王静 龚培尧 梁慧 刘杰

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，严重危害女性心身健康，甚至是生命，是全世界妇女死于癌症的主要原因之一[1]。但却是唯一可以早期发现及预防的癌症。随着近些年疾病检测筛查技术的发展，据有关文献报道[2]，基因甲基化与癌症具有很大关联性。PAX1是一种肿瘤抑制基因，当PAX1发生甲基化可以引发细胞癌化[3-4]。有部分研究已取得了效果[5]；大量临床试验证实，许多肿瘤相关基因启动子区域出现的甲基化异常改变，在宫颈癌发生发展过程中有重要作用，并且与宫颈癌发生密切相关[6]。甲基化是一种基因外修饰，DNA的一级结构序列不发生改变；但是甲基化的修饰在细胞发育，基因表达模式及基因组稳定性中起着至关重要的作用[7]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院妇科高危型HPV感染患者的宫颈脱落细胞及组织病理标本94例，进行Cervi-M宫颈癌甲基化基因检测，收集患者相关资料，进行回顾性分析；依据不同的病理分级结果情况，分为正常宫颈20例，低级别病变（宫颈上皮内瘤变，CINⅠ）23例，高级别病变（CINⅡ～Ⅲ）27例，宫颈癌（浸润性宫颈癌）24例。四组患者年龄差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

宫颈标本采集与保存：患者取截石位，常规消毒铺巾，取少量宫颈病变部位的细胞进行病理TCT检测，对CINIII级进一步病理活检，并行HPV检查、PAX1基因，4℃保存待用[8]；HPV检查：采用专用的毛刷刷取筛查者宫颈内的脱落细胞，将脱落细胞置于专用的固定液内，进行基因杂交获取二代产物进行HPV-DNA检测；阳性标准：HPV-DNA＞1.0 pg/L[9]；PAX1基因的甲基化检测：收集宫颈脱落细胞、宫颈DNA萃取、重亚硫酸盐转化、荧光定量PCR，参照生产公司的试剂盒说明书，分别萃取DNA与亚硫酸氢盐DNA后处理，然后进行PAX1基因转录，采用罗氏LightCycler480系统中的Taq Man探针系统对PAX1基因5'端和3'端分别用6-FAM和猝灭染料进行标记，对甲基化实时荧光聚合酶链反应，可测得甲基化PAX1基因[10]。

1.3 疗效判定/观察指标

分别记录高危型HPV检出阳性率、PAX1基因的甲基化检测阳性率及与病理检出结果的差异性，上述各组检测结果最终以病理学检查结果作为参照。

1.4 统计学分析

采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析，计量资料以（x-±s）表示，采用t 检验；计数资料以（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

所有高危型HPV患者依据不同的病理分级结果情况，分为正常宫颈20例，低级别病变（宫颈上皮内瘤变，CINⅠ）23例，高级别病变（CINⅡ～Ⅲ）27例，宫颈癌[浸润性宫颈癌（浸润性宫颈癌）]24例；病理检出结果为正常宫颈组织HPV阳性检出率35.0%，PAX1基因甲基化检出率0.0%；低级别病变HPV阳性检出率78.3%，PAX1基因甲基化检出率13.0%；高级别病变HPV阳性检出率81.5%，PAX1基因甲基化检出率29.6%；宫颈癌HPV阳性检出率83.3%，PAX1基因甲基化检出率100.0%。宫颈癌PAX1基因甲基化检出率高于HPV阳性检出率，比较存在差异具有统计意义，P＜0.05，结果详见表1。

3 讨论

本次研究结果：病理检出结果为正常宫颈组织HPV阳性检出率35.0%，PAX1基因甲基化检出率0.0%；低级别病变HPV阳性检出率78.3%，PAX1基因甲基化检出率13.0%；高级别病变HPV阳性检出率81.5%，PAX1基因甲基化检出率29.6%；宫颈癌HPV阳性检出率83.3%，PAX1基因甲基化检出率100.0%。宫颈癌PAX1基因甲基化检出率高于HPV阳性检出率。发现PXA1基因在宫颈癌中出现甲基化异常，PXA1基因在宫颈癌组织中甲基化异常频率为100.0%；揭示了PXA1基因在宫颈癌的早期发现中具有重要作用[11]。

目前国内常见的宫颈癌筛查方法主要有宫颈细胞学和人类乳头状瘤病毒联合检测，浸润性宫颈癌的患者发病率和病死率下降，极大程度上成功降低了宫颈癌的死亡率[12]，但在某些方面仍有局限性。TCT检测容易导致漏检、HPV检测存在假阳性较高等问题，细胞学检测宫颈上皮内瘤变Ⅲ的特异度高达83%～91%，灵敏度仅为44%～78%。Cervi-M宫颈癌基因甲基化检测技术方法可以较好的弥补前两者的不足。主要有如下特点：（1）能弥补TCT检测漏检率高、HPV检测假阳性高等目前国内常规宫颈癌筛查方法的不足；（2）可比常规TCT检测和阴道镜检更早发现宫颈细胞是否有癌前病变；（3）可为临床医生提供参考，更准确和有针对性的判断是否需要进一步的有创诊断和干预治疗措施，避免过度治疗；（4）在宫颈癌手术与治疗后的追踪监测中也有良好的预警作用。

综合上述，Cervi-M宫颈癌甲基化基因检测，进一步提高了治疗的准确率，可应用于宫颈癌早期筛查与检测，更准确的辅助临床诊断和采取对应的干预治疗措施。

表1 PAX1基因和HPV在不同病理分级中检出阳性率比较