刘国　王博　李劲松　司传平

[摘要]目的 探討慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中外周血中CD163和sCD163的临床表达水平。方法 选取2015年2月1日～2018年2月10日济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作为观察组，选取同期100例健康体检者作为对照组。比较两组的CD163、sCD163、CD163 mRNA表达水平及外周血单个核细胞表面的荧光强度，并分析sCD163与肝损伤关系。结果 观察组的CD163[（47.15±16.11）%]、sCD163水平[（33.45±10.25）%]均高于对照组[（16.11±6.23）、（15.11±6.17）%]，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组的荧光强度[（28.01±8.15）%]高于对照组的[（20.11±1.25）%]，差异有统计学意义（P<0.05）;观察组的CD163 mRNA表达量高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。血浆sCD163水平与终末期肝病模型（MELD）评分成正相关关系（r=4.652，P<0.05）;与乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平成正相关关系（r=5.521，P<0.05）;与人体胆红素数值无相关性（r=6.558，P>0.05）。结论 CD163和sCD163的临床表达在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中具有十分重要的作用，其检测方法简单直接，与疾病进展具有密切的相关性，值得在临床中应用推广。

[关键词]慢加急性乙型肝炎肝衰竭;表达差异;免疫组化P16蛋白

[中图分类号] R575.3     [文献标识码] A     [文章编号] 1674-4721（2019）11（c）-0070-04

Clinical expression of CD163 and sCD163 in patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure

LIU Guo1，2   WANG Bo3   LI Jin-song4   SI Chuan-ping2▲

1. School of Medicine and Life Sciences， Shandong Academy of Medical Sciences， Ji′nan University， Shandong Provinec， Jinan   250062， China; 2. Institute of Immunology and Molecular Medicine， Jining Medical College， Shandong Province， Jining   272067， China; 3. College of Forensic Medicine and Medical Laboratory， Jining Medical College， Shandong Province， Jining   272067， China; 4. Jining No.2 People′s Hospital， Shandong Province， Jining   272000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical expression levels of CD163 and sCD163 in peripheral blood of patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure. Methods One hundred patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure who were admitted to the School of Medicine and Life Sciences of Shandong Academy of Medical Sciences from February 1st， 2015 to February 10th， 2018， were selected as observation group. One hundred healthy people who underwent medical examinations at the same time were selected as control group. The expression levels of CD163， sCD163 and CD163 mRNA and the fluorescence intensity on the surface of peripheral blood mononuclear cells in the two groups were compared， and the relationship between sCD163 and liver injury was analyzed. Results The levels of CD163 （[47.15±16.11]%） and scd 163 （[33.45±10.25]%） in the observation group were higher than those in the control group （[16.11±6.23]， [15.11±6.17]%）， the differences were statistically significant （P<0.05）. The fluorescence intensity of the observation group （[28.01±8.15]%） was higher than that of the control group （[20.11±1.25]%）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of CD163 mRNA in the observation group was higher than that in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was a positive correlation between plasma sCD163 level and mode for end-stage liver disease （MELD） score （r=4.652， P<0.05）. There was a positive correlation with the level of hepatitis B virus nucleic acid （HBV-DNA） （r=5.521， P<0.05）. There was no correlation with bilirubin （r=6.558， P>0.05）. Conclusion The clinical expression of CD163 and sCD163 plays an very important role in patients with chronic and acute hepatitis B hepatic failure， its detection method is simple and direct， has close correlation with disease progression， and is worthy of clinical application and promotion.

[Key words] Chronic and acute hepatitis B hepatic failure; Differential expression; Immunohistochemical P16 protein

