2.245，P<0.05)，与B组差异极显著(t=1.142，P<0.01)；对于Smad3 mRNA的表达，C组与A组差异显著(t=2.149，P<0.05)，与B组差异极显著(t=1.206，P<0.01)；对于Smad7 mRNA的表达，C组与A组差异显著(t=2.201，P<0.05)，与B组差异极显著(t=1.007，P<0.01)。说明鸡矢藤可以明显抑制TGF-β1mRNA和Smad3 mRNA的表达，促进Smad7 mRNA的表达。

表2各组TGF-β1、Smad3和Smad7的mRNA的表达水平†

Table 2 Comparison of mRNA expression values of TGF-β1,Smad3 and Smad7 in each group(n=10)

组别TGF-β1/GAPDHSmad3/GAPDHSmad7/GAPDHA0.896 2±0.112 4*0.905 4±0.105 6**2.927 6±0.190 7***B2.875 6±0.204 42.875 6±0.204 43.458 4±0.114 5C1.156 8±0.105 4△1.025 0±0.004 6△△4.689 1±0.203 7△△△

† *表示B组的TGF-β1指标与C组比有显著差异(t=1.142，P<0.01)，**表示B组的Smad3指标与C组比有显著差异(t=1.206，P<0.01)，***表示B组的TGF-β1指标与C组比有显著差异(t=1.007，P<0.01)；△表示C组的TGF-β1指标与A组比有差异(t=2.245，P<0.05)，△△表示C组的Smad3指标与A组比有差异(t=2.149，P<0.05)，△△△表示B组的Smad3指标与A组比有差异(t=2.201，P<0.05)。

3 结论

鸡矢藤可以疏肝和胃，具有一定的活血止痛功效，在临床中可以起到降酶保肝护肝之效。Smad3 mRNA-(TGF-β1mRNA)-Smad7 mRNA的轴性作用通道在抗肝纤维化的作用机制中发挥着作用。当肝内弥漫性细胞外基质(胶原或非胶原)过度沉积，HSCs激活并增殖的过程中，各种致纤维化介质如转化生长因子β1会大量分泌，由此会促进肝纤维化进一步进展，具体表现在Smad3 mRNA的表达会随之增加。采用鸡矢藤抗肝纤维化的干预治疗后，各种致纤维化介质如转化生长因子β1会分泌减少，由此会阻断肝纤维化进一步进展，具体表现在Smad7 mRNA的表达会随之增加。至于是否存在反馈机制，有待进一步研究。