顾鑫　周晓莹　赵玉龙　张旭东　李杰颖

摘要：香花槐对城市不良环境有抗性，抗病力强，是造林的优良树种。分别对香花槐外植体灭菌时间、外植体初代培养、外植体继代培养进行初步研究，结果表明：利用0.1%升汞进行灭菌，在3.5～4.0 min最适宜；最佳初代培养的培养基为A6：MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+琼脂6 g；最佳继代培养的培养基为 MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+琼脂6 g。

关键词：香花槐；组织培养；愈伤组织；激素；不定芽

中图分类号：Q943 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2019）02-0025-03

香花槐（Robinia pseudoacacia CV.Idaho）为豆科刺槐属刺槐变种，原产于西班牙、朝鲜，是近年来我国引进的美化城市园林的理想珍稀树种，具有保持水土、防风固沙、改善生态环境的作用。香花槐为落叶乔木，株高10～12 m，树干为褐色至灰褐色。叶互生，7～19片叶组成羽状复叶，叶椭圆形至卵状长圆形，长3～6 cm，比刺槐叶大。叶片美观对称，深绿色有光泽，青翠碧绿。密生成总状花序，作下垂状。花被红色，有浓郁的芳香气味，可同时盛开小红花200～500 朵，花期长。无荚果，不结种子。耐干旱瘠薄，对土壤要求不严，酸性土、中性土及轻碱地均能生长。主、侧根发达，萌芽性强，生长快，当年可达2 m，翌年达3～4 m，开始开花。性耐寒，能抵抗零下25～28 ℃低温，对城市不良环境有抗性，抗病力强，是造林的优良树种。

1 材料与方法

1.1 试验材料

当香花槐植株发芽抽出枝条时，选择生长势强、无病虫害、健壮的植株，取其粗壮带有腋芽的枝条作为组织培养的外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 处理香花槐外植体 在香花槐外植体中选出粗壮且不带病虫害的枝条，用剪刀除去多余叶片，取其带有3个腋芽、长3～4 cm的茎段进行处理。处理a：修剪合适的茎段装到容器里，贴好标签，放到流水下冲洗30～60 min，然后拿到接种台上；处理b：用无菌水冲洗2～3 遍，用75%酒精浸泡20～30 s，用无菌水冲洗3～4 遍，用无菌滤纸吸干多余水分；处理c：用0.1%升汞灭菌，用无菌水冲洗4～5 遍，备用。

1.2.2 香花槐外植体初代培养 将处理后相对无菌的香花槐外植体放至已用紫外灯照射20～30 min的无菌超净工作台上，再用经加热杀菌的工具把处理过的香花槐截成带有1 个或2 个腋芽的茎段，插入初代培养基A1—A6中，见表1。标上代号和接种日期，放置培养室中培养。培养温度为24～26 ℃，光照14～16 h/d，光强1 000～3 000 lx，40 d后观察腋芽生长情况。

1.2.3 香花槐继代培养 当初代培养40 d、腋芽长到2 cm以上时，将其切成0.5 cm的小段，转入继代培养基B1—B6中培养30 d后，观察生长状况。

1.2.4 生根培养 当继代培养达到一定数量和要求时进行生根培养，即把试管苗切成适合的茎段，接到生根培养基中，20～30 d可生根，生根后植株便可移栽驯化。

2 结果与分析

2.1 灭菌时间的长短对外植体成活率的影响

利用0.1%升汞灭菌时，时间长短至关重要。为提高外植体成活率，减少污染率，分别进行7 种时间的灭菌试验，灭菌时间对香花槐成活率的影响见表2。

从表2可知：灭菌时间越长，灭菌效果越好且污染个数少，但褐化死亡个数增加，成活率降低；灭菌时间越短，污染个数增加，但褐化死亡个数减少；3.5～4.0 min时成活个数相对多，成活率达到45%。

2.2 初代培养基对愈伤组织及腋芽诱导的影响

初代培养时，经过消毒灭菌的外植体分别接在不同的培养基中，约15 d开始萌动，20 d后腋芽开萌动变化，40 d长出芽。观察香花槐外植体初代培养20 d后不同培养基上茎段的生长状况，见表3。

从表3 中可以看出，A6培养基中香花槐茎段上腋芽变绿芽，生长几率大，最先萌动且有愈伤组织形成，而其他几种培养基变化和长势均不如A6。

2.3 继代培养基对腋芽生长的影响

香花槐外植体初培40 d后，在不同继代培养基上的生长状况见表4。

由表4可知，A6培养基上茎段底部不但有健康的愈伤组织，且腋芽正常生长。这表明A6培养基是相对适合香花槐组织培养的初代培养基。

3 结语

1） 利用0.1%升汞处理香花槐外植体时，灭菌处理时间很重要。时间过长，灭菌效果虽好，但褐化死亡个数增加，成活率降低；灭菌时间短有利于减少褐化死亡个数，但灭菌不彻底，污染率升高。试验表明：3.5～4.0 min的灭菌效果较好，香花槐外植体成活个数相对多，成活率达45%。

2） 香花槐外植体初代培养基是其无性繁殖的关键。香花槐外植体在A1，A2，A3培养基上变化小且生长较缓慢，在A4，A5培养基上能形成大量透明状愈伤组织且腋芽呈现透明状玻璃化，无法形成健康植株，在A6培养基上生有正常的愈伤组织，且腋芽能正常生长。这表明，适合香花槐初代培养的培养基为A6，即MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+琼脂6 g。

3） 在香花槐继代增殖培养中，培养基的选择对香花槐增殖倍数、丛芽长势尤为重要。香花槐植株在B1，B2，B3培养基上有愈伤也有分化，但植株容易玻璃化，无法正常生长或停止生长，这（下转第29页）

（上接第26页）说明B1，B2，B3不宜作为香花槐继代培养基；在B4，B5，B6培养基中既可形成健康的愈伤组织也有分化，但相比较而言，B6培养基中香花槐植株生长更健康。这表明适宜香花槐培养的继代增殖培养基为B6，即MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+琼脂6 g。

参考文献

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