肝衰竭近年来发病率呈上升趋势，主要是指人体肝脏细胞受到破坏，从而引起人体代谢功能紊乱[1]。肝脏是人体十分重要器官，具有免疫防御、生物转化、合成、解毒等多种功能，当受到药物、乙醇、病毒等各项因素影响后，导致肝细胞发生大量坏死，从而引起患者发生失代偿或者自身严重障碍情况。随着我国人们经济水平的提高，进而导致其饮食习惯发生改变，增加我国肝衰竭的发生风险，若治疗不及时，将严重影响患者身心健康。而早期对其实施有效诊断十分必要，能够为其后期治疗提供准确依据，从而使其临床治愈率得到提高。目前临床常用的诊断方法较多，其中以凝血功能检测最为常见，但该方式存在较多不足，例如：操作十分复杂、对机体创伤大等，导致其应用受到限制[2-3]。CD163为特异性巨噬细胞标志物，通过清除人体游离血红蛋白，具有抗氧化损伤以及调节人体免疫作用，在人体炎症反应刺激下，其能和配体进行结合，促进上皮细胞黏附和单核细胞黏附，诱导人体炎性释放。sCD163主要是由人体膜细胞表面CD163脱落而来，其具有抑制T细胞增殖作用，在人体免疫调节方面也具有十分重要的作用。因此，本研究选取济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作为观察组，选取同期100例健康体检者作为对照组，对慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中CD163和sCD163的临床表达进行分析，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2015年2月1日～2018年2月10日济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院收治的100例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者作为观察组，同期选取100例健康体检者作为对照组。观察组中，年龄40～70岁，平均（55.21±1.05）岁;男50例，女50例。对照组中，年龄41～70岁，平均（56.21±1.15）岁;男51例，女49例。两组研究对象的年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经过医院医学伦理委员会审核批准。纳入标准：①所有患者和家属均知情同意研究;②能够进行良好沟通者;③临床各项资料完善，符合研究需求;④无严重器质性疾病以及慢性疾病。排除标准：①伴有严重脏器疾病者;②严重智力障碍或精神障碍者;③存在其他严重疾病者，如恶性肿瘤疾病、造血系统异常以及血液系统疾病等;④配合度较差，导致无法顺利完成研究者。

1.2方法

对两组研究对象分别进行CD163和sCD163的检测：收集患者血液，将其放置在肝素抗凝管中，上述血液离心分离出血浆后，放置在-20℃温度下进行保存，所有试剂检测方式均严格按照无菌操作进行，然后对CD163、sCD163、CD163 mRNA表达情况[4-5]进行检测。

所有的慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者核细胞表面石蜡标本均进行连续切片，切片厚度约为4 μm，采用苏木素伊红对石蜡切片进行染色，由此明确病变的存在，采用免疫组化P16对剩余切片进行染色，切片材料为：APES溶液制作的胶片，并进行二甲苯脱蜡操作，在预热温度为98℃的抗原修复液中将切片置入，并采用微波炉进行抗原修复操作，时间约为15 min，直至其呈冷却状态，应用PBS液实施冲洗，冲洗时间为5 min，后加入单克隆抗体，将其置于室温35 min，选择DAB显色，以苏木素复染，数秒钟后冲洗，梯度乙醇脱水，最后封片操作[6]。免疫组织化学判定：主要分为2个方面，即表达强度部位以及细胞中表达部位，以黄色或棕黄色染色作为阳性结果，且表达部位在人体细胞浆或细胞核位置，参照临床半定量标准判定表达强度，与患者阳性分布情况以及阳性细胞比例相结合，详细记录判读结果。

1.3观察指标

比较两组研究对象中的CD163、sCD163、CD163 mRNA表达水平及外周血单个核细胞表面的荧光强度，并分析sCD163与肝损伤关系。使用RT-PCR检测人体外周血单个核细胞中CD163 mRNA表达。

1.4统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检驗;相关性分析采用Pearson检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组研究对象中CD163、sCD163水平的比较

观察组的CD163、sCD163水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.2两组外周血单个核细胞表面的荧光强度的比较

观察组的荧光强度[（28.01±8.15）%]高于对照组[（20.11±1.25）%]，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.3两组CD163 mRNA表达情况的比较

观察组患者的CD163 mRNA表达量[（0.054±0.001）%]低于对照组[（0.019±0.002）%]，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.4血浆sCD163水平与肝损伤程度的相关性分析

血浆sCD163水平与终末期肝病模型（MELD）评分成正相关关系（r=4.652，P<0.05）;与乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平成正相关关系（r=5.521，P<0.05）;与人体胆红素数值无相关性（r=6.558，P>0.05）。

