兰慧 阳敬

摘 要：目的：本文以仙鹤草为主要原材料进行回流提取，对其主要所含的总黄酮含量测定。方法：采取乙醇回流提取，对仙鹤草中的总黄酮进行提取，然后配成溶液在紫外分光光度计下测量其吸光度。本为重点以乙醇的浓度对仙鹤草中总黄酮提取率的影响进行了探索，单因素实验考察了醇浓度、料液比、提取时间以及提取次数四因素对仙鹤草中总黄酮提取率的影响。结果：仙鹤草中总黄酮的最佳单因素提取工艺条件为分别是乙醇浓度为60%、料液比为1：20、提取时间为2h、提取次数为2次，在此条件下仙鹤草中总黄酮的提取率为20.99%。结论：采用上述提取工艺，既可以节省提取工艺的成本，又可以提高提取工艺的效率，并能最终为粗仙鹤草的综合利用提供社会经济效益的新用途。

关键词：仙鹤草；总黄酮；回流提取；回流法；含量

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）15-0204-03

0 引言

仙鹤草为蔷薇科龙芽草属植物龙芽草Agrimonia pilosa Ledeb.的全草[1]。仙鹤草全草入药，中医临床主要用于止血、降糖、抗肿瘤、泌尿道、呼吸道、消化道等疾病的治疗[2]。研究发现，仙鹤草中含有槲皮素、山奈酚、木犀草素等多种黄酮类化合物[3]，黄酮类化合物有降脂、抗氧化、降糖等生物活性[4]，日益成为医药工作者的研究热点。

本文主要对仙鹤草中总黄酮的提取工艺进行了研究，先采用乙醇回流法提取出仙鶴草中的总黄酮，再以芦丁为对照品对仙鹤草黄酮含量进行测定，考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数四单因素对仙鹤草中总黄酮提取率的影响；得出仙鹤草中黄酮提取的最佳工艺条件，为开发利用仙鹤草资源提供理论依据。

1 实验材料与仪器

仙鹤草，来自于河北同仁堂；芦丁，生化试剂，中国医药（集团）上海化学试剂公司；无水乙醇，NaNO2，Al （NO3）3，NaOH，甲醇，丙酮均为分析纯；HS-3120型超声波清洗器， 上海楚定分析仪器有限公司；TU-1901双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司生产；分析天平：FA1004型；调温电热套：KDM-6020型。

2 仙鹤草中黄酮的提取方法

2.1 仙鹤草的预处理

将干燥的仙鹤草放入研钵中碾碎、过筛，得到仙鹤草渣与粉末分别放入烧杯中备用。

2.2 仙鹤草中黄酮的提取

（1）工艺流程：取干燥仙鹤草若干→研磨、过筛→精确称取粉末1.000g→乙醇回流→过滤→弃去滤渣→下清液冷却→定容50ml容量瓶中。（2）操作步骤：准确称取研磨后干燥的仙鹤草1.000g于50ml烧瓶中加入设定条件下浓度的乙醇组建回流装置在设定条件时间下进行回流，待回流液冷却后进行过滤，滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液定容至50ml容量瓶。

3 仙鹤草中总黄酮含量的测定

3.1 样品溶液的制备

准确称取研磨后干燥的仙鹤草1.000g于50ml烧瓶中，加入设定条件下浓度的乙醇组建回流装置在设定条件时间下进行回流，待回流液冷却后进行过滤，滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液合并转移至50ml容量瓶中，乙醇定容，即得样品溶液。

3.2 标准溶液的制备

准确称取干燥恒重的芦丁6mg于精确称取干燥恒重的芦丁（黄酮标准对照品）置于10ml容量瓶中，加甲醇适量溶解稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置于25ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得芦丁溶液，浓度为0.24mg/ml。

3.3 标准曲线的制备

精确吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 、6.0、7.0mL 芦丁标准品溶液（0.24mg/ml）分别置于25mL容量瓶中，分别加入水使为6mL，各精确加入5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，再分别加入10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加1mol/ml氢氧化钠溶液10mL，摇匀，分别用水稀释至刻度，摇匀，室温放置15min，置比色皿中，用紫外分光光度计在510nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，仙鹤草中总黄酮浓度（C）为横坐标做标准曲线。芦丁溶液的浓度与吸光度的关系见表1，芦丁溶液标准曲线图1所示。

3.4 仙鹤草中黄酮含量的测定

用移液管准确吸取样品溶液1ml，按照2.3.3项方法操作，测定吸光度，如果吸光度值在线性范围内，从而由该线性回归方程式可以准确的计算出仙鹤草中黄酮的含量（以芦丁计）：

总黄酮得率（%）=

4 仙鹤草中总黄酮提取工艺条件的研究

实验选择乙醇浓度、料液比、提取时间以及提取次数作为单因素实验，进行仙鹤草中总黄酮提取率影响因子的分析。

（1）乙醇浓度对仙鹤草中总黄酮提取的影响。假设提取时间0.5h、料液比1：20、提取次数1次条件下提取率最佳，分别在乙醇浓度为60%、70%、80%、90%下，进行提取，滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液定容至50ml容量瓶。

