超高效液相-串联质谱法测定生鲜乳中26种药物残留量

2019-02-12张振宇

兽医导刊 2019年6期

关键词：硫酸钠小柱甲酸

张振宇柴磊李明

（1.济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000；2.焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454001）

1 实验部分

1.1 仪器

UPLC Xevo TQ MS超高效液相色谱-质谱联用仪（Waters公司）；MS 3 basic漩涡混合器（IKA公司）；高速冷冻离心机（香港力康公司）。

1.2 试剂与材料

乙腈、甲醇（fisher，色谱纯60），标准品全部购自于阿尔塔科技有限公司，标准液浓度为100μg/ml。Oasis PRiME HLB 固相萃取柱（Waters公司，60 mg/3ml）。盐包（安捷伦公司，4g无水硫酸钠，1g氯化钠）

1.3 色谱条件

色谱柱：CORTECS UPLC C18 Column，（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流动相A为乙腈；流动相B为0.2%甲酸水梯度洗脱；流速为0.4 ml/min；柱温为40℃；进样量为10μl。

1.4 质谱条件

电离方式：除酰胺醇类采用电喷雾负离子模式，其他均为电喷雾正离子模式；多反应监测模式（MRM）采集；毛细管电压2.7kV离子源温度为150℃；脱溶剂气温度为500℃；脱溶剂气流量为1000 L/h。

1.5 样品处理

称取样品2.00g，置于50ml离心管内，加适量的内标溶液，加盐包，再加入0.2%甲酸乙腈10ml，涡旋0.5min后，超声10min，震荡提取15min。12000r/min离心5min，取5ml上清液，过Oasis PRiME HLB柱，用3 ml0.2%甲酸乙腈过柱，收集全部流出液，于50℃下用温和氮气吹至近干。并用1 ml10%乙腈溶解，涡旋过0.22μm滤头后供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理优化

2.1.1 脱水剂的确定

用无水硫酸钠作为脱水剂，并加氯化钠等盐类，从而形成饱和盐溶液和提取剂乙腈的有机相分层，促使待测物从水相转移到有机相中。本研究优化了无水硫酸钠和氯化钠的用量，经过试验，乙提取后再加4g无水硫酸钠和1g氯化钠。

2.1.2 样品提取

实验中采用0.2%甲酸、1%甲酸和2%甲酸三种不同比例酸化乙腈相结合的方式沉淀蛋白并提取目标物，使用无水硫酸钠除去样品和提取液中的水分。同时比较了乙腈和样品比例为3：1、4：1 和5：1分别提取。用过实验表明当其中采取2%甲酸乙腈和样品比例为5：1 的蛋白质沉淀效果最好，但在此条件下对磺胺类回收率较低。用0.2%甲酸乙腈、5：1 比提取并沉淀蛋白的条件，其回收率可大幅提高。所以本实验选用该条件进行样品提取。

2.1.3 样品净化

本研究采用Oasis MCX、Oasis HLB、Oasis PRiME HLB 三种固相萃取小柱进行样品净化处理比较。Oasis MCX和Oasis HLB萃取小柱要求大比例水相的上样，这就要求把提取液中的乙腈置换成水相，而且各待测物在不同pH值下保留差异较大。而Oasis PRiME HLB 萃取小柱可以用提取液直接过柱，将干扰物被吸附于固相萃取柱中，对所有的待测物无吸附，同时在净化过程中也省去了溶剂转换的过程，简化了操作步骤。本实验采用Oasis PRiME HLB萃取小柱进行样品的净化。

2.2 方法学验证

2.2.1 基质标准曲线与检出限

为降低基质效应影响，保证检测结果可靠准确，采用基质标准进行定量，喹诺酮类、磺胺类、β-激动剂、四环素类为0.5，1，5，10，20，50 ng/ml酰胺醇类为0.1，0.2，0.5，2，5，10 ng/ml一系列标准溶液，得到相应的线性回归方程。结果表明：在此质量浓度范围内所有组分线性良好，相关系数R大于0.99。

2.2.2 回收率、精密度

制备1.0、5.0、10.0 μg/kg三个添加浓度的阳性生鲜乳，每个水平5 平行实验，三个水平样品的回收率在60～130%之间，RSD＜20%。方法的准确性和重复性良好。