3讨论

有研究提示[7-8]，在人体重要组成部分中，肝脏具有重要地位，若机体一旦出现受损情况，易影响其各个功能，比如代谢转化、分泌、解毒、合成等。目前临床上将其分为两大类，即慢性肝衰竭或者急性肝衰竭。因此，本研究对慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中CD163和sCD163的临床表达进行分析。慢加急性乙型肝炎肝衰竭易损伤人体各个脏器，目前临床对于该疾病的治疗方式较多，虽然能够产生一定效果，但多数患者仍存在较高死亡率。研究认为，慢加急性乙型肝炎肝衰竭的治愈率与自身机体状况具有一定关联性，而正是由于该因素，导致该疾病在临床具有十分高的死亡率，严重威胁患者的生命安全[9]。而由于该疾病在临床诊断中具有复杂的临床表现，因此，需对其采取联合方式检测，如：血液学检测、B超诊断、生化检验、脑电图检测、微生物检测等，由此获得良好的诊断效果[10]。

研究显示[10]，CD163是血红蛋白受体，具有抑制人体炎症作用，在人体免疫反应过程中，CD163在抵抗炎症过程中具有十分重要的作用，而部分学者认为其与日自身炎症反应密切相关。本研究结果提示，该指标在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者机体中呈现升高趋势，从而证明该指标在人体免疫反应过程中具有十分重要的作用[10-11]。部分研究显示，在人体中只有小部分单核巨噬细胞表达该指标，并且CD163表达十分低，一般见于20%单核巨噬细胞表面中，但是该指标表达十分依赖人体巨噬细胞分化程度，在各项炎症因素影响过程中，人体细胞分化，CD163表达也呈现显著上升趋势[12]。在部分研究中，有学者发现sCD163表达和膜CD163表达则成反比关系，由于多种促炎因子、内毒素诱导下，膜CD163易脱落转化成为CD163，在感染影响下，膜表面的指标呈现下降趋势[13]。另外在人体外周血中CD163单核细胞十分少，其表达的量也较少，因此，本研究其表达量也较少。本研究结果提示，外周血单个核细胞中CD163的表达在慢加急性乙型肝炎肝衰竭中存在明显升高情况，组间存在统计学差异（P<0.05），但增高幅度相比血浆sCD163较低（P<0.05）。提示在机体炎症反应过程中，人体血浆sCD163能够快速脱落，而升高速度十分快，但CD163表达升高十分温和且缓慢。但根据临床研究显示，CD163在机体炎症因素的刺激下，其水平呈升高趋势[13-14]。另外，在人体外周血中表达CD163的单个核细胞十分少，其所表达的mRNA含量也较少，有研究在全身性系统性红斑狼疮疾病的皮肤标本内实施RT-PCR检测，在慢性炎症反应的表达中，CD163的表达呈明显升高的情况，与健康人群相比存在明显差异。随着我国内外对慢加急性乙型肝炎肝衰竭的研究不断深入，明确了CD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭的表达情况。研究发现，在急性肝衰竭患者中，sCD163呈明显升高，且sCD163数值相比对照组健康人群高达10倍左右，且与患者凝血指标、胆红素指标水平具有一定关联性，现已成为急性肝衰竭患者预后的重要检测标志物[15]。另外，研究发现，sCD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中升高的同时，在慢性乙型肝炎患者中也出现明显升高情况，提示sCD163在慢性乙型肝炎的发病中也占据重要地位。有学者通过分析肝炎患者的肝组织标本，显示CD163的mRNA水平显著升高，其升高程度与肝硬化程度成正相关性，提示其在疾病预后中占据重要位置[16]。总之，CD163、sCD163在人体肝脏炎性反应的免疫过程中具有重要地位，且本研究也明确了该说法，明确CD163、sCD163在慢加急性乙型肝炎肝衰竭中的重要地位[8-16]。本研究结果提示，观察组的CD163、sCD163水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组的荧光强度高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;观察组的CD163 mRNA表达高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;血浆sCD163水平和MELD评分成正相关关系（r=4.652，P<0.05），和HBV-DNA水平成正相关（r=5.521，P<0.05），与人体胆红素水平无相关性（r=6.558，P>0.05）。

综上所述，CD163和sCD163的临床表达在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中具有十分重要的作用，其检测方法简单直接，与疾病进展具有密切的相关性，值得在临床中应用推广。

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（收稿日期：2019-04-30   本文编辑：李二云）