（2）料液比对仙鹤草中总黄酮提取的影响。假设提取时间0.5h、乙醇浓度为60%、提取次数1次条件下提取率最佳，分别在料液比1：10、1：15、1：20、1：25条件下，进行仙鹤草中总黄酮的提取；滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液定容至50ml容量瓶。

（3）提取时间对仙鹤草中总黄酮提取的影响。假设乙醇浓度为60%、提取次数1次，料液比1：20的条件下提取率最佳，分别在回流提取时间为0.5h、1h、1.5h、2h、进行仙鹤草中总黄酮的提取；滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液定容至50ml容量瓶。

（4）提取次数对仙鹤草中总黄酮提取的影响。假设提取时间1.5h、料液比1：20、乙醇浓度为60%的条件下提取率最佳，分别在提取次数为1次、2次、3次、4次条件下，进行仙鹤草中总黄酮的提取；滤渣用少量乙醇洗涤多次，洗液同样进行过滤，滤液定容至50ml容量瓶。

5 结果与分析

5.1 考察乙醇浓度对仙鹤草中总黄酮提取率的影响

不同乙醇浓度条件下仙鹤草中总黄酮提取率见表2，乙醇浓度对仙鹤草中总黄酮提取率的影响见图2。

本文通过讨论了乙醇浓度對仙鹤草中总黄酮提取率的影响，由图2可知，乙醇浓度对总黄酮的提取率较为显著，随浓度值的升高，黄酮的提取率呈现下降的趋势。

5.2 考察料液比对仙鹤草中总黄酮提取率的影响

不同料液比条件下仙鹤草中总黄酮提取率见表3，料液比对仙鹤草中黄酮提取率的影响见图3。

由图3可知，在料液比1：10-1：20之间，随着溶液的增加黄酮的提取率迅速增加。在1：20-1：25之间黄酮的提取率几乎保持不变。故对仙鹤草中总黄酮提取时最适料液比应为1：20。

5.3 考察提取时间对仙鹤草中总黄酮提取率的影响

不同提取时间条件下仙鹤草中总黄酮提取率见表4，提取时间对仙鹤草中总黄酮提取率的影响见图4。

由图4可知，在0.5h-1h水平，随着时间的延长，黄酮的提取率迅速上升，但从1h-1.5h，黄酮的提取率缓慢增加但总体变化不大，最后在1.5h-2h之间。黄酮的提取率几乎不变；由此可见仙鹤草中总黄酮最适宜提取时间为2h。

5.4 考察提取次数对仙鹤草中总黄酮提取率的影响

不同提取次数条件下仙鹤草中总黄酮提取率见表5，提取次数对仙鹤草中总黄酮提取率的影响见图5。

本文重点探讨了提取次数对黄酮提取率的影响，由图5可知，提取次数对黄酮的提取率影响较为显著，随提取次数的增加，黄酮的提取率累积呈现增加趋势，在1-2次之间增加迅速；但在2-4次之间黄酮得率几乎保持水平，得出仙鹤草中总黄酮的提取最佳次数为2次。

5.5 单因素考察仙鹤草中总黄酮得率最佳组合

经上述仙鹤草中总黄酮的提取，随机取总黄酮提取率在10%左右组的仙鹤草，进行仙鹤草中总黄酮含量测定实验，精密称取1.000g，其余步骤同标准曲线的绘制。优化单因素下仙鹤草中总黄酮提取率如表6。

6 结语

通过以上分析，我们得到的主要结论为：考查单因素实验，可知乙醇的浓度为60%时，仙鹤草中黄酮的提取率较高；所以仙鹤草中总黄酮提取率最佳乙醇浓度条件为60%；由实验数据与分析得知，料液比为1：20时，仙鹤草中总黄酮的提取率最佳，所以仙鹤草中总黄酮提取率最佳料液比条件为1：20；提取时间为1.5h时，仙鹤草中总黄酮的提取率最高；所以仙鹤草中总黄酮提取率最佳提取时间1.5h；当提取次数为4次时，仙鹤草中黄酮的提取率最高；但从实际操作及各类因素考虑，实验中进行2次提取最佳，所以仙鹤草中总黄酮提取率最佳提取次数条件为2次。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2015年版一部[S].北京：化学工业出版社，2015.

[2] 洪阁，戴永红，刘培勋，等.仙鹤草化学成分与药理研究进展[J].药学服务与研究，2008，8（5）：262-266.

[3] 张健泓，陈优生.仙鹤草降糖活性研究[J].中药材，2009，23（10）：17-19.

[4] 裴月湖，李铣，朱延儒.仙鹤草根芽中新鞣花酸甙的结构研究[J].药学学报，2009，25（10）：798-800.