舒柯 申璀 廖敏

【摘要】目的：建立以绿原酸为内参物，测定降脂宁颗粒中君药山楂所含的3个有机酸类成分（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸）含量的一测多评（QAMS）方法。方法：采用ThermoUltimate3000液相色谱仪，以WatersX-bridgeC18色谱柱，流动相乙腈-1%磷酸溶液梯度洗脱，检测波长326nm，体积流量1.0mL/min，柱温30℃进行测定。以绿原酸作为内参物，建立制剂中其他2种指标性成分的相对校正因子，从而计算各待测成分的量，并与外标法的测定结果进行比较，对该方法进行可行性验证。结果：在各待测成分的线性范围内，降脂宁颗粒中的绿原酸与新绿原酸、隐绿原酸2种有效成分的校正因子重现性良好，分别为1.07、0.99;采用一测多评法测定有机酸类成分含量与外标法的含量测定结果无显著性差异。结论：以绿原酸为内参物，建立的一测多评结果准确可靠，可用于降脂宁颗粒多指标成分的质量控制。

【关键词】一测多评;降脂宁颗粒;相对校正因子;新绿原酸;绿原酸;隐绿原酸

【中图分类号】R284【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2019）8-0049-05

降脂宁颗粒最早收载于吉林省药品标准（1986年版），原名“血脂宁冲剂”。处方由山楂（去核）、制何首乌、决明子、荷叶4味药材组成，具有降血脂、软化血管的作用。从国家食品药品监督管理总局数据库中查询到，目前其执行标准共11份，尚未对方中君药山楂进行含量控制，而山楂质量的优劣直接影响降脂宁颗粒的药效。山楂的化学成分主要包括黄酮及黄酮苷类、有机酸类、黄烷类及其聚合物等，有机酸类是山楂健胃消食的有效成分[1-7]。研究选取山楂中的有机酸类成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸作为指标性成分进行含量测定。

复方中药制剂中药效的发挥是多组分共同作用的结果，其成分具有多样性、复杂性特点。因此，中药制剂较单味药材更需要强调其多成分、多靶点特征。为了更好的控制降脂宁颗粒中山楂的含量，实验采用多指标质量控制的“一测多评”方法首次对降脂宁颗粒山楂含量进行全面的控制，通过对一个对照品易得成分的测定，实现多个成分的同步监控，本文以绿原酸为内参物，采用高效液相色谱法测3个有机酸类成分含量，改善目前中检院尚无新绿原酸、隐绿原酸等对照品供应情况，尤其是完善了现行质量标准中无君药山楂含量控制问题[8-15]。

1仪器与材料

1.1仪器Ultimate3000液相色谱仪及配套工作站（PDA检测器，赛默飞世尔科技有限公司）;色谱柱：依利特ODS2C18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;AgilentZORBAXSBC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;WatersX-bridgeC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;百万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2材料新绿原酸（批号：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：93.37%）、绿原酸（批号：110753-201415，中国食品药品检定研究院，含量：96.2%）、隐绿原酸（批号：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：99.07%）;降脂宁颗粒（生产企业：A公司，批号：a-1，a-2，a-3，a-4，a-5，a-6，a-7，a-8，a-9，a-10）。色谱乙腈（美国TEDIA，LOT17080656）、甲醇（国药集团化学试剂有限公司，10014118），超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%磷酸为流动相B，按下表1规定进行梯度洗脱;流速为1.0mL/min;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸检测波长为326nm;理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于10000。图谱见图1。

2.2混合对照品溶液的制备称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸对照品适量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL分别含35μg、45μg、34μg溶液，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量上述对照品储备液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品混合溶液。

2.3供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥瓶中，精密加入50%甲醇100mL，称定重量，超声（功率250w，频率100kHz）处理45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性样品的制备取不含山楂药材的样品，按照降脂宁颗粒配方（删除山楂药材），模拟工艺制备阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制得阴性样品溶液。

2.5方法考察

2.5.1线性关系考察精密吸取“2.2”项下对照品溶液，进样量分别为2、3、5、10、15μL分别注入液相色谱仪，以峰面积A对质量数μg进行线性回归计算，得到绿原酸的线性回归方程为：y=32060x+69.71，r=0.9996，线性范围0.0090μg～0.0672μg;隐绿原酸线性回归方程为：y=2335x+94.32，r=0.9993，线性范围0.0066μg～0.03867μg;新绿原酸线性回归方程为：y=3455x+45.28，r=0.9991，线性范围0.0077～0.0525μg;结果表明3种成分线性范围内关系良好。

2.5.2精密度试验精密量取“2.2”项下对照品溶液的制备项下的混合对照品溶液10μL，连续进样6次，记录色谱图，其RSD值分别为新绿原酸1.7%、绿原酸0.6%、隱绿原酸1.5%，表明仪器精密度良好。

2.5.3重复性试验取同一批（批号：a-1）的样品，按“2.1”项下含量测定方法，重复测定6次，记录色谱图，以绿原酸为S峰，其余2个成分的实际保留时间均在以S峰与相对保留时间所计算的时间范围内，故可通过校正因子计算出新绿原酸、隐绿原酸的含量，其RSD值分别为1.6%、1.0%、2.4%，表明方法重复性良好。结果见表2。